【摘要】： 黑素細(xì)胞是皮膚內(nèi)一種能產(chǎn)生黑素的樹(shù)突狀細(xì)胞，它來(lái)源于外胚層的神經(jīng)嵴，它和皮膚色素有關(guān)。近年來(lái)對(duì)黑素細(xì)胞的研究，特別是對(duì)其生物學(xué)特性及細(xì)胞生化方面的研究已經(jīng)較為深入，值得注意的是臨床上許多與黑素細(xì)胞病變或損傷的皮膚病均與免疫有著密切關(guān)系，加之黑素細(xì)胞本身又能表達(dá)某些重要的抗原分子，因此繼續(xù)深入探究黑素細(xì)胞的免疫學(xué)特性具有十分重要的意義。 有關(guān)黑素細(xì)胞免疫學(xué)研究的報(bào)道較少，，1992年Le Poole用免疫組化的方法就證實(shí)體外培養(yǎng)的黑素細(xì)胞表面可以表達(dá)MHC-Ⅰ／Ⅱ、黏附分子ICAM-1和Fc受體，并分泌IL-1、IL-6。黑素細(xì)胞培養(yǎng)基中加入IFN-γ、TNF-α、IL-1α還能顯著上調(diào)其ICAM-1表達(dá)。流式細(xì)胞術(shù)和RT-PCR進(jìn)一步證實(shí)黑素細(xì)胞自身能分泌炎癥因子IL-1α和IL-1β。 1993年，Poole等根據(jù)黑素細(xì)胞具有樹(shù)突狀外觀，在皮膚中占據(jù)了戰(zhàn)略性位置(strategic position)和具有吞噬功能而猜想它是否具有抗原遞呈的能力。進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)的確證實(shí)：體外培養(yǎng)的人黑素細(xì)胞經(jīng)IFN-γ處理后，能將分枝桿菌HSP 65Kda蛋白和完整的麻風(fēng)桿菌超聲粉碎混合物以抗原特異性和HLA-Ⅱ限制性方式傳遞給T細(xì)胞，并激發(fā)其增殖。另外，經(jīng)以上抗原刺激后的T細(xì)胞與黑素細(xì)胞再次作用，也能以HLA-Ⅱ限制性方式刺激T細(xì)胞的克隆性活化。雖然Poole并未對(duì)其發(fā)生機(jī)理進(jìn)行探討，但是在某種意義上，根據(jù)他的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，可以推測(cè)黑素細(xì)胞可能是一種具有抗原遞呈功能的異質(zhì)性APC。 本研究的第一部分：目的為探討γ-干擾素(IFN-γ)體外誘導(dǎo)人黑素細(xì)胞表面CD40分子的表達(dá)及其意義。方法采用常規(guī) 南京醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文 分離培養(yǎng)人黑素細(xì)胞，流式細(xì)胞儀測(cè)定 uN－Y處理前后細(xì)胞表 面 CD4 0等免疫分子表達(dá)；混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)評(píng)價(jià)黑素細(xì)胞對(duì)同 種異體T淋巴細(xì)胞的刺激能力；ELISA檢測(cè)培養(yǎng)上清u書(shū)、IL＜0、 L十2的濃度。結(jié)果為體外培養(yǎng)的人黑素細(xì)胞表面表達(dá)少量m們 分子；不同濃度的 Y－干擾素（IFN－Y）處理黑素細(xì)胞 24h，48h，72h后，能顯著促進(jìn)其 CD40的上調(diào)（p＜0．01），且 24h 處理組的黑素細(xì)胞CD4 0的表達(dá)量和rN－V的濃度呈直線相關(guān)。 經(jīng) IFN－Y誘導(dǎo)后的黑素細(xì)胞形態(tài)有所變化，刺激同種異體淋巴 細(xì)胞的能 力也顯著增力。，3 0 OIU／mllF N一 Y處理的 黑素細(xì)胞 7 2 ，J、時(shí)刺激指數(shù)門(mén)）可達(dá)到峰值。黑素 i田胞經(jīng) r剛 －Y作用后， 培養(yǎng)上清中I卜12水平明顯增加（pJ．05）；而幾億、幾葉0的 濃度無(wú)變化U叩．05）。經(jīng) N卜y預(yù)處理的黑素細(xì)胞經(jīng) 沈MOL 配基化后，青 顯著上調(diào)CDS 0、ICAM－1（P＜0．01）和HLA刁R （pJ．05），且這種作用能被特異性的CD40L的單克隆抗體所阻 斷。因此，IFN－Y體卜能夠誘導(dǎo)黑素細(xì)胞功能性地表達(dá)CD40分 子及增加對(duì)淋巴細(xì)胞的刺激能力，這對(duì)于全面認(rèn)識(shí)黑素細(xì)胞在細(xì) 胞免疫應(yīng)答中的作用具有重要的意義，CD叩分子上調(diào)后，黑素 細(xì)胞可能不經(jīng)過(guò) CD4咋 胞而直接刺激活化0＋的殺傷性 T細(xì)胞 （CTL）。 業(yè)已證實(shí)，蘆答粗提物及蘆答素單體對(duì)蘑菇酪氨酸酶活性可 有明顯的抑制作用“’‘’，為了進(jìn)一步在細(xì)胞及分子水平研究其美 白機(jī)制，我們?cè)谝酝难芯炕A(chǔ)上，觀察了蘆答素對(duì) 啪1 an叫 鼠黑素細(xì)胞株的黑素生成及其相關(guān)基困—一酪氨酸酶相關(guān)蛋白 TRP＜，TRP刁的。RNA表達(dá)水平的影響，該研究對(duì)蘆菩素的實(shí)際 應(yīng)用開(kāi)發(fā)具有理論意義。 實(shí)臉＝旨在研究蘆葵素對(duì)Me an叫 鼠黑素細(xì)胞株黑素生成 及其相關(guān)基因表達(dá)的影響。方法為分別測(cè)定不同濃度的蘆菩素作 用后的Me anA鼠黑素細(xì)胞株細(xì)胞增殖率、酪氨酸酶含量及黑素 量變化，逆轉(zhuǎn)錄盯R（RT－PCR）測(cè)定酪氨酸酶相 關(guān)蛋白u(yù)P－1和 兆卜2 的表達(dá)，并與相應(yīng)濃度的氫眼比較。結(jié)果如下0．01 mm引兒J。引兒的蘆菩素對(duì)黑素細(xì)胞的增殖率無(wú)影響，蘆菩素 可顯著抑制 Me an叫的酪氨酸酶活性和黑素量，抑制作用隨蘆菩 5 南京醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文 素的濃度升高而增加，0．linml／L蘆菩素處理的Me fan叫的酪氨 酸酶抑 制率及黑素量與 0．lp mo ／L 的氫酉昆相 當(dāng)（P＞0．0 5）二 蘆 菩素還能顯著下調(diào)叩P一1和叩P一2 mRNA的表達(dá)水平（P＜0．01）， 但叩P葉和叩P刁的變化和酪氨酸酶及黑素量的變化不平行， O．01 mmol幾 蘆菩素和0．01 pmol兒氫醒作用才 當(dāng)。結(jié)論：蘆菩 素顯著抑制Me an－a 的酪氨酸酶活性、黑素量和叩P－UTRP－2 mRNA 的表達(dá)水平，直接測(cè)定黑素細(xì)胞酪氨酸酶濃度和黑素量比 檢測(cè)叩P－UTRP－2 mRNA更能確切地反映蘆菩素對(duì)黑素i田胞的影 ，向。
【圖文】：

