發(fā)布時間：2017-03-24 01:05

  本文關(guān)鍵詞：青蒿琥酯對人皮膚增生性瘢痕上皮細(xì)胞增殖及TGF-β1、ITGB1、MMP-1表達(dá)的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：檢測青蒿琥酉(artesunate, ART)對體外培養(yǎng)的人皮膚增生性瘢痕上皮細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)化生長因子β1 (transforming growth factor-betal, TGF-β1)、整合素p1(mtegrin β1,ITGB1)、基質(zhì)金屬蛋白酶-1(matrix metalloprotein-1, MMP-1)表達(dá)的影響,探討ART對瘢痕上皮細(xì)胞的影響。方法：1.收集行手術(shù)切除的皮膚增生性瘢痕組織,通過中性蛋白酶消化法揭取人皮膚增生性瘢痕表皮,胰酶消化成單個細(xì)胞后接種于細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi),倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況。利用胰酶消化時間差,去除成纖維細(xì)胞后獲得純度較高的上皮細(xì)胞細(xì)胞。鏡下觀察細(xì)胞形態(tài),采用抗細(xì)胞角蛋白及波形蛋白抗體免疫組化染色對所培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞來源鑒定。將分離純化獲得的瘢痕上皮細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。2.MTT實(shí)驗(yàn)檢測青蒿琥酯干預(yù)24 h后對人皮膚增生性瘢痕上皮細(xì)胞增殖的影響。同時用倒置顯微鏡觀察青蒿琥酯作用后細(xì)胞形態(tài)的變化。3.熒光定量RT-PCR法檢測不同濃度青蒿琥酯對瘢痕上皮細(xì)胞TGF-β1、ITGB1、MMP-1 mRNA表達(dá)水平的影響。4. Western Blot法于蛋白層面檢測青蒿琥酯作用后上皮細(xì)胞TGF-β1及ITGB1表達(dá)情況。ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中MMP-1蛋白含量的變化。結(jié)果：1.瘢痕上皮細(xì)胞接種于細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)貼壁生長,倒置顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)的細(xì)胞多為多角形,細(xì)胞長滿時排列緊密,呈鋪路石樣。免疫組織化學(xué)抗角蛋白抗體染色呈陽性,抗波形蛋白抗體染色陰性。2.MTT檢測結(jié)果顯示,青蒿琥酯對細(xì)胞增殖有抑制作用,且呈現(xiàn)濃度依賴性。150μM濃度組與空白組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其余組與對照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。用藥組之間兩兩比較,除了150 μM濃度組與300 μM濃度組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)外,其余差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。據(jù)此下述實(shí)驗(yàn)設(shè)置的青蒿琥酯濃度組分別為：0、300、600,1200,2400gM。3.鏡下觀察發(fā)現(xiàn)青蒿琥酯作用后,細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生不同程度變化,細(xì)胞出現(xiàn)皺縮,細(xì)胞變圓,胞漿變少,且隨著濃度升高變化越明顯。4.熒光定量RT-PCR檢測顯示青蒿琥酯作用后,人皮膚增生性瘢痕上皮細(xì)胞TGF-β1、ITGB1 mRNA表達(dá)水平呈下降趨勢,與空白對照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)；而MMP-1的mRNA表達(dá)則呈不同程度的上升,與空白對照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。各用藥組之間兩兩比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。5. Western Blot法檢測顯示：不同濃度青蒿琥酯作用后,瘢痕上皮細(xì)胞的TGF-β1、ITGB1的表達(dá)水平呈不同程度下降,300 μM濃度組與空白對照組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),其余組與對照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),各用藥組之間兩兩比較,除300μM濃度組與600 μM濃度組ITGB 1表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外(P0.05),其余均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6. ELISA法檢測顯示：不同濃度青蒿琥酯作用后,細(xì)胞培養(yǎng)上清液中MMP-1蛋白含量呈不同程度的上升,各濃度組與對照組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。各用藥組之間兩兩比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：1.通過酶消化法能成功獲得人皮膚增生性瘢痕上皮細(xì)胞,可經(jīng)胰酶消化去除雜質(zhì)細(xì)胞從而獲得較純的上皮細(xì)胞。2.青蒿琥酯對體外培養(yǎng)的人皮膚增生性瘢痕上皮細(xì)胞增殖有抑制作用,并呈現(xiàn)濃度依賴性,對細(xì)胞的形態(tài)也有一定的影響。3.青蒿琥酯作用于人皮膚增生性瘢痕上皮細(xì)胞后,可于mRNA及蛋白水平下調(diào)TGF-p1和ITGB1的表達(dá),同時上調(diào)MMP-1的表達(dá)并呈現(xiàn)濃度依賴性。上皮細(xì)胞TGF-β1、ITGB1、MMP-1表達(dá)的變化是否對真皮層及皮下組織的膠原及細(xì)胞外基質(zhì)的合成、膠原的分解及組織纖維化有影響,還有待進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：青蒿琥酯 皮膚 增生性瘢痕 上皮細(xì)胞 增殖 轉(zhuǎn)化生長因子β1 整合素β1 基質(zhì)金屬蛋白酶1
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R751
【目錄】：

• 個人簡歷3-5
• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-27
• 結(jié)果27-39
• 討論39-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-50
• 附錄 英文縮略詞表50-51
• 綜述 皮膚上皮細(xì)胞參與創(chuàng)傷愈合及瘢痕形成的研究進(jìn)展51-64
• 參考文獻(xiàn)58-64
• 致謝64-66
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文66-67
• 附件67-73

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前8條

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2 劉玲;陳敏亮;雷永紅;付小兵;解永學(xué);孫同柱;;表皮干細(xì)胞表型的成纖維樣細(xì)胞在瘢痕中的表達(dá)[J];中國美容醫(yī)學(xué);2009年05期

3 農(nóng)曉琳;陳洪;周諾;蒙寧;;皮膚瘢痕的基礎(chǔ)研究及其臨床治療[J];中國臨床康復(fù);2006年44期

4 趙志力,付小兵,孫同柱,陳偉,孫曉慶;成人正常皮膚和瘢痕組織表皮干細(xì)胞定位與表達(dá)特征的研究[J];中華燒傷雜志;2003年01期

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6 郭樹忠,張琳西,王臻,劉建波;培養(yǎng)的正常和瘢痕角質(zhì)形成細(xì)胞上清液對瘢痕成纖維細(xì)胞增殖和膠原合成的影響[J];中華整形外科雜志;2002年02期

7 張鵬;紀(jì)亮;李靜平;沈雷;陳永春;李云峰;;MMP-1和TIMP-1在人增生性瘢痕中的動態(tài)變化[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2010年11期

8 李戰(zhàn);農(nóng)曉琳;李佳荃;樸智;唐黎黎;;青蒿琥酯對增生性瘢痕成纖維細(xì)胞的抑制作用及機(jī)制探討[J];中國藥理學(xué)通報(bào);2014年07期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李戰(zhàn);青蒿琥酯對增生性瘢痕成纖維細(xì)胞增殖及膠原沉積的影響[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2014年

  本文關(guān)鍵詞：青蒿琥酯對人皮膚增生性瘢痕上皮細(xì)胞增殖及TGF-β1、ITGB1、MMP-1表達(dá)的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：264846