【摘要】： 目的: 觀察中藥益發(fā)口服液聯合糖皮質激素(GC)治療重型斑禿的臨床療效及藥理機制。通過檢測重型斑禿患者血皮質醇水平及外周血單個核細胞(PBMCs)中糖皮質激素受體(GR)mRNA的表達水平,探討重型斑禿的發(fā)病機理,分析GR表達水平與病情程度及臨床療效的關系,進而深入探討中藥聯合GC與糖皮質激素受體之間的關系。 方法: 參照《中藥新藥臨床研究指導原則》第三輯內容,選擇經臨床確診為重型斑禿并且中醫(yī)辨證分型屬肝腎不足證的患者32例,并設正常健康人對照組20例。將32例重型斑禿病人隨機分為中西結合組(17例)和西藥組(15例),中醫(yī)結合組予益發(fā)口服液,每次20ml,每天3次;強的松0.25mg/kg,早8時一次頓服,每天1次,法莫替丁片20mg,口服,每天2次。西藥組予強的松及法莫替丁片口服,用法用量同中西結合組。兩組均治療6個月后評定療效,療效性指標包括:治療期間頭發(fā)脫落的根數;治療期間新發(fā)長出的面積;新生頭發(fā)的密度、粗細、色澤;病人的整體狀況。療效判定標準參照《中藥新藥臨床研究指導原則》第三輯有關內容。治療前后均觀察兩組患者血、尿、便常規(guī)、心、肝、腎功能(EKG,ALT,AST,BUN,Cr)及不良反應情況。應用化學發(fā)光法檢測正常對照組以及重型斑禿患者治療前血清皮質醇含量并比較。應用逆轉錄-實時熒光定量聚合酶鏈反應(RT-qRealTime-PCR)檢測正常對照組以及重型斑禿患者治療前、后的GRmRNA表達水平并比較。采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件包建立數據庫并進行統(tǒng)計分析。 結果: (一)血清皮質醇方面:重型斑禿患者治療前血清中皮質醇濃度與正常對照組相比無顯著性差異(P＞0.05);中西結合組與西藥組兩組的血皮質醇濃度比較,差異也是無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 (二) GRmRNA表達水平方面: 1.正常對照組與重型斑禿病例組比較:正常對照組與重型斑禿病例組PBMCs均有GRmRNA表達,重型斑禿患者治療前、后GRmRNA表達水平均低于正常對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);并且治療后GRmRNA表達水平比治療前更低,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。 2.中西結合組和西藥組比較:(1)組內比較:兩組治療后GRmRNA表達水平均較治療前明顯降低,經配對樣本比較,差異均有顯著性意義,中醫(yī)結合組(P＜0.05),西藥組(P＜0.01)。但西藥組比中西醫(yī)組下降幅度更大。(2)組間比較:治療前,中西結合組與西藥組外周血GRmRNA表達水平無顯著性差異(P＞0.05)。治療后,中西結合組GRmRNA表達水平要明顯高于西藥組,差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 (三)療效比較:采用符合方案集分析(PP)對依從性好且完成試驗的受試者進行分析;采用ITT意圖治療分析(ITT)對全部的受試者進行統(tǒng)計分析。方案集分析:中西結合組治愈率58.82%,總有效率為94.1%;西藥組治愈率為40%,總有效率為80%,兩組間差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。兩組的意圖治療數據集療效比較結果與方案集分析結果相同。兩組的不良反應比較,差異無顯著性意義(P＞0.01)。 (四)按脫發(fā)面積分為普禿、全禿、斑片組,結果斑片組GRmRNA表達水平較高。普禿、全禿組GRmRNA表達水平較低。 (五)按療效分成痊愈、顯效、有效、無效四組,結果四組治療前的GRmRNA表達水平組間比較無統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。但四組治療后的GRmRNA表達水平組間比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。組內比較:痊愈、顯效、有效組治療前后GRmRNA的差值比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);無效組治療前后GRmRNA差值比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 結論: 通過本次研究得到以下結論: 1.國內外首次報道重型斑禿患者治療前血皮質醇含量與正常對照相比無顯著性差異,但外周血單一核細胞上的GR mRNA表達水平明顯降低。表明重型斑禿患者存在GC-GR紊亂,GRmRNA表達水平降低可能參與了重型斑禿的發(fā)病機制。 2.國內外首次報道肝腎不足證型的重型斑禿患者外周血單一核細胞上的GRmRNA表達水平顯著低于正常對照組,這可能是重型斑禿肝腎不足證型在受體及基因水平上的病理變化。GRmRNA表達水平能否作為肝腎不足證型的現代病理學量化依據,還有待進一步深入的研究。 3.國內外首次報道中西結合組治療后GRmRNA表達水平要明顯高于西藥組,中西結合組治療重型斑禿療效要優(yōu)于單純西藥組。表明益發(fā)口服液與GC合用,可提高患者血GRmRNA表達,或能減輕激素對自身受體的下調作用,從而增強GC敏感性,保證GC與GR的結合水平。從中也提示益發(fā)口服液聯合GC治療斑禿的作用與其對GR的調節(jié)作用有一定關聯,這可能是益發(fā)口服液治療斑禿的作用機制之一。 4.國內外首次報道病情較輕的,GRmRNA表達水平較高。病情較重,GRmRNA表達水平較低。因此檢測GRmRNA表達水平對判斷重型斑禿的預后有一定作用。 5.國內外首次報道療效好的重型斑禿患者其PBMCs中GR mRNA表達水平相對高,療效差者GR mRNA表達水平相對低。提示如果對反應不佳的患者盲目加大GC的用量只會增加不良反應,弊大于利。推測重型斑禿患者治療前PBMCs中GRmRNA表達水平的檢測可能有助于預測患者對GC的效果,也許能作為指導治療與預后的參考指標之一。
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ぶ始に囟災匭桶咄夯頰嚀瞧ぶ始に厥芴逕戶A表達的影響圖1一 1GR標準曲線圖1一ZG^PDH標準曲線(十)擴增產物特異性分析1.取10協L擴增產物點樣于2%瓊脂糖凝膠板(含澳化乙錠6mg/m1)，，在電泳儀上進行恒壓電泳分析:電泳條件 :90v45min。電泳結束后，在紫外燈下觀察產物特異性。可見電泳條帶單一清晰(見圖1一3)。 GRGAPDHM

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