11111PMTZLOGPMTZLOG圖1.未經(jīng)IFN一Y刺激的黑素細(xì)胞表面CD40分.加入不同的濃度IFN一v，分別刺激24h，48h，72h結(jié)果如圖2。由該圖可知，黑素細(xì)胞經(jīng)誘導(dǎo)能顯表達(dá)(p<0.01):300IU/mlIFN一v刺激72h后CD，加入rhTNF一a或rhEPO的對(duì)照組CD40表達(dá)量與明顯差別(P>0.05)。:N一r;N一r

A49O圖1蘆薈素、氫醒對(duì)Melan一a鼠黑素細(xì)胞增殖的影響薈素對(duì)酪氨酸酶活性的影響:不同濃度的a72h后，測(cè)定各組細(xì)胞酪氨酸酶活性，結(jié)知:各濃度的蘆薈素可顯著抑制Me1an一a制作用隨蘆薈素的濃度升高而增加(Y=52.6，p<0.01)0.lmmol/L的蘆薈素對(duì)酪氨酸ol/L的氫酸相當(dāng)(p>0.05);而lmm。l/L及素對(duì)酪氨酸酶的抑制作用分別不及1林m。1/氫醒(P<0.01)。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號(hào)】：R751

【參考文獻(xiàn)】

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1 賈季o

本文編號(hào)：2647017