發(fā)布時間：2020-05-01 20:15

【摘要】： 黑素細胞是皮膚內(nèi)一種能產(chǎn)生黑素的樹突狀細胞，它來源于外胚層的神經(jīng)嵴，它和皮膚色素有關(guān)。近年來對黑素細胞的研究，特別是對其生物學特性及細胞生化方面的研究已經(jīng)較為深入，值得注意的是臨床上許多與黑素細胞病變或損傷的皮膚病均與免疫有著密切關(guān)系，加之黑素細胞本身又能表達某些重要的抗原分子，因此繼續(xù)深入探究黑素細胞的免疫學特性具有十分重要的意義。 有關(guān)黑素細胞免疫學研究的報道較少，，1992年Le Poole用免疫組化的方法就證實體外培養(yǎng)的黑素細胞表面可以表達MHC-Ⅰ／Ⅱ、黏附分子ICAM-1和Fc受體，并分泌IL-1、IL-6。黑素細胞培養(yǎng)基中加入IFN-γ、TNF-α、IL-1α還能顯著上調(diào)其ICAM-1表達。流式細胞術(shù)和RT-PCR進一步證實黑素細胞自身能分泌炎癥因子IL-1α和IL-1β。 1993年，Poole等根據(jù)黑素細胞具有樹突狀外觀，在皮膚中占據(jù)了戰(zhàn)略性位置(strategic position)和具有吞噬功能而猜想它是否具有抗原遞呈的能力。進一步的實驗的確證實：體外培養(yǎng)的人黑素細胞經(jīng)IFN-γ處理后，能將分枝桿菌HSP 65Kda蛋白和完整的麻風桿菌超聲粉碎混合物以抗原特異性和HLA-Ⅱ限制性方式傳遞給T細胞，并激發(fā)其增殖。另外，經(jīng)以上抗原刺激后的T細胞與黑素細胞再次作用，也能以HLA-Ⅱ限制性方式刺激T細胞的克隆性活化。雖然Poole并未對其發(fā)生機理進行探討，但是在某種意義上，根據(jù)他的實驗結(jié)果，可以推測黑素細胞可能是一種具有抗原遞呈功能的異質(zhì)性APC。 本研究的第一部分：目的為探討γ-干擾素(IFN-γ)體外誘導(dǎo)人黑素細胞表面CD40分子的表達及其意義。方法采用常規(guī) 南京醫(yī)科大學博士學位論文 分離培養(yǎng)人黑素細胞，流式細胞儀測定 uN－Y處理前后細胞表 面 CD4 0等免疫分子表達；混合淋巴細胞反應(yīng)評價黑素細胞對同 種異體T淋巴細胞的刺激能力；ELISA檢測培養(yǎng)上清u書、IL＜0、 L十2的濃度。結(jié)果為體外培養(yǎng)的人黑素細胞表面表達少量m們 分子；不同濃度的 Y－干擾素（IFN－Y）處理黑素細胞 24h，48h，72h后，能顯著促進其 CD40的上調(diào)（p＜0．01），且 24h 處理組的黑素細胞CD4 0的表達量和rN－V的濃度呈直線相關(guān)。 經(jīng) IFN－Y誘導(dǎo)后的黑素細胞形態(tài)有所變化，刺激同種異體淋巴 細胞的能 力也顯著增力。，3 0 OIU／mllF N一 Y處理的 黑素細胞 7 2 ，J、時刺激指數(shù)門）可達到峰值。黑素 i田胞經(jīng) r剛 －Y作用后， 培養(yǎng)上清中I卜12水平明顯增加（pJ．05）；而幾億、幾葉0的 濃度無變化U叩．05）。經(jīng) N卜y預(yù)處理的黑素細胞經(jīng) 沈MOL 配基化后，青 顯著上調(diào)CDS 0、ICAM－1（P＜0．01）和HLA刁R （pJ．05），且這種作用能被特異性的CD40L的單克隆抗體所阻 斷。