【摘要】： 斑禿(alopecia areata, AA)是在一定遺傳背景下,多種因素誘發(fā)的局限于毛囊的自身免疫性疾病。應(yīng)激可誘發(fā)和加重斑禿,目前認(rèn)為斑禿是一種應(yīng)激相關(guān)的炎癥性皮膚病。應(yīng)激反應(yīng)與下丘腦-垂體-腎上腺軸(hypothalamic-pituitary-adrenal axis, HPA axis)、交感神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)緊密相關(guān),其中被稱(chēng)為應(yīng)激軸(stress axis)的HPA軸,是介導(dǎo)應(yīng)激反應(yīng)的重要途徑。HPA軸系統(tǒng)反應(yīng)缺陷將導(dǎo)致糖皮質(zhì)激素缺乏狀態(tài),可增加自身免疫性疾病的易感性,是應(yīng)激相關(guān)的自身免疫性疾病的重要致病因素之一。 目前發(fā)現(xiàn)除了經(jīng)典的中樞HPA軸,外周組織皮膚及其附屬器也存在著與中樞HPA軸相似的HPA軸。皮膚及毛囊的HPA軸與中樞HPA軸不但具有相同的環(huán)路分子而且具有相似的神經(jīng)內(nèi)分泌功能,與神經(jīng)遞質(zhì)、其它神經(jīng)肽以及神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)素共同調(diào)控生理病理狀態(tài)下皮膚的神經(jīng)內(nèi)分泌及免疫功能。近來(lái)一些研究顯示,中樞及外周的HPA軸活動(dòng)缺陷均參與應(yīng)激相關(guān)的斑禿的發(fā)病,但其具體機(jī)制尚未完全闡明。 HPA軸的組成分子也被稱(chēng)為應(yīng)激激素(stress hormones),包括促皮質(zhì)激素釋放激素(corticotropin-releasing hormone,CRH)、促腎上腺皮質(zhì)激素(adrenocorticotropic hormone,ACTH)和皮質(zhì)醇(cortisol)。CRH信號(hào)必須經(jīng)過(guò)ACTH/MC2R途徑刺激皮質(zhì)醇生成,ACTH被稱(chēng)為“內(nèi)分泌第二信使”;而且ACTH在幾個(gè)黑素皮質(zhì)激素原肽(proopiomelanocortin, POMC)衍生肽中,是主要調(diào)節(jié)毛發(fā)生長(zhǎng)的POMC衍生肽,因此ACTH及其特異性的受體黑素皮質(zhì)素受體2(melanocortin receptor type 2,MC2R或adrenocorticotropic hormone receptor, ACTHR)在應(yīng)激相關(guān)的斑禿中可能發(fā)揮重要作用。我們對(duì)MC2R基因及其蛋白在斑禿皮損中的表達(dá)情況進(jìn)行研究,以闡明HPA軸在斑禿發(fā)病中的可能機(jī)制,并探討影響MC2R分子功能的可能調(diào)控機(jī)制。 目前認(rèn)為斑禿也是一多基因決定的復(fù)雜性疾病,因此斑禿的遺傳學(xué)研究也是闡釋斑禿發(fā)病機(jī)制的途徑之一。斑禿家族的全基因掃描發(fā)現(xiàn)最大多點(diǎn)LOD值位于18號(hào)染色體的10-30CM之間,我們通過(guò)GenBank搜索該區(qū)域的基因,發(fā)現(xiàn)MC2R恰恰位于這個(gè)區(qū)域。已證實(shí)MC2R啟動(dòng)子一些位點(diǎn)的多態(tài)性可降低ACTH/MC2R連接敏感性,導(dǎo)致ACTH/MC2R介導(dǎo)的HPA軸信號(hào)傳導(dǎo)障礙,皮質(zhì)醇生產(chǎn)減少。認(rèn)為MC2R基因的這種單個(gè)基因的單個(gè)鹼基突變導(dǎo)致腎上腺皮質(zhì)醇生成減少,是機(jī)體HPA軸活動(dòng)調(diào)控的重要機(jī)制之一。中國(guó)漢族人群中MC2R啟動(dòng)子這些位點(diǎn)的多態(tài)性降低ACTH與MC2R結(jié)合能力的研究已有報(bào)道。綜合斑禿患者異常的HPA軸活動(dòng)和MC2R基因結(jié)構(gòu)功能特點(diǎn),我們運(yùn)用病例對(duì)照研究方法,對(duì)重慶地區(qū)斑禿患者M(jìn)C2R基因啟動(dòng)子兩個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性進(jìn)行了檢測(cè),統(tǒng)計(jì)學(xué)分析MC2R基因啟動(dòng)子多態(tài)性與斑禿的關(guān)聯(lián)性,嘗試闡明影響斑禿HPA軸異常的可能因素。 