【摘要】：目的觀察喜樹堿對(duì)低氧(2%02)培養(yǎng)下HaCaT細(xì)胞低氧誘導(dǎo)因子-la (HIF-1α)、趨化因子配體20(CCL20)表達(dá)的影響,探討外用喜樹堿治療銀屑病可能的作用機(jī)制。方法①常氧(21%O2)條件下細(xì)胞增殖、凋亡測定：將12.5、25、50、100、200nmol/L的喜樹堿作用于HaCaT細(xì)胞12、24、48、72h, CCK8法檢測細(xì)胞增殖；以上各濃度喜樹堿干預(yù)HaCaT細(xì)胞24h,Annexin-FITC/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡率,并用Western印跡檢測細(xì)胞中Bcl-2、Caspase-3蛋白表達(dá)。②低氧(2%O2)條件下喜樹堿對(duì)細(xì)胞HIF-1α、CCL20蛋白表達(dá)影響：用以上不同濃度處理低氧誘導(dǎo)12h的HaCaT細(xì)胞；Western印跡檢測細(xì)胞HIF-1α蛋白的表達(dá)；ELISAKit測定細(xì)胞培養(yǎng)上清中CCL20表達(dá)。③低氧(2%02)對(duì)HaCaT細(xì)胞CCL20mRNA的影響以及喜樹堿對(duì)細(xì)胞HIF-1αmRNA表達(dá)影響：將HaCaT細(xì)胞分為常氧組和低氧組,均無藥物干預(yù)培養(yǎng)12h后實(shí)時(shí)熒光定量PCR (RT-PCR)檢測CCL20mRNA的相對(duì)表達(dá)；將HaCaT細(xì)胞分為常氧組和低氧組,每組內(nèi)再分喜樹堿(100nmol/L)干預(yù)組和非干預(yù)組(溶媒對(duì)照組),培養(yǎng)12h后RT-PCR檢測HIF-1αmRNA的相對(duì)表達(dá)。④統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：根據(jù)資料性質(zhì),用SPSS 16.0軟件進(jìn)行Levene's Test(數(shù)據(jù)方差不齊,進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換)、方差分析、Dunnett-t檢驗(yàn)、兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、SNK-q檢驗(yàn)和析因分析。結(jié)果1、不同濃度喜樹堿作用12、24、48、72h后對(duì)HaCaT細(xì)胞的增殖有抑制作用,并有濃度與時(shí)間依賴關(guān)系；200nmol/L喜樹堿作用12h,100、200nmol/L且樹堿作用24h,細(xì)胞增殖抑制率分別為(17.66+6.46)%、(33.11±4.63)%、(56.31±1.69)%,與同時(shí)段溶媒對(duì)照組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。100、200nmol/L喜樹堿作用24h細(xì)胞凋亡率(AV+)分別為(11.34±3.82)%、(24.45±4.03)%,與同時(shí)段溶媒對(duì)照組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。12.5、25、50、100、200nmol/L的喜樹堿作用于HaCaT細(xì)胞24h,細(xì)胞Caspase-3表達(dá)隨藥物濃度升高而增加,Bcl-2表達(dá)隨藥物濃度升高而降低。2、低氧誘導(dǎo)12h,25、50、100、200nmol/L喜樹堿處理后HIF-1α蛋白表達(dá)分別為0.348±0.065、0.261±0.112、0.261±0.112、0.045±0.024,與溶媒對(duì)照組(1.445±0.329)比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；100、200nmol/L喜樹堿處理低氧誘導(dǎo)12h的HaCaT細(xì)胞培養(yǎng)液上清(1×105cells)中CCL20的表達(dá)分別為(64.35±19.70)pg/ml、(74.35±23.85) pg/ml,與溶媒對(duì)照組(112.18±28.66) pg/ml比較,組間多重比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3、常氧組和低氧組培養(yǎng)12h后HaCaT細(xì)胞CCL20mRNA表達(dá)(△CT值)分別為：-15.19±0.13、-13.70±0.10,兩組間表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-14.430,P=0.001)；喜樹堿(100nmol/L)干預(yù)與非干預(yù)的HIF-1amRNA表達(dá)(△CT值)分別為：常氧組-5.575±0.29、-5.451±0.21；低氧組-6.543±0.57、-6.203±0.31；低氧較常氧條件下HaCaT細(xì)胞HIF-1amRNA的表達(dá)下調(diào),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=29.856,P=0.000)；喜樹堿干預(yù)和非干預(yù)組間HaCaT細(xì)胞HIF-1amRNA的表達(dá)差異在常氧和低氧條件下均無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=I.667,P=0.213)。結(jié)論低濃度喜樹堿可呈時(shí)間和濃度依賴關(guān)系抑制HaCaT細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡；低濃度喜樹堿可抑制HaCaT細(xì)胞HIF-1a蛋白表達(dá),對(duì)HIF-1amRNA的表達(dá)水平無明顯影響；低氧條件下HaCaT細(xì)胞CCL20mRNA表達(dá)較常氧增高,一定濃度喜樹堿可抑制HaCaT細(xì)胞CCL20的分泌。
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【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R758.63

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

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2 譚慧心;;拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ抑制劑研究進(jìn)展[J];中國藥理學(xué)通報(bào);2009年04期

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本文編號(hào)：2466034