【摘要】： 目的 通過檢測新型免疫抑制劑他克莫司(tacrolimus)對黑素細胞(melanocyte,MC)和角質形成細胞(keratinocytes, KC)的作用,觀察他克莫司對黑素細胞的直接和間接影響,尋找其作用靶點,以揭示他克莫司治療白癜風的作用機制,從而為臨床提供實驗依據(jù),使之更好地服務于臨床。 方法 1.建立小鼠B16黑素瘤細胞培養(yǎng)體系,并根據(jù)不同的實驗需要將細胞分別接種于相應的培養(yǎng)板,選擇對數(shù)生長期的細胞進行實驗。以不同濃度的他克莫司(10,102,103,104nmol/L)對小鼠B16黑素瘤細胞進行干預,每個濃度組設3個復孔,并設空白對照組。觀察他克莫司對小鼠B16黑素瘤細胞的影響并檢測黑素細胞增殖(MTT法)、遷移(微孔膜法)、酪氨酸酶活性(多巴氧化法)、黑素含量(NaOH裂解法)等指標。 2.建立人永生化角質形成細胞(HaCaT)培養(yǎng)體系,并根據(jù)不同的實驗需要將細胞分別接種于相應的培養(yǎng)板,選擇對數(shù)生長期的細胞進行實驗。以不同濃度的他克莫司(10,102,103,104nmol/L)對角質形成細胞進行干預,每個濃度組設3個復孔,并設空白對照組,培養(yǎng)48小時后,收集上清液。采用ELISA法檢測上清液中干細胞因子(SCF)和堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)的含量,并測定角質形成細胞的增殖情況。收集角質形成細胞和小鼠B16黑素瘤細胞,提取RNA,采用實時熒光定量PCR檢測角質形成細胞SCF mRNA、黑素細胞c-kit mRNA的表達水平。 3.以他克莫司作用后的角質形成細胞培養(yǎng)上清液作為條件化培養(yǎng)基對小鼠B16黑素瘤細胞進行干預,檢測黑素細胞的增殖(MTT法)、酪氨酸酶活性(多巴氧化法)、黑素含量(NaOH裂解法)等指標,以觀察他克莫司通過角質形成細胞對黑素細胞的間接作用。 結果 1.低濃度(10nmol/L和102nmol/L)他克莫司對黑素細胞增殖的影響不明顯,高濃度(103nmol/L和104nmol/L)對增殖有抑制作用。各濃度他克莫司均可提高黑素細胞的酪氨酸酶活性并增加黑素含量。此外,他克莫司可以促進黑素細胞的遷移。 2.低濃度(10nmol/L和102nmol/L)他克莫司對角質形成細胞的增殖影響不明顯,高濃度(103nmol/L和104nmol/L)對增殖有抑制作用。在適當濃度的他克莫司作用下,角質形成細胞分泌SCF的含量增加,但對bFGF含量無明顯影響。他克莫司能上調角質形成細胞SCF mRNA和黑素細胞c-kit mRNA的表達。 3.不同濃度他克莫司作用后的角質形成細胞條件化培養(yǎng)基能明顯促進黑素細胞的增殖,但酪氨酸酶活性和黑素細胞含量與對照組相比較變化不明顯。 結論 他克莫司可以通過促進黑素細胞遷移、提高酪氨酸酶活性、增加黑素含量等環(huán)節(jié)直接作用于黑素細胞,產(chǎn)生復色；他克莫司還可以通過角質形成細胞促進黑素細胞的增殖,并促進角質形成細胞分泌細胞因子SCF進而改變黑素細胞生存的微環(huán)境,產(chǎn)生復色,從而揭示了他克莫司治療白癜風的作用機制,為臨床提供實驗依據(jù),使之更好地服務于臨床。
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【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R751

【引證文獻】

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1 林中梅;復方補骨脂擦劑與三白沖劑聯(lián)合治療白癜風的療效及其機制研究[D];遵義醫(yī)學院;2012年

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本文編號：2499048