【摘要】： 目的:人表皮光老化的機(jī)制不明。本文以老年人的正常表皮為研究對(duì)象,分析曝光部位與非曝光部位的表皮差異蛋白,探討角質(zhì)形成細(xì)胞在光老化過(guò)程中的作用及分子機(jī)制,為揭示衰老的本質(zhì),指導(dǎo)皮膚美容奠定基礎(chǔ)。 方法:收集老年人曝光部位和非曝光部位的正常皮膚,液氮保存。37℃生理鹽水中快速?gòu)?fù)溫,用DispaseII分離出表皮,提取表皮總蛋白質(zhì),并進(jìn)行2-DE分離,獲得表皮雙向凝膠電泳圖譜,PDQUEST軟件進(jìn)行圖像分析,經(jīng)強(qiáng)度校正、背景消減、點(diǎn)檢測(cè)、匹配、ID校正,確定凝膠上差異蛋白點(diǎn),挑選其中的蛋白點(diǎn)進(jìn)行MALDI-TOF質(zhì)譜分析及數(shù)據(jù)庫(kù)查詢,鑒定差異表達(dá)蛋白;最后用Western-blotting檢測(cè)不同部位蛋白的表達(dá)情況,驗(yàn)證差異表達(dá)蛋白。 結(jié)果:本課題成功建立和優(yōu)化了人表皮雙向電泳技術(shù),獲得了清晰、重復(fù)性高的表皮雙向電泳圖譜。經(jīng)PDQUEST軟件分析后,曝光組表皮蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)為536±17,非曝光組表皮蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)為528±15,比較兩組圖譜共確定差異點(diǎn)31個(gè),其中15個(gè)蛋白點(diǎn)在曝光組中高表達(dá),5個(gè)點(diǎn)特異表達(dá);8個(gè)蛋白點(diǎn)在非曝光組中高表達(dá),3個(gè)點(diǎn)特異表達(dá)。取其中差異明顯的10個(gè)點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜分析及數(shù)據(jù)庫(kù)查詢,成功鑒定了5個(gè)差異表達(dá)蛋白,發(fā)現(xiàn)熱休克蛋白27(HSPB1)、膜聯(lián)蛋白A2(ANXA2)、絲裂原激活的蛋白激酶3(MK03)在老年人曝光部位的表皮中高表達(dá),角蛋白80(K2C80)僅在老年人曝光部位表皮中表達(dá),而谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶A2(GSTA2)在非曝光部位表皮中高表達(dá),并通過(guò)Western-blotting驗(yàn)證了熱休克蛋白27、膜聯(lián)蛋白A2在兩組表皮中表達(dá)的差異性。提示這5種蛋白質(zhì)均與皮膚的光老化有著密切關(guān)系。 結(jié)論:老年人正常皮膚曝光部位和非曝光部位的表皮存在差異蛋白,經(jīng)分析和鑒定的5種蛋白質(zhì)均通過(guò)各種途徑維持細(xì)胞的正常功能,抑制炎癥反應(yīng)及細(xì)胞的凋亡,與皮膚的光老化有密切的關(guān)系,為進(jìn)一步研究表皮細(xì)胞在光老化過(guò)程中的作用及分子機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
【圖文】：

3 結(jié) 果3.1 兩組表皮蛋白質(zhì) 2-DE 分離結(jié)果經(jīng)計(jì)算機(jī)分析后，兩組雙向電泳圖譜重復(fù)率高，，重復(fù)性分別達(dá)到 84.5%（曝光組）和 83.4%（非曝光組）。蛋白質(zhì)斑點(diǎn)分子量在 10～100 KD,pI4～8，經(jīng) PDQUEST7.4 軟件分析后，曝光組表皮蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)為 536±17，非曝光組表皮蛋白質(zhì)點(diǎn)數(shù)為528±15，比較兩組圖譜共確定差異點(diǎn) 31 個(gè)，其中 15 個(gè)蛋白點(diǎn)在曝光組中高表達(dá)，5 個(gè)點(diǎn)特異表達(dá)；8 個(gè)蛋白點(diǎn)在非曝光組中高表達(dá)，3 個(gè)點(diǎn)特異表達(dá)。取其中差異明顯的 10 個(gè)點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜分析。見(jiàn)圖 1。pH4～8pH4～8

圖 3：1 號(hào)蛋白點(diǎn)的 Mascot 搜索結(jié)果Fig 3：Mascot researching result of protein spot 1ewUMAN Score: 120 Expect: 2e-08pe II cytoskeletal 80 OS=Homo sapiens GN=KRT80 PE=1 SV=ass (Mr): 51007; Calculated pI value: 5.58ST search of K2C80_HUMAN against nred sequence string for pasting into other applications: Homo sapiensifications: Carbamidomethyl (C)odifications: Oxidation (M)by Trypsin: cuts C-term side of KR unless next residue is Pf mass values searched: 20f mass values matched: 16
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R758.1

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3 李嘉s

本文編號(hào)：2575500