【摘要】： 梅毒(syphilis)是危害人類(lèi)健康較為嚴(yán)重的一種性傳播疾病，近年來(lái)，我國(guó)的梅毒發(fā)病率呈逐漸上升趨勢(shì)。梅毒的病原體屬于密螺旋體屬蒼白螺旋體(Treponema pallidum，TP)的蒼白亞種，又稱(chēng)梅毒螺旋體。人是梅毒的唯一傳染源。梅毒有先天性和獲得性?xún)煞N。先天性梅毒(又稱(chēng)胎傳梅毒)是梅毒螺旋體通過(guò)胎盤(pán)傳染胎兒，早期可致胎兒流產(chǎn)、早產(chǎn)，晚期感染的成活胎兒可能患先天梅毒。獲得性梅毒主要經(jīng)性接觸傳播，接吻、手術(shù)、哺乳、輸血、接觸污染物也可被傳染。獲得性梅毒在臨床上分為三期：一期梅毒、二期梅毒和三期梅毒。人體感染梅毒螺旋體后，可產(chǎn)生特異性抗梅毒螺旋體抗體和非特異性抗心磷脂(cardiolipin)抗體。特異性抗梅毒螺旋體主要有IgM、IgG抗體，IgM抗體持續(xù)時(shí)間短，IgG抗體卻持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，甚至可終生存在，但抗體濃度較低，一般不能預(yù)防再感染。非特異性抗心磷脂抗體又稱(chēng)反應(yīng)素，是由梅毒螺旋體破壞的組織細(xì)胞所釋放的類(lèi)脂樣物質(zhì)以及梅毒螺旋體自身的類(lèi)脂和脂蛋白刺激機(jī)體產(chǎn)生的IgM和IgG抗體。這種抗體也可在非梅毒螺旋體感染的多種急、慢性疾病患者的血清中檢出。特異性抗梅毒螺旋體抗體比非特異性抗心磷脂抗體出現(xiàn)得早，即使經(jīng)過(guò)正規(guī)抗梅毒治療，抗梅毒螺旋體抗體仍持續(xù)存在，甚至可終生存在。對(duì)梅毒進(jìn)行早診斷、早治療對(duì)于控制其蔓延至關(guān)重要。而選擇敏感性高、特異性強(qiáng)的梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法將十分有助于梅毒的診斷。目前，梅毒檢測(cè)的常用方法主要有：快速血漿反應(yīng)素試驗(yàn)(rapid plasma reagin circle card test，RPR)、甲苯胺紅快速反應(yīng)素試驗(yàn)(toluidine red unheated—serum test，TRUST)、梅毒螺旋體ELISA試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)、梅毒螺旋體血凝試驗(yàn)(treponema pallidum hemagglutination assay，TPHA)和梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn)(treponema pallidum particle agglutination，TPPA)等，有時(shí)也用到免疫印跡法和PCR(Polymerase chain reaction，PCR)方法。我國(guó)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，獻(xiàn)血者梅毒試驗(yàn)必須陰性，使用的梅毒檢測(cè)方法可以是RPR法、TRUST法或ELISA法。因此，在獻(xiàn)血篩檢中，選擇使用敏感而特異的梅毒檢測(cè)方法，對(duì)于提高血液質(zhì)量、防止經(jīng)輸血傳播梅毒、保證輸血安全具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。本實(shí)驗(yàn)擬在獻(xiàn)血篩檢中建立起梅毒的RPR半自動(dòng)檢測(cè)方法、ELISA全自動(dòng)檢測(cè)方法、TPPA和熒光定量PCR的手工檢測(cè)方法；用這四種方法對(duì)獻(xiàn)血者血液標(biāo)本進(jìn)行梅毒檢測(cè)；分析檢測(cè)結(jié)果，評(píng)價(jià)檢測(cè)方法，選擇最適合血站進(jìn)行大規(guī)模血液篩檢的梅毒檢測(cè)方法。 材料與方法 1、研究對(duì)象：本實(shí)驗(yàn)收集成都市血液中心2006年10月上旬至2007年2月上旬采集的，在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的健康征詢(xún)和健康檢查中均合格的自愿無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本32327份，用EDTA抗凝。梅毒抗體室內(nèi)質(zhì)控品用作室內(nèi)質(zhì)控。 2、實(shí)驗(yàn)方法：利用AT plus 2全自動(dòng)加樣器及其SUNRISE plus用戶(hù)軟件、FAME24／20全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀及其用戶(hù)軟件、itswell血液檢驗(yàn)質(zhì)量控制與管理軟件，建立了ELISA全自動(dòng)檢測(cè)方法。