【摘要】：近年來，性傳播泌尿生殖道感染(包括淋病和非淋菌性尿道炎)的發(fā)病率在我國逐年增加，尤其是非淋菌性尿道炎(nongonococcal urethritis，NGU)，由于致病病原體種類多，具有潛伏感染和無癥狀排菌等生物學(xué)特性，給人類公共健康帶來嚴(yán)重影響。 研究已證實(shí)淋病雙球菌、解脲脲原體、沙眼衣原體、人型支原體、生殖支原體、單純皰疹病毒Ⅰ(HSV-1)、單純皰疹病毒Ⅱ(HSV-2)、白念珠菌及陰道毛滴蟲為引起性傳播泌尿生殖道感染(Sexually Transmitted Urogenital Infections，STUI)的最常見病原體。 傳統(tǒng)的STUI病原學(xué)診斷實(shí)驗(yàn)室技術(shù)條件要求高。因此，建立一種能夠針對(duì)引起STUI的多種常見病原體同時(shí)快速檢測的方法，并用于指導(dǎo)臨床的診治很有必要。本研究旨在利用基因芯片技術(shù)，結(jié)合通用引物PCR(UPPCR)和多重PCR(MPCR)技術(shù)，建立同時(shí)快速檢測多種引起STUI常見病原體的方法。 第一章：檢測STUI常見病原體三對(duì)通用引物的設(shè)計(jì)、篩選及靶基因的確定。 首先將待檢測的9種目的病原體分為三類：病毒類(HSV-1、HSV-2)、細(xì)菌類(淋病雙球菌、解脲脲原體、沙眼衣原體、人型支原體、生殖支原體)及低級(jí)真核生物類(白念珠菌、陰道毛滴蟲)。在美國生物信息中心(NCBI)的GenBank數(shù)據(jù)庫中獲得目的基因(單純皰疹病毒1、2型的DNA聚合酶基因，，細(xì)菌類的16S rRNA基因，低級(jí)真核生物類的18S rRNA基因)的核苷酸序列，并進(jìn)行了BLASTn查詢分析。利用專業(yè)軟件Primer Premier 5.0和Oligo 6.67針對(duì)上述各目的基因，設(shè)計(jì)和篩選了三類通用引物，并了解了這些引物的所有動(dòng)力學(xué)特性(包括引物的長度、位置、PCR產(chǎn)物的長度、位置、Tm值、二級(jí)結(jié)構(gòu)、上下游引物的錯(cuò)配、3’端的穩(wěn)定性及GC含量等)。再用多重PCR技術(shù)，針對(duì)上述三類通用引物進(jìn)行設(shè)計(jì)，選擇動(dòng)力學(xué)性質(zhì)盡可能相近的引物對(duì)，并進(jìn)行不同引物及引物與產(chǎn)物之間的模擬雜交分析，優(yōu)化引物在同一反應(yīng)體系時(shí)的反應(yīng)參數(shù)。最終篩選出分別針對(duì)病毒類、細(xì)菌類、低級(jí)真核生物類的三對(duì)通用引物。獲得了不同引物對(duì)相應(yīng)的靶基因在GenBank數(shù)據(jù)庫的位置和序列。 第二章：檢測STUI常見病原體三對(duì)通用引物實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證及復(fù)合PCR的建立
【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R759

【參考文獻(xiàn)】

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1 劉愛英,孫建方,尹躍平,陳祥生,余艷華,張津平,徐敏,王書崎;基因芯片技術(shù)檢測生殖器潰瘍性性病病原體[J];中華皮膚科雜志;2004年05期

本文編號(hào)：2678889