本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-210對CD4+T細(xì)胞活化的調(diào)控及其在尋常型銀屑病發(fā)病中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中南大學(xué)》 2013年

MicroRNA-210對CD4+T細(xì)胞活化的調(diào)控及其在尋常型銀屑病發(fā)病中的作用

王利濤  

【摘要】：目的：尋常型銀屑病是一種常見的慢性復(fù)發(fā)性炎癥性皮膚病,以鱗屑性紅斑為特征,因影響外觀,給患者造成嚴(yán)重的心理負(fù)擔(dān)。尋常型銀屑病的病因及發(fā)病機制尚不明確,目前研究認(rèn)為T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng),特別是Thl細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫反應(yīng)及調(diào)節(jié)性T細(xì)胞免疫抑制功能缺陷,在尋常型銀屑病發(fā)病中起重要作用。越來越多的研究表明microRNAs通過調(diào)控相應(yīng)靶基因的表達(dá)在CD4+T細(xì)胞的異�；罨衅鹬种匾淖饔�。我們課題組之前利用Affymetrix microRNA基因芯片技術(shù)比較了9例尋常型銀屑病患者及9例健康對照外周血單個核細(xì)胞(PBMCs)中microRNAs表達(dá)水平的差異并通過RT-PCR進行驗證,發(fā)現(xiàn)microRNA-210(miR-210)在尋常型銀屑病患者PBMCs中表達(dá)明顯升高。本課題進一步探索了miR-210在尋常型銀屑病免疫失調(diào)中的作用及機制,為揭示該病的發(fā)病機制提供新的思路。 方法：收集18例尋常型銀屑病病人及18例正常對照的健康人外周血,利用密度梯度離心法分離PBMCs,免疫磁珠法分離CD4+T細(xì)胞。利用實時熒光定量PCR (realtime PCR)檢測miR-210表達(dá)水平；利用Mirbase/Targetscans/PicTar等生物信息學(xué)軟件在線預(yù)測miR-210的潛在靶基因；選擇可能與尋常型銀屑病發(fā)病相關(guān)的靶基因,進而利用熒光素酶報告基因系統(tǒng)驗證兩者之間的調(diào)控關(guān)系；利用realtimePCR檢測CD4+T細(xì)胞中miR-210潛在靶基囚mRNA的表達(dá)水平,同時利用Western blot檢測其蛋白水平；利用T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒將miR-210mimic或inhibitor及其陰性對照分別轉(zhuǎn)染正常人及尋常型銀屑病病人CD4+T細(xì)胞；利用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子水平。 結(jié)果：與正常對照相比,miR-210在尋常型銀屑病人CD4+T細(xì)胞中表達(dá)水平明顯升高；Mirbase/Targetsc ans/P icTar等生物信息學(xué)軟件預(yù)測顯示轉(zhuǎn)錄因子FOXP3是miR-210的潛在靶基因之一,熒光素酶報告基因系統(tǒng)證實FOXP3為miR-210的靶基因；在尋常型銀屑病人CD4+T細(xì)胞中FOXP3表達(dá)水平明顯降低,與miR-210的表達(dá)水平呈顯著負(fù)相關(guān)。在正常人CD4+T細(xì)胞中過表達(dá)miR-210時,與對照組相比,FOXP3蛋白表達(dá)水平明顯下降,同時細(xì)胞因子IL-10、TGF-β表達(dá)水平亦明顯降低,而IFN-γ表達(dá)水平明顯升高；相反,在尋常型銀屑病外周血CD4+T細(xì)胞中的特異性抑制miR-210表達(dá)時,FOXP3蛋白表達(dá)水平明顯升高,同時細(xì)胞因子IL-10、TGF-β表達(dá)水平亦明顯升高,而IFN-γ表達(dá)水平明顯降低。 結(jié)論：miR-210在尋常型銀屑病CD4+T細(xì)胞中過度表達(dá),并通過抑制其靶基因FOXP3表達(dá),導(dǎo)致CD4+T細(xì)胞的異�；罨�,炎性因子分泌增加,進而參與銀屑病的發(fā)生、發(fā)展。圖24個,表20個,參考文獻(xiàn)45篇。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R758.63
【目錄】：

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