【摘要】： 背景 白癜風(fēng)是一種常見的色素障礙性皮膚病，近些年發(fā)病率有明顯增加的趨勢，其病因及發(fā)病機(jī)理至今尚不明確。表皮黑素細(xì)胞主要被累及，毛囊內(nèi)的黑素細(xì)胞也可有一定程度的受累，迄今黑素細(xì)胞破壞的機(jī)制尚未完全闡明，目前有自身免疫學(xué)說、遺傳學(xué)說、神經(jīng)學(xué)說、黑素細(xì)胞學(xué)說和角質(zhì)形成細(xì)胞功能異常學(xué)說，但單一學(xué)說難以全面解釋清楚，目前認(rèn)為本病是一種多因素綜合作用導(dǎo)致的疾病。大多數(shù)的研究傾向于自身免疫學(xué)說，近些年組織病理研究顯示：白斑處表皮黑素細(xì)胞消失，活動(dòng)性白斑邊緣的真皮內(nèi)有淋巴細(xì)胞浸潤，另外許多學(xué)者用不同的方法證實(shí)白癜風(fēng)患者血清中含有抗黑素細(xì)胞的自身抗體，，且抗體滴度與病情活動(dòng)性密切相關(guān)。本課題組曾用免疫組化和丫啶橙/溴化乙錠染色法驗(yàn)證了白癜風(fēng)血清中存在抗黑素細(xì)胞IgM、I8G抗體及血清IgG介導(dǎo)的補(bǔ)體反應(yīng)對正常黑素細(xì)胞具有毒性作用。目前僅明確了其中幾種與白癜風(fēng)相關(guān)的黑素細(xì)胞胞漿抗原，如酪氨酸酶、酪氨酸酶相關(guān)蛋白1(TRP1)及酪氨酸酶相關(guān)蛋白2(TRP2)，胞膜抗原則一直未被明確。盡管自身免疫性疾病的病因目前仍無法闡明，根據(jù)免疫學(xué)有關(guān)理論，機(jī)體對自身成份失去免疫耐受性是一個(gè)重要的環(huán)節(jié)，而這種自身抗原一般為機(jī)體的正常成份，疾病的發(fā)生可能系淋巴細(xì)胞的“禁忌株”失禁忌，從而導(dǎo)致異常自身免疫效應(yīng)的B和/或T淋巴細(xì)胞克隆的出現(xiàn)。因此設(shè)法清 第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文 除識別相關(guān)抗原的B和／或T淋巴細(xì)胞克隆，有可能達(dá)到治療相關(guān)自身免 疫性疾病的目標(biāo)。 本課題組目前正在進(jìn)行白斑風(fēng)相關(guān)抗體識別人源性黑素細(xì)胞抗原的 。DNA克隆及表位確定等方面的研究，擬將克隆純化的表位肽段做成親合 層析柱吸附患者體內(nèi)的相關(guān)自身抗體，再將偶聯(lián)毒素的表位肽段注入體內(nèi) 清除識別該抗原的淋巴細(xì)胞克隆，從理論上可清除失禁忌的病理性淋巴細(xì) 胞株，從而達(dá)到治療白匣風(fēng)。 目的 檢測和分析白痰風(fēng)相關(guān)的黑素細(xì)胞膜抗原，初步純化目的抗 原，作抗原的活性測定，為篩選、克隆黑素細(xì)胞膜抗原及膜抗原蛋白質(zhì)測 序打下基礎(chǔ)。 方法 培養(yǎng)大量健康人黑素細(xì)胞（MC），裂解第六代黑素細(xì)胞，得到 可溶性黑素細(xì)胞抗原。同時(shí)活細(xì)胞ELISA法篩選高滴度白掇風(fēng)患者IgG 血清。而后用黑素細(xì)胞抗原和高滴度 IgG血清作蛋白印跡（Western Blot＊ 檢測與白掇風(fēng)自身抗體相結(jié)合的自身抗原是否存在，并分析其分子量及篩 選相對應(yīng)的IgG血清，為進(jìn)一步抗原的純化奠定基礎(chǔ)。biotinj利Hs生物 素標(biāo)記黑素細(xì)胞裂解產(chǎn)物，50mMNH4CI終止反應(yīng)，Protein A－Sepharose 預(yù)清除標(biāo)記的黑素細(xì)胞抗原，加入篩選血清與 Protein A七epharose進(jìn)行 免疫共沉淀，沉淀后的抗原抗體復(fù)合物煮沸后行SDS－PAGE電泳，免疫沉 淀復(fù)合物電印跡，在 NC膜上加 20mu加l的堿性磷酸酶標(biāo)記的親合素，最 后用化學(xué)發(fā)光法檢測及鑒定。 結(jié)果238份白瘦風(fēng)血清中，共獲1：200的高滴度陽性血清98例， 選取用于本研究的30份血清中，尋常型白瘦風(fēng)27例，其中活動(dòng)期26例、 穩(wěn)定期二例。節(jié)段型白癲風(fēng)3例，均處于活動(dòng)期。用高滴度抗正常人黑素 細(xì)胞膜抗原的白披風(fēng)血清做免疫印跡檢測分析，30例患者均有數(shù)個(gè)陽性 條帶，正常人血清對照組僅 1例（10％）出現(xiàn)陽性條帶，白瘦風(fēng)患者明顯 －3· 第四軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文 高于對照組什習(xí)1．00，AO．of人 白癬風(fēng)血清中抗正常人黑素細(xì)胞抗體 主要針對的抗原分子量為 150KD、90 I｛D、75 KI）、50 KI）、40個(gè)5 I（l，其 中陽性率最高的抗原分子量為 75 p搶3們，其次為 150KDO0們、90 I｛D u 人 40葉5 KDQ3肋、50 KD門 人另外結(jié)果分析發(fā)現(xiàn)陽性條帶的 分子量大小及單個(gè)條帶出現(xiàn)頻率與白癲風(fēng)分型、活動(dòng)性及皮損面積無相關(guān) 性。 以 oestern Blot檢測結(jié)果中篩選 10例高滴度血清。均為尋常型、活 動(dòng)期的白瘦風(fēng)患者，選取的血清在免疫印跡檢測中90KD和75KD的抗原條 帶都為陽性，正常人對照血清4份。免疫沉淀、免疫印跡、化學(xué)發(fā)光法檢 測后發(fā)現(xiàn)10例患者均有陽性條帶。血清抗體主要針對的抗原分子量為 150KD、90 I｛D、75 KD、60 KD，陽性條帶最多的抗原分子量為 90 KD（6 例）和 75KD（6例），其次為 150 KD（4例）、60KD（4例）和 200KD（2 例）。 結(jié)論 白掇風(fēng)患者血清中存在抗黑素細(xì)胞抗體，進(jìn)一步支持了自身 免疫學(xué)說。抗原的分子量約為150KD、90 KD、75 KD、50 KD、40－45 n。 而膜抗原分子量主要為 150KD、90 KD、75 KD，以往發(fā)現(xiàn)的一些小分子抗 原可能為大分子抗原的降解產(chǎn)物，通過免疫共沉淀初步純化了150KD、90 KD和75KD的抗原。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號】：R758.41

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

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2 謝忠;季素珍;沈麗玉;朱學(xué)駿;;白癜風(fēng)抗原的辨認(rèn)[J];中華皮膚科雜志;1995年04期

3 李志強(qiáng),劉榮卿,高天文,趙小東,陳金穆;白癜風(fēng)患者血清中抗黑素細(xì)胞膜表面抗原自身抗體的檢測[J];中華皮膚科雜志;2001年04期

本文編號：2653992