首先我們應(yīng)用Thomas Holmes和Richard Rahe社會(huì)再適應(yīng)量表調(diào)查斑禿患者病情活動(dòng)期前6個(gè)月的應(yīng)激狀態(tài),探討應(yīng)激生活事件與斑禿發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性。然后,采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)了MC2R蛋白在斑禿皮損及健康對(duì)照頭皮組織的原位表達(dá)情況,并且應(yīng)用Western blotting方法對(duì)斑禿皮損與健康對(duì)照頭皮組織MC2R蛋白的總體水平做了定量檢測(cè),定位定量地對(duì)MC2R蛋白水平在斑禿皮損中的改變進(jìn)行了全面研究。進(jìn)而,我們進(jìn)行了斑禿皮損與健康對(duì)照頭皮組織MC2R的基因水平的檢測(cè)與比較研究,求證MC2R是否在頭皮組織中合成,探討斑禿皮損是否存在MC2R基因水平的改變。最后,我們用連接酶檢測(cè)方法對(duì)MC2R啟動(dòng)子區(qū)的兩個(gè)位點(diǎn)的SNP做了研究,從遺傳學(xué)角度探討MC2R與斑禿發(fā)病的關(guān)聯(lián)性。 研究主要結(jié)果如下: 1.50.95%的斑禿患者在病情活動(dòng)前6個(gè)月經(jīng)歷過(guò)3個(gè)及以上的應(yīng)激生活事件,32.05%的健康對(duì)照在填表前6個(gè)月經(jīng)歷過(guò)3個(gè)及以上的應(yīng)激生活事件,斑禿患者罹患應(yīng)激事件百分率明顯高于健康對(duì)照(P0.001);斑禿患者的SRRS評(píng)分顯著高于健康對(duì)照組(Z=6.628, P0.001),斑禿患者與健康對(duì)照人群在應(yīng)激感受上存在顯著差異。經(jīng)多因素logistic回歸分析,睡眠改變、個(gè)人習(xí)慣改變、家庭問(wèn)題、學(xué)習(xí)工作問(wèn)題及財(cái)政問(wèn)題是與斑禿發(fā)生及加重相關(guān)的主要應(yīng)激生活事件,提示應(yīng)激與斑禿活動(dòng)相關(guān)。 2.免疫組化示:MC2R在表皮、附屬器及真皮組織中均廣泛表達(dá),在附屬器表達(dá)最明顯,主要為細(xì)胞膜上與細(xì)胞漿內(nèi)表達(dá)。斑禿患者皮損MC2R表達(dá)較健康對(duì)照頭皮在皮膚全層組織,包括表皮、毛囊、皮脂腺及真皮中的表達(dá)普遍降低(P0.05),尤其在毛囊的外毛根鞘(outer root sheath, ORS)、毛母質(zhì)及表皮的棘細(xì)胞層與顆粒細(xì)胞層中表達(dá)降低顯著。MC2R蛋白表達(dá)在斑禿表皮及間充質(zhì)組織均廣泛改變,提示MC2R蛋白可能參與斑禿皮損包括表皮及真皮成分的組織病理學(xué)改變,顯著的表皮表達(dá)改變提示MC2R在斑禿表皮病理改變中發(fā)揮更重要的作用。 3.Western blotting示:斑禿患者皮損中MC2R總蛋白水平較健康頭皮組織表達(dá)降低(P0.05),半定量顯示了斑禿皮損與健康對(duì)照頭皮MC2R蛋白表達(dá)差異。 4.MC2R mRNA在健康頭皮的表達(dá)量不高,而斑禿皮損MC2R mRNA表達(dá)較健康頭皮表達(dá)增加將近5倍,統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)具有顯著性(P0.01)。 基于3與4的結(jié)果,我們認(rèn)為斑禿皮損中MC2R基因與蛋白水平均發(fā)生改變,MC2R基因與蛋白水平表達(dá)的不一致性,提示轉(zhuǎn)錄后調(diào)控可能在MC2R的基因表達(dá)中發(fā)揮重要作用,MC2R mRNA不能完全有效翻譯為MC2R蛋白可能是形成斑禿組織中HPA軸功能缺陷的關(guān)鍵因素之一。 5.利用生物信息學(xué)方法,選擇MC2R基因啟動(dòng)子的-759AC(rs1893220)及-2TC(rs79533878)位點(diǎn)進(jìn)行SNP研究。首先證實(shí)這些位點(diǎn)在中國(guó)人群確實(shí)存在基因多態(tài)性,然后比較發(fā)現(xiàn)斑禿患者與正常對(duì)照MC2R基因-759AC、-2TC等位基因頻率無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。