【摘要】：目的:分析hsa-miR-100-5P在皮膚鱗狀細胞癌細胞(cSCC細胞)及砷致HaCaT惡性表型細胞(AS-TM細胞)中的表達,以驗證AS-TM細胞作為砷誘發(fā)皮膚癌模型的可能性,并探討砷致HaCaT細胞惡性轉(zhuǎn)變與皮膚鱗狀細胞癌形成之間的共同分子基礎(chǔ),為皮膚鱗狀細胞癌的診斷和治療提供新靶點。方法:1.制備AS-TM細胞:HaCaT細胞培養(yǎng)在含100nM三氧化二砷培養(yǎng)液180天后收集細胞后制備成AS-TM細胞,軟瓊脂克隆形成實驗計算克隆形成率;2.檢測hsa-miR-100-5P的表達:正常HaCaT細胞、AS-TM細胞及cSCC細胞同時進行傳代培養(yǎng),取對數(shù)生長期的3種細胞,分為三組,采用實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測hsa-miR-100-5P在人永生化角質(zhì)形成細胞(HaCaT細胞)、皮膚鱗狀細胞癌細胞(cSCC細胞)及砷致HaCaT惡性表型細胞(AS-TM細胞)中的表達。結(jié)果:1.HaCaT細胞在含砷的培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)180天后,形態(tài)學(xué)上有了明顯的變化。顯微鏡下見細胞的體積變小,細胞形態(tài)多種變化,頻繁出現(xiàn)多核巨細胞;無砷對照組HaCaT細胞仍是上皮樣細胞形態(tài),軟瓊脂克隆形成實驗AS-TM細胞組克隆形成明顯多于HaCaT細胞組,HaCaT細胞組和AS-TM細胞組單克隆形成率分別為0.12‰和0.52‰,兩組間有顯著性差異(P〈0.05)。2.RT-PCR結(jié)果顯示,三組細胞進行單因素ANOVA分析,差異有顯著性(F=44.866,P=0.000*)。采用LSD-t法進行多重比較結(jié)果顯示,與HaCaT細胞相比,cSCC細胞中hsa-miR-100-5P顯著上調(diào)(LSD-t=8.344,P=0.000*),cSCC細胞和HaCaT細胞相對表達量分別為(2.445±0.261/1.000±0.000);與HaCa T細胞相比,AS-TM細胞中hsa-miR-100-5P也顯著上調(diào)(LSD-t=3.893,P=0.008*),AS-TM細胞和HaCaT細胞相對表達量分別為(1.636±0.192/1.000±0.000),并且cSCC細胞與AS-TM細胞比較,hsa-miR-100-5P也顯著上調(diào)(LSD-t=4.452,P=0.004*);結(jié)果證實cSCC細胞、AS-TM細胞與正常HaCaT細胞相比,hsa-miR-100-5P的表達均上調(diào)。結(jié)論:1.hsa-miR-100-5P在砷致HaCaT細胞惡性表型細胞與皮膚鱗狀細胞癌細胞中均顯著上調(diào),表明砷致HaCaT細胞惡性表型細胞與皮膚鱗狀細胞癌細胞的miRNA表達有相似性,證實砷致HaCaT細胞惡性表型細胞作為砷誘發(fā)皮膚癌的細胞模型是可靠的。2.hsa-miR-100-5P可能在砷致HaCaT細胞惡性轉(zhuǎn)化過程中和皮膚鱗狀細胞癌的發(fā)生過程中均發(fā)揮一定作用,有可能成為皮膚鱗狀細胞癌診斷及治療的潛在靶點。
【圖文】：

HaCaT細胞在含100nM三氧化二砷的培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)180天后，形態(tài)學(xué)上有了明顯的變化，，顯微鏡下見細胞的體積變小,形態(tài)多種多樣，頻繁出現(xiàn)多核巨細胞（箭頭所指），而不含砷培養(yǎng)基培養(yǎng)的HaCaT細胞仍是上皮樣細胞形態(tài)（見圖1）。HaCaT細胞組（×200） AS-TM細胞組（×200）圖 1 砷長期作用對 HaCaT 細胞形態(tài)的影響2. 低濃度砷劑長期作用對 HaCaT 細胞克隆形成的影響2.1 軟瓊脂克隆形成實驗顯示AS-TM細胞組克隆形成明顯多于HaCaT細胞組（見圖

砷長期作用對HaCaT細胞克隆形成的影響
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R739.5

【參考文獻】

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本文編號：2598415