【摘要】：目的:探討人著色性干皮病基因D(XPD)和p53對乙型肝炎病毒(HBV)復制的影響。方法:使用脂質體轉染法把重組質粒pEGFP-N2/XPD和空載質粒pEGFP-N2轉染進入人肝癌細胞株HepG2.2.15細胞,轉染后的第2天用20μmol/L pifithrin-α(p53抑制劑)孵育細胞24 h。實驗共分為空白對照組、pEGFP-N2組、pEGFPN2/XPD組、pEGFP-N2/XPD+pifithrin-α組和pifithrin-α組。使用RT-PCR法檢測XPD、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)及乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)mRNA表達的變化;使用ELISA法檢測培養(yǎng)上清液中HBsAg和HBeAg含量的變化;用熒光定量PCR法檢測培養(yǎng)上清液中HBV-DNA含量的變化;用bDNA法檢測細胞內核心顆粒中HBV-DNA含量的變化。結果:RT-PCR結果顯示,重組質粒pEGFP-N2/XPD的轉染可使得XPD mRNA表達增高,XPD表達增高能使得HBsAg、HBeAg和HBx mRNA表達明顯減少,而pifithrin-α能抑制XPD的這一作用(均P0.01)。ELISA結果顯示,XPD表達增高能使得培養(yǎng)上清液中HBsAg和HBeAg含量明顯減少,而pifithrin-α能抑制XPD的這一作用(均P0.01)。熒光定量PCR結果顯示,XPD表達增高能使得培養(yǎng)上清液中HBV-DNA含量明顯減少,而pifithrin-α能抑制XPD的這一作用(均P0.01)。bDNA結果顯示,XPD表達增高使得細胞內核心顆粒中HBV-DNA含量明顯減少,而pifithrin-α能抑制XPD的這一作用(均P0.01)。結論:XPD能通過p53通路抑制HBV復制,所以XPD和p53可能成為乙型肝炎抗病毒治療的作用靶點。
[Abstract]:Objective: to investigate the effect of human xeroderma pigmentosa gene D (XPD) and p53 on the replication of hepatitis B virus (HBV) (HBV). Methods: recombinant plasmid pEGFP-N2/XPD and empty plasmid pEGFP-N2 were transfected into human hepatoma cell line HepG2.2.15 cells by liposome transfection. The cells were incubated with 20 渭 mol/L pifithrin- 偽 (p53 inhibitor) for 24 h on the second day after transfection. The experiment was divided into blank control group, pEGFP-N2 group, pEGFPN2/XPD group, pEGFP-N2/XPD pifithrin- 偽 group and pifithrin- 偽 group. RT-PCR method was used to detect the expression of (HBsAg), hepatitis B antigen (HBeAg) and hepatitis B virus X protein (HBx) mRNA, ELISA method was used to detect the content of HBsAg and HBeAg in the supernatant. Fluorescence quantitative PCR assay was used to detect the changes of HBV-DNA content in supernatant and bDNA method was used to detect the content of HBV-DNA in the core granules. Results: the results of RT-PCR showed that transfection of recombinant plasmid pEGFP-N2/XPD could increase the expression of XPD mRNA and decrease the expression of HBsAg,HBeAg and HBx mRNA. However, pifithrin- 偽 could inhibit this effect of XPD (P0.01). ELISA results showed that the increase of XPD expression could significantly reduce the contents of HBsAg and HBeAg in the supernatant, while pifithrin- 偽 could inhibit the effect of XPD (P0.01). The results of fluorescence quantitative PCR showed that the increased expression of XPD could significantly decrease the content of HBV-DNA in the supernatant, while pifithrin- 偽 could inhibit the effect of XPD (P0.01). BDNA results showed that, P < 0.05). The increased expression of XPD significantly reduced the content of HBV-DNA in the core granules, while pifithrin- 偽 inhibited the effect of XPD (all P0.01). Conclusion: XPD can inhibit HBV replication through p53 pathway, so XPD and p53 may be the targets of antiviral therapy.
【作者單位】： 南昌大學第二附屬醫(yī)院消化內科;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(No.81300348) 江西省科技廳社會發(fā)展領域項目(No.20141BBG70038) 江西省衛(wèi)生廳科技計劃項目(No.20141070)
【分類號】：R758.58;R512.62

【參考文獻】

相關期刊論文 前3條

1 湯蕾;張吉翔;熊瑛;;人著色性干皮病D組基因的克隆及其真核表達[J];生物醫(yī)學工程學雜志;2008年03期

2 陳林林;謝青;單曉亮;權會琴;陳慶美;周帆;聶丹;唐霓;;乙型肝炎病毒X蛋白抑制SFRP5啟動子的活性[J];中國病理生理雜志;2013年02期

3 張香梅;樂曉華;陳培芬;茍繼周;孫炎;鐘荀珍;周亞敏;劉曉玲;陳青山;;乙型肝炎病毒對肝內TGF-β_1/Smads信號通路的作用[J];中國病理生理雜志;2013年12期