但當(dāng)我們將斑禿患者按照應(yīng)激狀態(tài)分層分析,發(fā)現(xiàn)明顯應(yīng)激組的斑禿患者與健康對(duì)照者M(jìn)C2R基因的-2TC的等位基因頻率相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(41.1%比27.8%,P=0.009, OR=1.252, 95%CI= 1.045～1.501)。將結(jié)果以非參數(shù)Logistic回歸校正年齡及性別因素后分析,顯示明顯應(yīng)激組的斑禿患者與MC2R基因的-2TC位點(diǎn)的C等位基因攜帶有相關(guān)性(P=0.002, OR=1.576, 95%CI=1.148～2.162)。我們的研究結(jié)果提示MC2R基因-2TC多態(tài)性與斑禿患者的應(yīng)激感受有關(guān)聯(lián)性,推測(cè)MC2R基因-2TC位點(diǎn)T→C單個(gè)鹼基的突變降低了ACTH/MC2R連接敏感性,從而不能有效下傳HPA系統(tǒng)的CRH信號(hào),造成糖皮質(zhì)激素生成不足,使自身免疫性疾病斑禿的易感性增加,斑禿患者的精神癥狀易感性增加。 綜上所述:我們的研究發(fā)現(xiàn)應(yīng)激生活事件是斑禿發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)因素之一,斑禿患者與健康對(duì)照人群在應(yīng)激感受上存在顯著性差異。斑禿皮損區(qū)MC2R基因及蛋白表達(dá)水平與健康對(duì)照頭皮組織表達(dá)有明顯差異,HPA軸表達(dá)異常參與斑禿的發(fā)病。過(guò)度應(yīng)激刺激下,為維護(hù)機(jī)體正常機(jī)能,HPA軸首先發(fā)生過(guò)度的中樞及外周應(yīng)激反應(yīng),表現(xiàn)為MC2R基因在皮膚中合成增加。而缺陷的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控使MC2R基因不能完全表達(dá)為MC2R蛋白,導(dǎo)致MC2R蛋白表達(dá)降低。下調(diào)的MC2R蛋白致使HPA軸信號(hào)不能有效下傳,糖皮質(zhì)激素生成缺乏,增加自身免疫性疾病斑禿的易感性。我們推想MC2R的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控機(jī)制可能是形成斑禿組織中缺陷的HPA軸功能的關(guān)鍵機(jī)制之一。MC2R基因啟動(dòng)子的某些位點(diǎn)能夠影響ACTH/MC2R連接敏感性導(dǎo)致缺陷的HPA軸活動(dòng)。我們調(diào)查發(fā)現(xiàn)MC2R基因啟動(dòng)子-2TC(rs79533878)位點(diǎn)SNP與斑禿患者的應(yīng)激感受關(guān)聯(lián),推測(cè)MC2R基因啟動(dòng)子區(qū)-2位點(diǎn)基因突變能夠引起ACTH/MC2R連接敏感性降低,導(dǎo)致HPA軸CRH信號(hào)不能有效下傳,致使糖皮質(zhì)激素生成缺陷,增加自身免疫病及炎癥的易感性,增加個(gè)體精神癥狀易感性,從遺傳學(xué)角度探討了MC2R與應(yīng)激相關(guān)的斑禿患者缺陷的HPA軸的關(guān)聯(lián)性�？傊�,我們的研究對(duì)應(yīng)激相關(guān)的斑禿發(fā)病機(jī)制的闡明以及從神經(jīng)內(nèi)分泌免疫遺傳學(xué)方面制定防治斑禿措施提供了理論依據(jù)。
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【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類(lèi)號(hào)】：R758.71

【參考文獻(xiàn)】

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1 滿孝勇,李學(xué)平,冒長(zhǎng)峙;HLAⅢ類(lèi)基因多態(tài)性與系統(tǒng)性紅斑狼瘡[J];臨床皮膚科雜志;2002年02期

2 吳霞,李大金;趨化性細(xì)胞因子對(duì)NK細(xì)胞生物學(xué)功能的調(diào)控作用[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2004年04期

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本文編號(hào)：2474272