【摘要】： 侵襲和轉(zhuǎn)移是影響黑色素瘤患者生存的首要因素,也是其治療的最大障礙。SDF-1/CXCR4生物軸作為少數(shù)具有點(diǎn)對點(diǎn)精確傳導(dǎo)生物信息的生物軸系統(tǒng)之一,在多數(shù)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。越來越多的研究表明,趨化因子受體CXCR4(Chemokine receptor CXCR4)參與腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的多個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)。本研究利用RNA干擾技術(shù)下調(diào)趨化因子受體CXCR4基因的表達(dá),探討CXCR4基因沉默對黑色素瘤及細(xì)胞系體外侵襲及轉(zhuǎn)移的影響及機(jī)制。設(shè)計(jì)合成CXCR4特異性短發(fā)夾狀RNA(shRNA)插入pSilencer載體,轉(zhuǎn)染人高轉(zhuǎn)移性黑色素瘤細(xì)胞株MV3,RT-PCR和Western blot檢測shRNA對靶基因CXCR4表達(dá)的影響。利用Transwell小室模型檢測細(xì)胞體外侵襲能力,MTT檢測細(xì)胞增殖狀況。通過裸鼠尾靜脈瘤細(xì)胞注射方法,構(gòu)建黑色素瘤轉(zhuǎn)移模型,檢測CXCR4基因沉默對黑色素瘤轉(zhuǎn)移能力的影響。研究證實(shí),在人轉(zhuǎn)移性黑色素瘤細(xì)胞系、人黑色素瘤原發(fā)灶及轉(zhuǎn)移組織內(nèi)均存在CXCR4選擇性高表達(dá);實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建并篩選出CXCR4特異性shRNA質(zhì)粒載體,結(jié)果表明,以CXCR4為靶向的shRNA能夠有效下調(diào)CXCR4基因的表達(dá),降低黑色素瘤細(xì)胞增殖、體外侵襲及轉(zhuǎn)移能力。提示CXCR4是黑色素瘤侵襲和轉(zhuǎn)移過程中的重要調(diào)控因子,為黑色素瘤的生物治療提供了新的靶分子并奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【圖文】：

圖 1.2 CXCR4 mRNA 在黑色素瘤 MV3、B16F10 細(xì)胞系中的表達(dá)Fig 1.2 Expression of CXCR4 mRNA in melanomaMV3 and B16F10 cell linesM: DNA marker3 黑色素瘤 MV3、 B16F10 細(xì)胞系 CXCR4 免疫熒光觀察結(jié)果應(yīng) 用 細(xì) 胞 免 疫 熒 光 檢 測 技 術(shù) ，， 對 MV3 和 B16F10 細(xì) 胞 進(jìn) 行CXCR4-FITC 細(xì)胞免疫熒光染色，均見 CXCR4 陽性熒光染色。GAPDHCXCR4500bp→200bp→

皮膚惡性黑色素瘤Figure1.4Cutaneousmalignantmelanoma
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號】：R739.5

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 盛文;CXCR4基因沉默對宮頸癌細(xì)胞體外侵襲轉(zhuǎn)移能力的影響[D];中南大學(xué);2012年

本文編號：2607745