因此，IFN－Y體卜能夠誘導(dǎo)黑素細胞功能性地表達CD40分 子及增加對淋巴細胞的刺激能力，這對于全面認識黑素細胞在細 胞免疫應(yīng)答中的作用具有重要的意義，CD叩分子上調(diào)后，黑素 細胞可能不經(jīng)過 CD4咋 胞而直接刺激活化0＋的殺傷性 T細胞 （CTL）。 業(yè)已證實，蘆答粗提物及蘆答素單體對蘑菇酪氨酸酶活性可 有明顯的抑制作用“’‘’，為了進一步在細胞及分子水平研究其美 白機制，我們在以往的研究基礎(chǔ)上，觀察了蘆答素對 啪1 an叫 鼠黑素細胞株的黑素生成及其相關(guān)基困—一酪氨酸酶相關(guān)蛋白 TRP＜，TRP刁的。RNA表達水平的影響，該研究對蘆菩素的實際 應(yīng)用開發(fā)具有理論意義。 實臉＝旨在研究蘆葵素對Me an叫 鼠黑素細胞株黑素生成 及其相關(guān)基因表達的影響。方法為分別測定不同濃度的蘆菩素作 用后的Me anA鼠黑素細胞株細胞增殖率、酪氨酸酶含量及黑素 量變化，逆轉(zhuǎn)錄盯R（RT－PCR）測定酪氨酸酶相 關(guān)蛋白uP－1和 兆卜2 的表達，并與相應(yīng)濃度的氫眼比較。結(jié)果如下0．01 mm引兒J。引兒的蘆菩素對黑素細胞的增殖率無影響，蘆菩素 可顯著抑制 Me an叫的酪氨酸酶活性和黑素量，抑制作用隨蘆菩 5 南京醫(yī)科大學博士學位論文 素的濃度升高而增加，0．linml／L蘆菩素處理的Me fan叫的酪氨 酸酶抑 制率及黑素量與 0．lp mo ／L 的氫酉昆相 當（P＞0．0 5）二 蘆 菩素還能顯著下調(diào)叩P一1和叩P一2 mRNA的表達水平（P＜0．01）， 但叩P葉和叩P刁的變化和酪氨酸酶及黑素量的變化不平行， O．01 mmol幾 蘆菩素和0．01 pmol兒氫醒作用才 當。結(jié)論：蘆菩 素顯著抑制Me an－a 的酪氨酸酶活性、黑素量和叩P－UTRP－2 mRNA 的表達水平，直接測定黑素細胞酪氨酸酶濃度和黑素量比 檢測叩P－UTRP－2 mRNA更能確切地反映蘆菩素對黑素i田胞的影 ，向。
【圖文】：

11111PMTZLOGPMTZLOG圖1.未經(jīng)IFN一Y刺激的黑素細胞表面CD40分.加入不同的濃度IFN一v，分別刺激24h，48h，72h結(jié)果如圖2。由該圖可知，黑素細胞經(jīng)誘導(dǎo)能顯表達(p<0.01):300IU/mlIFN一v刺激72h后CD，加入rhTNF一a或rhEPO的對照組CD40表達量與明顯差別(P>0.05)。:N一r;N一r

A49O圖1蘆薈素、氫醒對Melan一a鼠黑素細胞增殖的影響薈素對酪氨酸酶活性的影響:不同濃度的a72h后，測定各組細胞酪氨酸酶活性，結(jié)知:各濃度的蘆薈素可顯著抑制Me1an一a制作用隨蘆薈素的濃度升高而增加(Y=52.6，p<0.01)0.lmmol/L的蘆薈素對酪氨酸ol/L的氫酸相當(p>0.05);而lmm。l/L及素對酪氨酸酶的抑制作用分別不及1林m。1/氫醒(P<0.01)。
【學位授予單位】：南京醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2003
【分類號】：R751

【參考文獻】

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1 賈季o

本文編號：2647017