發(fā)布時間：2020-04-14 05:48

【摘要】： 淋病是一種世界上廣泛流行的性傳播性疾病(STD)。我國近20年來淋病發(fā)病人數(shù)逐年上升，淋病的廣泛傳播已嚴(yán)重危害人類的身心健康和社會穩(wěn)定。目前控制淋病傳播尚缺乏有效措施，這主要與不能早期診斷有一定關(guān)系。因此，發(fā)展方便、快速、準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)室診斷方法，有利于盡早消滅傳染源、切斷傳播途徑、控制淋病蔓延。 目前淋病實(shí)驗(yàn)室檢查方法包括涂片、培養(yǎng)、白細(xì)胞酯酶試驗(yàn)(LET)、抗原檢測及基因診斷等，但主要依靠的還是涂片和培養(yǎng)。現(xiàn)有的各種淋病實(shí)驗(yàn)室檢查方法仍存在一定的局限性，比如：涂片易發(fā)生誤診和漏診，此類失誤尤多見于女性；培養(yǎng)法雖然是診斷淋病的“金標(biāo)準(zhǔn)”，準(zhǔn)確可靠，但是方法繁瑣，，因淋病奈瑟氏菌(NG)的營養(yǎng)要求高、理化因素抵抗力差、離體很快死亡并自溶而影響陽性率，不易作出早期診斷，且不適用于基層單位普查；LET缺乏特異性；抗原檢測因淋球菌大部分表面抗原的抗原性不穩(wěn)定而往往使檢測失效，尚不推薦用于常規(guī)淋病實(shí)驗(yàn)室診斷；基因診斷法需要嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)條件，極易有假陽性。因此，在淋病實(shí)驗(yàn)室診斷中，傳統(tǒng)培養(yǎng)法較為繁瑣且當(dāng)時不能出結(jié)果，其他非培養(yǎng)方法均不夠理想，缺乏一種方便、快速、準(zhǔn)確、廉價的檢測手段，能在特別是患病率低的人群中推廣應(yīng)用。 理論上抗原檢測能檢查細(xì)菌性感染性疾病，如淋病、結(jié)核等。但是淋 20024E－江大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩土論文 球菌的許多表面抗原的抗原性不穩(wěn)定，如菌毛、脂多糖及外膜蛋白11和 Ill在感染過程中易發(fā)生變異或丟失，以逃邂機(jī)體的免疫攻擊，這樣也使 得抗原檢測往往失效，效果不甚理想。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)只有表面抗原PI蛋白 的抗原牲是穩(wěn)定的。蛋白 1叩I）為主要的淋球菌外膜蛋白，占外膜蛋白 的6be，有PIA和PIB兩種結(jié)構(gòu)形式，根據(jù)其特異的單克隆抗體進(jìn)行分型， 可分為許多血清型。PI蛋白在淋球菌表面形成三維立體結(jié)構(gòu)，構(gòu)成跨膜 通道，與細(xì)菌的營養(yǎng)物質(zhì)的運(yùn)輸、信息傳導(dǎo)以及感染時致病有關(guān)。許多資 料表明蛋白PI在自然感染過程中抗原性質(zhì)穩(wěn)定，有較強(qiáng)的免疫性。但是 目前對自行克隆、GST系統(tǒng)表達(dá)并純化而來的PI蛋白的研究只停留在體 外試驗(yàn)上，該蛋白在機(jī)體內(nèi)免疫反應(yīng)中的作用尚有持進(jìn)一步研究． 本實(shí)驗(yàn)以由自行克隆、表達(dá)并純化的PI蛋白為抗原進(jìn)行研究，從而 了解該蛋白抗原在動物體內(nèi)的免疫性的強(qiáng)弱情況，希望找到一種新的快速 實(shí)用的實(shí)驗(yàn)室診斷方法，并初步判斷蛋白PI能否用來研制疫苗。 材料和方法 一 免疫對象 浙江家兔：家兔均雄性，體重約2．SKg，共3只。 二 臨床資料 包括淋病患者和正常對照組。所有淋病患者標(biāo)本均來自浙江大學(xué)醫(yī)學(xué) 院附屬邵逸醫(yī)院及第二醫(yī)院皮膚性病科門診患者，共35例，其中成年男 性29例，年齡范圍22－54歲；成年女性5例，年齡范圍18－58歲；兒童 互例，5歲。正常對照組均來自邵逸夫皮膚性病科門診的非淋病患者，共 30例，其中成年男性20例，年齡范圍19－62歲；成年女性10例，年齡 范圍17－55歲。每個病人取泌尿生殖道分泌物拭子兩個，一個拭子分泌物 洗人NS 中用于與家兔血清多克隆抗體結(jié)合；另一個劃線于 Thayer北rtin培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。 4 2002年浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士論文 三方法 （抗體的制備 免疫接種前，每一家兔均耳緣靜脈采血lml，并取 血清凍存?zhèn)溆�。翅這公諺每只家兔用含PI 30（）p抗原完全弗氏佐劑乳化 劑 Inil在背部多點(diǎn)皮內(nèi)注射；30天后，用含PI 800屹抗原不完全弗氏佐 劑乳化劑采用同樣方式進(jìn)行釜二這助理忽篷；每隔15天，同樣方式豆勿犟 全篷匝這；第七天耳緣靜脈采血并測試血清抗體效價，雙向兔疫擴(kuò)散祛測 得 AbS效價 1：4以上，立即用含 PI 500屹的 PBS溶液 0．SSI耳靜脈注射 進(jìn)行量適二這地強(qiáng)逸塞，第五天心臟采血并分離出血清。 Q抗體的鑒定 采用巫包魚塞藝散蓮檢測家兔免疫血清中多克隆抗 體的效價（l：呂以上符合要求）。 目免血清多克隆抗體對臨床標(biāo)本的檢測 血清與臨床標(biāo)本的結(jié)合采 用還置遺集迭：將懸浮于生理鹽水中的泌尿生殖道分泌物（抗原）測定 OD。co值，使其達(dá)1個OD。值，然后將抗原進(jìn)行倍比釋稀，得到不同OD。 值；同時將血清抗體釋稀至抗體效價的2葉倍，即1：2或1：4釋稀；將釋 稀的血清抗體與分泌物抗原分別加入試管中混勻，于37℃水浴、過夜，
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號】：R759.2

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 孫蔭，潘云華，徐蓉，葛平，黃玉蟬，葉元康，陸震宇，吳茵茹;PCR檢測淋球菌的探討[J];上海醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)雜志;1995年03期

本文編號：2626955