【共引文獻】

相關期刊論文 前10條

1 丁浩;馬果果;張吉翔;;重組質粒pEGFP-N2/XPD和Pifithrin-α對肝癌細胞增殖及凋亡的影響[J];廣東醫(yī)學;2012年10期

2 田明;游春嬌;張吉翔;;人剪切修復基因XPD對肝癌細胞P53和Ets-1基因的作用[J];廣東醫(yī)學;2014年08期

3 曾小冬;何金秋;;乙型肝炎病毒X基因與肝癌關系的研究進展[J];廣東醫(yī)學;2014年11期

4 俞菊梅;孫國芳;李菊香;洪葵;程曉曙;;siRNA對人臍靜脈內皮細胞中人剪切修復基因表達和凋亡的影響[J];廣東醫(yī)學;2014年18期

5 張南;李菊香;丁浩;洪葵;吳清華;程曉曙;;人剪切修復基因著色性干皮病基因D對人臍靜脈內皮細胞的促凋亡作用[J];中國動脈硬化雜志;2012年05期

6 朱鵬翔;李祺;丁浩;;重組質粒pEGFP-N2/XPD轉染條件及Pifithrin-α孵育條件的探索[J];南昌大學學報(醫(yī)學版);2013年08期

7 馬果果;張吉翔;;人剪切修復基因XPD對p52和p21基因的影響[J];天津醫(yī)藥;2011年06期

8 丁浩;張吉翔;;XPD和P53對HepG2.2.15增殖及乙型肝炎病毒X蛋白表達的影響[J];天津醫(yī)藥;2012年02期

9 鄒穎穎;張吉翔;;人剪切修復基因XPD對肝癌細胞生長及ERG基因的影響[J];天津醫(yī)藥;2013年01期

10 王芬芬;張吉翔;;XPD對SMMC-7721肝癌細胞中DNp73和GADD45β的調控及意義[J];世界華人消化雜志;2012年09期

相關博士學位論文 前2條

1 丁浩;XPD通過P53抑制乙型肝炎病毒復制、HBx表達和肝癌增殖[D];南昌大學;2012年

2 國賀;rhG-CSF對環(huán)磷酰胺致白細胞減少癥模型中小鼠脾臟基因轉錄組的影響[D];吉林大學;2014年

相關碩士學位論文 前5條

1 馬果果;人剪切修復基因XPD對p52及p21基因的影響[D];南昌大學;2011年

2 張南;人剪切修復基因XPD對人臍靜脈內皮細胞的促凋亡作用[D];南昌大學;2012年

3 鄒穎穎;人剪切修復基因XPD對肝癌細胞生長及ERG基因的影響[D];南昌大學醫(yī)學院;2013年

4 王芬芬;XPD對SMMC-7721肝癌細胞中DNp73和GADD45β的調控及意義[D];南昌大學醫(yī)學院;2013年

5 曾斌;XPD對肝癌HepG2增殖及REDD1基因表達的影響[D];南昌大學;2014年

【二級參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 紀輝;遲寶榮;張一寧;;肝纖維化與肝星狀細胞[J];吉林大學學報(醫(yī)學版);2008年03期

2 俞蕾敏;呂賓;;TGF-β smad信號轉導通路與肝纖維化的關系[J];國際消化病雜志;2008年05期

3 呂沐瀚;李曉云;李昌平;;轉化生長因子β1對肝星狀細胞活化及跨膜信號轉導影響與舒肝顆粒的干預[J];中國組織工程研究與臨床康復;2009年50期

4 賴婭芳;楊巖;盛慧萍;;慢性乙型肝炎患者血清中IFN-γ、IL-10、TGF-β1水平與HBV-DNA載量的關系[J];寧夏醫(yī)科大學學報;2010年02期

5 徐志強,成軍,張鴻飛;HBcAg生物學特性研究進展[J];世界華人消化雜志;2004年12期

6 哈明昊;饒慧瑛;劉峰;潘孝本;封波;陳紅松;魏來;;乙型肝炎病毒促進CTGF和TGF-β1在肝星狀細胞中的表達[J];世界華人消化雜志;2008年09期

7 楊斌;曾維政;吳曉玲;;HSCs表型轉化的信號轉導通路及其阻斷劑的研究進展[J];世界華人消化雜志;2009年22期

8 劉，

本文編號：2408514