發(fā)布時(shí)間：2019-01-14 08:24

【摘要】：目的:探討人著色性干皮病基因D(XPD)和p53對(duì)乙型肝炎病毒(HBV)復(fù)制的影響。方法:使用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法把重組質(zhì)粒pEGFP-N2/XPD和空載質(zhì)粒pEGFP-N2轉(zhuǎn)染進(jìn)入人肝癌細(xì)胞株HepG2.2.15細(xì)胞,轉(zhuǎn)染后的第2天用20μmol/L pifithrin-α(p53抑制劑)孵育細(xì)胞24 h。實(shí)驗(yàn)共分為空白對(duì)照組、pEGFP-N2組、pEGFPN2/XPD組、pEGFP-N2/XPD+pifithrin-α組和pifithrin-α組。使用RT-PCR法檢測(cè)XPD、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)及乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)mRNA表達(dá)的變化;使用ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)上清液中HBsAg和HBeAg含量的變化;用熒光定量PCR法檢測(cè)培養(yǎng)上清液中HBV-DNA含量的變化;用bDNA法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)核心顆粒中HBV-DNA含量的變化。結(jié)果:RT-PCR結(jié)果顯示,重組質(zhì)粒pEGFP-N2/XPD的轉(zhuǎn)染可使得XPD mRNA表達(dá)增高,XPD表達(dá)增高能使得HBsAg、HBeAg和HBx mRNA表達(dá)明顯減少,而pifithrin-α能抑制XPD的這一作用(均P0.01)。ELISA結(jié)果顯示,XPD表達(dá)增高能使得培養(yǎng)上清液中HBsAg和HBeAg含量明顯減少,而pifithrin-α能抑制XPD的這一作用(均P0.01)。熒光定量PCR結(jié)果顯示,XPD表達(dá)增高能使得培養(yǎng)上清液中HBV-DNA含量明顯減少,而pifithrin-α能抑制XPD的這一作用(均P0.01)。bDNA結(jié)果顯示,XPD表達(dá)增高使得細(xì)胞內(nèi)核心顆粒中HBV-DNA含量明顯減少,而pifithrin-α能抑制XPD的這一作用(均P0.01)。結(jié)論:XPD能通過(guò)p53通路抑制HBV復(fù)制,所以XPD和p53可能成為乙型肝炎抗病毒治療的作用靶點(diǎn)。
[Abstract]:Objective: to investigate the effect of human xeroderma pigmentosa gene D (XPD) and p53 on the replication of hepatitis B virus (HBV) (HBV). Methods: recombinant plasmid pEGFP-N2/XPD and empty plasmid pEGFP-N2 were transfected into human hepatoma cell line HepG2.2.15 cells by liposome transfection. The cells were incubated with 20 渭 mol/L pifithrin- 偽 (p53 inhibitor) for 24 h on the second day after transfection. The experiment was divided into blank control group, pEGFP-N2 group, pEGFPN2/XPD group, pEGFP-N2/XPD pifithrin- 偽 group and pifithrin- 偽 group. RT-PCR method was used to detect the expression of (HBsAg), hepatitis B antigen (HBeAg) and hepatitis B virus X protein (HBx) mRNA, ELISA method was used to detect the content of HBsAg and HBeAg in the supernatant. Fluorescence quantitative PCR assay was used to detect the changes of HBV-DNA content in supernatant and bDNA method was used to detect the content of HBV-DNA in the core granules. Results: the results of RT-PCR showed that transfection of recombinant plasmid pEGFP-N2/XPD could increase the expression of XPD mRNA and decrease the expression of HBsAg,HBeAg and HBx mRNA. However, pifithrin- 偽 could inhibit this effect of XPD (P0.01). ELISA results showed that the increase of XPD expression could significantly reduce the contents of HBsAg and HBeAg in the supernatant, while pifithrin- 偽 could inhibit the effect of XPD (P0.01). The results of fluorescence quantitative PCR showed that the increased expression of XPD could significantly decrease the content of HBV-DNA in the supernatant, while pifithrin- 偽 could inhibit the effect of XPD (P0.01). BDNA results showed that, P < 0.05). The increased expression of XPD significantly reduced the content of HBV-DNA in the core granules, while pifithrin- 偽 inhibited the effect of XPD (all P0.01). Conclusion: XPD can inhibit HBV replication through p53 pathway, so XPD and p53 may be the targets of antiviral therapy.
【作者單位】： 南昌大學(xué)第二附屬醫(yī)院消化內(nèi)科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81300348) 江西省科技廳社會(huì)發(fā)展領(lǐng)域項(xiàng)目(No.20141BBG70038) 江西省衛(wèi)生廳科技計(jì)劃項(xiàng)目(No.20141070)
【分類(lèi)號(hào)】：R758.58;R512.62

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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8 劉，

本文編號(hào)：2408514