【摘要】：目的:分析hsa-miR-100-5P在皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞(cSCC細(xì)胞)及砷致HaCaT惡性表型細(xì)胞(AS-TM細(xì)胞)中的表達(dá),以驗(yàn)證AS-TM細(xì)胞作為砷誘發(fā)皮膚癌模型的可能性,并探討砷致HaCaT細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)變與皮膚鱗狀細(xì)胞癌形成之間的共同分子基礎(chǔ),為皮膚鱗狀細(xì)胞癌的診斷和治療提供新靶點(diǎn)。方法:1.制備AS-TM細(xì)胞:HaCaT細(xì)胞培養(yǎng)在含100nM三氧化二砷培養(yǎng)液180天后收集細(xì)胞后制備成AS-TM細(xì)胞,軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)計算克隆形成率;2.檢測hsa-miR-100-5P的表達(dá):正常HaCaT細(xì)胞、AS-TM細(xì)胞及cSCC細(xì)胞同時進(jìn)行傳代培養(yǎng),取對數(shù)生長期的3種細(xì)胞,分為三組,采用實(shí)時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測hsa-miR-100-5P在人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞(HaCaT細(xì)胞)、皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞(cSCC細(xì)胞)及砷致HaCaT惡性表型細(xì)胞(AS-TM細(xì)胞)中的表達(dá)。結(jié)果:1.HaCaT細(xì)胞在含砷的培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)180天后,形態(tài)學(xué)上有了明顯的變化。顯微鏡下見細(xì)胞的體積變小,細(xì)胞形態(tài)多種變化,頻繁出現(xiàn)多核巨細(xì)胞;無砷對照組HaCaT細(xì)胞仍是上皮樣細(xì)胞形態(tài),軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)AS-TM細(xì)胞組克隆形成明顯多于HaCaT細(xì)胞組,HaCaT細(xì)胞組和AS-TM細(xì)胞組單克隆形成率分別為0.12‰和0.52‰,兩組間有顯著性差異(P〈0.05)。2.RT-PCR結(jié)果顯示,三組細(xì)胞進(jìn)行單因素ANOVA分析,差異有顯著性(F=44.866,P=0.000*)。采用LSD-t法進(jìn)行多重比較結(jié)果顯示,與HaCaT細(xì)胞相比,cSCC細(xì)胞中hsa-miR-100-5P顯著上調(diào)(LSD-t=8.344,P=0.000*),cSCC細(xì)胞和HaCaT細(xì)胞相對表達(dá)量分別為(2.445±0.261/1.000±0.000);與HaCa T細(xì)胞相比,AS-TM細(xì)胞中hsa-miR-100-5P也顯著上調(diào)(LSD-t=3.893,P=0.008*),AS-TM細(xì)胞和HaCaT細(xì)胞相對表達(dá)量分別為(1.636±0.192/1.000±0.000),并且cSCC細(xì)胞與AS-TM細(xì)胞比較,hsa-miR-100-5P也顯著上調(diào)(LSD-t=4.452,P=0.004*);結(jié)果證實(shí)cSCC細(xì)胞、AS-TM細(xì)胞與正常HaCaT細(xì)胞相比,hsa-miR-100-5P的表達(dá)均上調(diào)。結(jié)論:1.hsa-miR-100-5P在砷致HaCaT細(xì)胞惡性表型細(xì)胞與皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞中均顯著上調(diào),表明砷致HaCaT細(xì)胞惡性表型細(xì)胞與皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞的miRNA表達(dá)有相似性,證實(shí)砷致HaCaT細(xì)胞惡性表型細(xì)胞作為砷誘發(fā)皮膚癌的細(xì)胞模型是可靠的。2.hsa-miR-100-5P可能在砷致HaCaT細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過程中和皮膚鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生過程中均發(fā)揮一定作用,有可能成為皮膚鱗狀細(xì)胞癌診斷及治療的潛在靶點(diǎn)。
【圖文】：

HaCaT細(xì)胞在含100nM三氧化二砷的培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)180天后，形態(tài)學(xué)上有了明顯的變化，，顯微鏡下見細(xì)胞的體積變小,形態(tài)多種多樣，頻繁出現(xiàn)多核巨細(xì)胞（箭頭所指），而不含砷培養(yǎng)基培養(yǎng)的HaCaT細(xì)胞仍是上皮樣細(xì)胞形態(tài)（見圖1）。HaCaT細(xì)胞組（×200） AS-TM細(xì)胞組（×200）圖 1 砷長期作用對 HaCaT 細(xì)胞形態(tài)的影響2. 低濃度砷劑長期作用對 HaCaT 細(xì)胞克隆形成的影響2.1 軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)顯示AS-TM細(xì)胞組克隆形成明顯多于HaCaT細(xì)胞組（見圖

砷長期作用對HaCaT細(xì)胞克隆形成的影響
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R739.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2598415