利用TECAN RSP 150全自動(dòng)加樣器建立了RPR自動(dòng)加樣方法，利用KJ-201BD型振蕩器建立了RPR手工檢測(cè)方法。利用Heidolph微板振蕩器、背光式讀片燈等建立了TPPA檢測(cè)方法。利用FTC-2000型熒光定量PCR儀建立了熒光定量PCR檢測(cè)方法。同時(shí)使用RPR法和ELISA法，對(duì)32327份獻(xiàn)血者血液標(biāo)本作了梅毒檢測(cè)，對(duì)任意一種方法檢測(cè)出的陽(yáng)性標(biāo)本，再使用TPPA法和熒光定量PCR法進(jìn)行檢測(cè)。分析檢測(cè)結(jié)果，評(píng)價(jià)檢測(cè)方法。統(tǒng)計(jì)方法：x~2檢驗(yàn)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 1、RPR、ELISA、TPPA和熒光定量PCR四種梅毒檢測(cè)方法的建立成功建立了自動(dòng)加樣、自動(dòng)檢測(cè)的梅毒ELISA檢測(cè)方法，自動(dòng)加樣、手工檢測(cè)的梅毒RPR檢測(cè)方法，還建立了梅毒TPPA檢測(cè)方法和熒光定量PCR檢測(cè)方法。四種方法的使用情況良好。 2、ELISA法檢測(cè)獻(xiàn)血者梅毒 在32327份自愿無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本中，ELISA法檢出陽(yáng)性174份，陽(yáng)性檢出率為5.38‰(174／32327)。 3、RPR法檢測(cè)獻(xiàn)血者梅毒 在32327份自愿無(wú)償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本中，RPR法檢出陽(yáng)性108份，陽(yáng)性檢出率為3.34％o(108／32327)。 4、TPPA法檢測(cè)RPR法陽(yáng)性和／或ELISA法陽(yáng)性的獻(xiàn)血者標(biāo)本 RPR法陽(yáng)性和／或ELISA法陽(yáng)性的獻(xiàn)血者標(biāo)本共201份，其中RPR法和ELISA法均陽(yáng)性81份，RPR法陽(yáng)性、ELISA法陰性27份，RPR法陰性、ELISA法陽(yáng)性93份。使用TPPA法檢測(cè)201份RPR法陽(yáng)性和／或ELISA法陽(yáng)性的獻(xiàn)血者標(biāo)本，在81份RPR法和ELISA法均陽(yáng)性的標(biāo)本中，TPPA法陽(yáng)性81份；在27份RPR法陽(yáng)性、ELISA法陰性的標(biāo)本中，TPPA法全部陰性；在93份RPR法陰性、ELISA法陽(yáng)性的標(biāo)本中，TPPA法陽(yáng)性63份。 5、熒光定量PCR法檢測(cè)RPR法陽(yáng)性和／或ELISA法陽(yáng)性的獻(xiàn)血者標(biāo)本 使用熒光定量PCR法檢測(cè)201份RPR法陽(yáng)性和／或ELISA法陽(yáng)性的獻(xiàn)血者標(biāo)本，結(jié)果全部為陰性。 結(jié)論 1、在32327份獻(xiàn)血者血液標(biāo)本的RPR法和ELISA法的檢測(cè)結(jié)果中，經(jīng)x~2檢驗(yàn)，RPR法的陽(yáng)性檢出率和ELISA法的陽(yáng)性檢出率之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(x~2=15.514，P＜0.05)。 2、與TPPA法的確認(rèn)結(jié)果進(jìn)行比較，RPR法不但有假陽(yáng)性也有假陰性，存在梅毒漏檢的可能；而ELISA法僅有假陽(yáng)性、卻無(wú)假陰性；ELISA法檢出梅毒的能力強(qiáng)于RPR法，其用于獻(xiàn)血篩檢的價(jià)值也大于RPR法。 3、綜合考慮方法學(xué)和實(shí)際操作等因素，，RPR法、TPPA法和PCR法都不適合血站大規(guī)模的血液篩檢，而ELISA法最適合血站大規(guī)模的血液篩檢。
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【學(xué)位授予單位】：四川大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類(lèi)號(hào)】：R759.1;R450;R446.6

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 時(shí)麗麗;cTnI特殊位點(diǎn)抗原的重復(fù)表達(dá)、免疫及其抗體效價(jià)檢測(cè)[D];北京化工大學(xué);2008年

本文編號(hào)：2608743