【摘要】：Langerhans細(xì)胞(LC)是表皮重要的抗原遞呈細(xì)胞,在調(diào)節(jié)皮膚免疫應(yīng)答中具有關(guān)鍵作用。LCs的發(fā)育、分化及其在感知外界環(huán)境刺激中所發(fā)揮的功能尚不十分明確,本課題借助臍血CD34+細(xì)胞來(lái)源LC模型,研究LCs的分化特征及對(duì)皮膚菌群代謝產(chǎn)物的應(yīng)答反應(yīng),主要分為兩大部分。在第一部分研究中,我們針對(duì)臍血來(lái)源LCs衍生中出現(xiàn)的CD1a+CD207-、CD1a+CD207lo和CD1ahiCD207hi三個(gè)亞群,采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)和分析不同亞群的表型分子,初步發(fā)現(xiàn)由CD1a+CD207-DCs分化而來(lái)的CD1a+CD207loLCs和CD1ahiCD207hiLCs分別表現(xiàn)出皮膚定居LC(cLC)和遷移LC(mLC)樣的表型和功能特征。借助戶塵螨抗原Derp2刺激體系,通過(guò)激光共聚焦共定位和流式檢測(cè)明確了 CD207介導(dǎo)LCs對(duì)Derp2的特異性結(jié)合和吞噬,進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)CD207hiLCs在抗原識(shí)別和攝取中的主導(dǎo)作用。我們同時(shí)對(duì)臍血來(lái)源LCs進(jìn)行單細(xì)胞測(cè)序分析,在轉(zhuǎn)錄組水平證實(shí)LC群體的異質(zhì)性;通過(guò)聚類分析將LCs分為CD207+Type1 LCs和CD207lo/-Type2 LCs兩大類群,針對(duì)差異表達(dá)基因的分析提示兩群LCs分別具有不同的功能,與流式分群鑒定的CD207hiLCs和CD207loLCs存在對(duì)應(yīng)關(guān)系;CD207+Type1 LCs和CD207lo/-Type2 LCs的分化分別受轉(zhuǎn)錄因子PU.1和Id2的調(diào)控。本研究在轉(zhuǎn)錄組和蛋白水平揭示了臍血來(lái)源LC的異質(zhì)性,所發(fā)現(xiàn)的具有不同表型和功能特征的LC亞群有助于我們更好的研究LC的發(fā)育、分化和功能。特應(yīng)性皮炎(AD)是常見(jiàn)的慢性復(fù)發(fā)性炎癥性皮膚病,菌群及其代謝產(chǎn)物參與調(diào)節(jié)AD發(fā)病。我們前期發(fā)現(xiàn)AD患者皮膚表面菌群代謝產(chǎn)物吲哚-3-甲醛(IAId)濃度明顯降低。IAId參與調(diào)控皮膚炎癥的細(xì)胞和分子機(jī)制尚不完全明確,在第二部分研究中,我們利用臍血LC模型探索IAId通過(guò)LCs調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的作用和機(jī)制。利用流式、RT-qPCR和ELISA方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)IAId可誘導(dǎo)LCs表面成熟活化標(biāo)志物表達(dá)升高,合成分泌IL-12p70和抑制性細(xì)胞因子IL-10,下調(diào)促炎因子TNF-α和IL-4的表達(dá)。在LC-CD4+T細(xì)胞共培養(yǎng)體系中,通過(guò)流式和CBA方法檢測(cè)CD4+T細(xì)胞增殖和極化情況,發(fā)現(xiàn)IAId活化后的LCs抑制T細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)IL-10和IFN-y分泌,抑制IL-6產(chǎn)生,平衡Th1/Th2反應(yīng)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)IAId可引起芳香烴受體(AhR)靶基因CYPIA1、CYPIB1和免疫抑制酶吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)表達(dá)升高,抑制AhR活化可降低IL-10和IL-10受體表達(dá),表明AhR通路是IAId發(fā)揮作用的關(guān)鍵途徑。IAId還可在mRNA和蛋白水平下調(diào)高親和力IgE受體(FcεRI)的表達(dá),參與發(fā)揮負(fù)向調(diào)節(jié)作用。通過(guò)AhR抑制劑和小干擾RNA轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn),以及IL-10激活和阻斷實(shí)驗(yàn),我們初步明確AhR的活化是調(diào)控FcεRI表達(dá)的主要機(jī)制。此外,免疫共沉淀結(jié)果表明IAId還可增強(qiáng)FcεRI泛素化水平,從而加速蛋白降解。我們首次從LC角度研究菌群代謝產(chǎn)物IAId參與調(diào)節(jié)免疫炎癥的作用和機(jī)制,有望為通過(guò)調(diào)控皮膚菌群代謝產(chǎn)物來(lái)治療AD等皮膚病提供新思路。
【圖文】：

