本文關鍵詞：青蒿琥酯對人皮膚增生性瘢痕上皮細胞增殖及TGF-β1、ITGB1、MMP-1表達的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：檢測青蒿琥酉(artesunate, ART)對體外培養(yǎng)的人皮膚增生性瘢痕上皮細胞增殖及轉化生長因子β1 (transforming growth factor-betal, TGF-β1)、整合素p1(mtegrin β1,ITGB1)、基質金屬蛋白酶-1(matrix metalloprotein-1, MMP-1)表達的影響,探討ART對瘢痕上皮細胞的影響。方法：1.收集行手術切除的皮膚增生性瘢痕組織,通過中性蛋白酶消化法揭取人皮膚增生性瘢痕表皮,胰酶消化成單個細胞后接種于細胞培養(yǎng)瓶內,倒置相差顯微鏡觀察細胞生長情況。利用胰酶消化時間差,去除成纖維細胞后獲得純度較高的上皮細胞細胞。鏡下觀察細胞形態(tài),采用抗細胞角蛋白及波形蛋白抗體免疫組化染色對所培養(yǎng)的細胞進行細胞來源鑒定。將分離純化獲得的瘢痕上皮細胞進行后續(xù)試驗。2.MTT實驗檢測青蒿琥酯干預24 h后對人皮膚增生性瘢痕上皮細胞增殖的影響。同時用倒置顯微鏡觀察青蒿琥酯作用后細胞形態(tài)的變化。3.熒光定量RT-PCR法檢測不同濃度青蒿琥酯對瘢痕上皮細胞TGF-β1、ITGB1、MMP-1 mRNA表達水平的影響。4. Western Blot法于蛋白層面檢測青蒿琥酯作用后上皮細胞TGF-β1及ITGB1表達情況。ELISA法檢測細胞培養(yǎng)上清液中MMP-1蛋白含量的變化。結果：1.瘢痕上皮細胞接種于細胞培養(yǎng)瓶內貼壁生長,倒置顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)的細胞多為多角形,細胞長滿時排列緊密,呈鋪路石樣。免疫組織化學抗角蛋白抗體染色呈陽性,抗波形蛋白抗體染色陰性。2.MTT檢測結果顯示,青蒿琥酯對細胞增殖有抑制作用,且呈現(xiàn)濃度依賴性。150μM濃度組與空白組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),其余組與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P0.01)。用藥組之間兩兩比較,除了150 μM濃度組與300 μM濃度組之間差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)外,其余差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。據(jù)此下述實驗設置的青蒿琥酯濃度組分別為：0、300、600,1200,2400gM。3.鏡下觀察發(fā)現(xiàn)青蒿琥酯作用后,細胞的形態(tài)發(fā)生不同程度變化,細胞出現(xiàn)皺縮,細胞變圓,胞漿變少,且隨著濃度升高變化越明顯。4.熒光定量RT-PCR檢測顯示青蒿琥酯作用后,人皮膚增生性瘢痕上皮細胞TGF-β1、ITGB1 mRNA表達水平呈下降趨勢,與空白對照組比較差異均有統(tǒng)計學差異(P0.05)；而MMP-1的mRNA表達則呈不同程度的上升,與空白對照組比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。各用藥組之間兩兩比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。5. Western Blot法檢測顯示：不同濃度青蒿琥酯作用后,瘢痕上皮細胞的TGF-β1、ITGB1的表達水平呈不同程度下降,300 μM濃度組與空白對照組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),其余組與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05),各用藥組之間兩兩比較,除300μM濃度組與600 μM濃度組ITGB 1表達差異無統(tǒng)計學意義外(P0.05),其余均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。6. ELISA法檢測顯示：不同濃度青蒿琥酯作用后,細胞培養(yǎng)上清液中MMP-1蛋白含量呈不同程度的上升,各濃度組與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。各用藥組之間兩兩比較,差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結論：1.通過酶消化法能成功獲得人皮膚增生性瘢痕上皮細胞,可經(jīng)胰酶消化去除雜質細胞從而獲得較純的上皮細胞。2.青蒿琥酯對體外培養(yǎng)的人皮膚增生性瘢痕上皮細胞增殖有抑制作用,并呈現(xiàn)濃度依賴性,對細胞的形態(tài)也有一定的影響。3.青蒿琥酯作用于人皮膚增生性瘢痕上皮細胞后,可于mRNA及蛋白水平下調TGF-p1和ITGB1的表達,同時上調MMP-1的表達并呈現(xiàn)濃度依賴性。上皮細胞TGF-β1、ITGB1、MMP-1表達的變化是否對真皮層及皮下組織的膠原及細胞外基質的合成、膠原的分解及組織纖維化有影響,還有待進一步研究。
【關鍵詞】：青蒿琥酯 皮膚 增生性瘢痕 上皮細胞 增殖 轉化生長因子β1 整合素β1 基質金屬蛋白酶1
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R751
【目錄】：

• 個人簡歷3-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-27
• 結果27-39
• 討論39-44
• 結論44-45
• 參考文獻45-50
• 附錄 英文縮略詞表50-51
• 綜述 皮膚上皮細胞參與創(chuàng)傷愈合及瘢痕形成的研究進展51-64
• 參考文獻58-64
• 致謝64-66
• 攻讀學位期間發(fā)表的學術論文66-67
• 附件67-73

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

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中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李戰(zhàn);青蒿琥酯對增生性瘢痕成纖維細胞增殖及膠原沉積的影響[D];廣西醫(yī)科大學;2014年

  本文關鍵詞：青蒿琥酯對人皮膚增生性瘢痕上皮細胞增殖及TGF-β1、ITGB1、MMP-1表達的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：264846