【摘要】：研究背景： 蕈樣肉芽腫(mycosis fungoides, MF)是最常見(jiàn)的原發(fā)性皮膚T細(xì)胞淋巴瘤,以小到中等程度大的具有腦回狀核的T淋巴細(xì)胞親表皮性增生為特征。由于與多種良性淋巴細(xì)胞增生性疾病和反應(yīng)性皮膚疾病相似,MF不易確診,特別是在疾病早期。MF目前無(wú)特異性的腫瘤標(biāo)記物,可用于療效觀察和判斷預(yù)后的生物學(xué)標(biāo)記物十分有限。近年來(lái),蛋白質(zhì)組學(xué)已初步開(kāi)始用于MF腫瘤標(biāo)記物的研究。本課題組前期通過(guò)雙向凝膠電泳結(jié)合MALDI質(zhì)譜對(duì)MF患者皮損組織和正常人皮膚組織進(jìn)行比較分析,鑒定出31種差異表達(dá)蛋白質(zhì),其中錳超氧化物歧化酶(MnSOD)、脂肪酸結(jié)合蛋白5(FABP5)和S100A8這3種蛋白質(zhì)經(jīng)多組比較反復(fù)在MF皮損組織表達(dá)增高。之后提取MF皮損組織和正常人皮膚組織總蛋白,應(yīng)用免疫印跡法(Western blot, WB)證實(shí)上述3種蛋白在MF皮損組織高表達(dá)。 目的： (1)用相應(yīng)抗體驗(yàn)證另外兩種質(zhì)譜鑒定出的差異表達(dá)蛋白即過(guò)氧化氫酶1(peroxiredoxin 1, PRDX1)和肽酰-脯氨酰-順?lè)词疆悩?gòu)酶A(peptidyl-prolyl isomerase Cyclophilin A, PPIA)在MF患者皮損組織和正常人皮膚組織中的差異表達(dá)； (2)定位PRDX1、PPIA、MnSOD和FABP5在MF患者皮損組織和正常人皮膚組織中的差異表達(dá)部位； (3)找到MF皮損淋巴細(xì)胞內(nèi)差異表達(dá)的相關(guān)蛋白,研究其在人皮膚T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系(Hut-78)中的表達(dá)。 方法： (1)提取正常皮膚組織和MF皮損組織總蛋白,用WB法檢測(cè)PRDX1和PPIA的表達(dá)； (2)用免疫組化法定位PRDX1、PPIA、MnSOD和FABP5這4種蛋白在MF組織中的表達(dá)； (3)采用正常PBMCs和Hut-78細(xì)胞,WB法和免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)MF皮損組織淋巴細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)差異表達(dá)的相關(guān)蛋白。 結(jié)果： (1) PRDX1蛋白在MF皮損組織淋巴細(xì)胞中高表達(dá),PPIA蛋白在MF皮損組織的表達(dá)與正常對(duì)照相比無(wú)明顯差異,MnSOD蛋白在MF皮損組織的表皮和真皮淋巴細(xì)胞中高表達(dá),FABP5蛋白在MF皮損組織表皮內(nèi)高表達(dá)； (2)與正常PBMCs相比,PRDX1蛋白在Hut-78細(xì)胞中高表達(dá),MnSOD蛋白在Hut-78細(xì)胞中表達(dá)降低。 結(jié)論： (1) PRDX1和MnSOD蛋白可能為MF潛在的腫瘤標(biāo)記物； (2) PPIA和FABP5蛋白不適于做為MF的腫瘤標(biāo)記物； (3)體外培養(yǎng)環(huán)境對(duì)皮膚惡性T淋巴細(xì)胞的MnSOD蛋白表達(dá)可能存在影響。
[Abstract]:Background: fungoid granuloma (mycosis fungoides, MF) is the most common primary cutaneous T-cell lymphoma characterized by small to medium degree epidermogenic proliferation of T lymphocytes with gyrus nucleus. MF is not easy to diagnose because it is similar to many benign lymphoproliferative diseases and reactive skin diseases, especially in the early stage of the disease. MF has no specific tumor markers at present. Biological markers for therapeutic observation and prognosis are limited. In recent years, proteomics has been applied to the study of MF tumor markers. We compared and analyzed the lesions of MF patients and normal skin tissues by two-dimensional gel electrophoresis and MALDI mass spectrometry, and identified 31 differentially expressed proteins, including manganese superoxide dismutase (MnSOD),). Fatty acid binding protein 5 (FABP5) and S100A8 were repeatedly expressed in the lesions of MF. The total proteins were extracted from the lesions of MF and normal human skin, and the overexpression of the three proteins in the lesions of MF was confirmed by Western blot (Western blot, WB). Objective: (1) to identify two differentially expressed proteins identified by mass spectrometry, peroxiredoxin 1 (PRDX1) and peptidyl-prolyl isomerase Cyclophilin A, (peptidyl-proline cis-trans isomerase A). The differential expression of PPIA in the lesions of MF patients and normal skin tissues; (2) location of differential expression of PRDX1,PPIA,MnSOD and FABP5 in lesions of MF patients and normal skin tissues; (3) to find the differentially expressed proteins in lymphocytes of MF and to study their expression in human cutaneous T-cell lymphoma cell line (Hut-78). Methods: (1) the total protein of normal skin and MF was extracted and the expression of PRDX1 and PPIA was detected by WB method. (2) the expression of PRDX1,PPIA,MnSOD and FABP5 in MF was detected by immunohistochemical method. (3) using normal PBMCs and Hut-78 cells, WB and immunocytochemistry were used to detect the differentially expressed proteins in the lymphocytes of MF lesions. Results: (1) the expression of PRDX1 protein in lymphocytes of MF lesions was higher than that of normal controls. The expression of PPIA protein in MF tissues was not significantly different from that in normal controls. The expression of MnSOD protein was highly expressed in the epidermis and dermis lymphocytes of MF lesions. FABP5 protein was highly expressed in the epidermis of MF lesions. (2) compared with normal PBMCs, PRDX1 protein was highly expressed in Hut-78 cells and MnSOD protein was decreased in Hut-78 cells. Conclusion: (1) PRDX1 and MnSOD proteins may be potential tumor markers for MF, (2) PPIA and FABP5 proteins are not suitable for MF tumor markers. (3) the expression of MnSOD protein in skin malignant T lymphocytes may be affected by the culture environment in vitro.
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類號(hào)】：R739.5

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本文編號(hào)：2357855