邐北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文邐逡逑種ＤＣ亞群始終存在，且相對(duì)比例發(fā)生變化，ＣＤｌａ＋ＣＤ２０７＿ＤＣｓ比例逐漸減少，而逡逑ＣＤｌａ＋ＣＤ２０７ｌＱＬＣｓ和ＣＤｌａｈｉＣＤ２０７ｈｉＬＣｓ比例逐漸增加，至誘導(dǎo)后期逡逑ＣＤｌａ＋ＣＤ２０７ｌａＬＣｓ分群更加明顯。逡逑

４．２不同ＤＣ亞群的表型特征：逡逑流式細(xì)胞儀檢測(cè)誘導(dǎo)至１２？１５天的不同ＤＣ亞群細(xì)胞表面８?jìng)�(gè)關(guān)鍵的ＤＣ相關(guān)逡逑分子標(biāo)記，根據(jù)圖２畫(huà)門(mén)方法分別分析３種ＤＣ亞群ＣＤ邋１邋ａ＋ＣＤ２０ＴＤＣ邋（簡(jiǎn)稱Ｎｅｇ）、逡逑ＣＤｌａ＋ＣＤ２０７ｌｏＬＣ邋（簡(jiǎn)稱邋Ｌｏｗ）和邋ＣＤｌａｈｉＣＤ２０７ｈｉＬＣ邋（簡(jiǎn)稱邋Ｈｉｇｈ）上表型分子的表達(dá)逡逑情況。ＣＤｌｌｃ、ＥｐＣＡＭ、Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ、ＴＬＲ－２、ＴＬＲ－４邋和邋ＦｃｓＲＩ邋在邋３邋個(gè)亞群中均有不逡逑同程度的表達(dá)，，其中ＣＤｌｌｃ在Ｎｅｇ群表達(dá)較高，Ｈｉｇｈ群表達(dá)最低（ＮｅｇｖｓＨｉｇｈ：逡逑尸＜０．０５）；邋ＥｐＣＡＭ在Ｈｉｇｈ群較高表達(dá)，Ｌｏｗ群表達(dá)較Ｈｉｇｈ群減少，Ｎｅｇ群呈低逡逑表達(dá)（ＮｅｇｖｓＨｉｇｈ：尸＜０．０１；邋ＬｏｗｖｓＨｉｇｈ：尸＜０．０１）；邋Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ邋在邋Ｈｉｇｈ邋群呈邋９０％逡逑以上高表達(dá)，在Ｌｏｗ群和Ｎｅｇ群上表達(dá)依次減弱（Ｎｅｇ邋ｖｓ邋Ｈｉｇｈ：邋／＾Ｏ．ＯＳ；邋Ｌｏｗ邋ｖｓ逡逑Ｈｉｇｈ：尸＜０．０５）；邋ＴＬＲ－２在Ｎｅｇ群和Ｌｏｗ群均表達(dá)較高，Ｈｉｇｈ群表達(dá)較低，但ＭＦＩ逡逑水平無(wú)顯著差異；ＴＬＲ－４在Ｎｅｇ、Ｌｏｗ和Ｈｉｇｈ群表達(dá)呈逐漸下降趨勢(shì)，Ｈｉｇｈ群呈逡逑低表達(dá)，但ＭＦＩ水平無(wú)顯著差異；ＦｃｓＲＩ在Ｎｅｇ、Ｌｏｗ和Ｈｉｇｈ群表達(dá)逐漸升高，在逡逑Ｎｅｇ群表達(dá)較低
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R751

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本文編號(hào)：2644881