【摘要】：第—部分：上海地區(qū)早期梅毒患者皮損拭子梅毒螺旋體分型及與神經(jīng)梅毒相關(guān)性的初步研究 背景：梅毒是一種性傳播疾病,可增加HIV感染和傳播的危險(xiǎn)性,嚴(yán)重影響人類(lèi)身心健康。20世紀(jì)80年代以來(lái)我國(guó)梅毒發(fā)病率迅速上升,上海地區(qū)梅毒發(fā)病率遠(yuǎn)超全國(guó)平均發(fā)病率。小樣本分子流行病學(xué)研究顯示上海地區(qū)梅毒螺旋體常見(jiàn)型別為14f,此結(jié)果與中國(guó)其他地區(qū)結(jié)果存在差異。 目的：對(duì)上海地區(qū)較大樣本梅毒患者的皮損進(jìn)行梅毒螺旋體基因分型研究、連續(xù)5年監(jiān)測(cè)其變化,為梅毒的分子流行病學(xué)研究和預(yù)防提供可靠的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。同時(shí)初步探討梅毒螺旋體的基因型別與神經(jīng)梅毒的相關(guān)性。 方法：2007年8月至2012年12月就診于上海市皮膚病醫(yī)院,有濕潤(rùn)梅毒皮損的患者,取拭子進(jìn)行DNA提取,tp47基因篩選梅毒螺旋體DNA,PCR擴(kuò)增arp、tpr及tp0548三種基因,以arp基因片段長(zhǎng)度大小、tpr基因RFLP型別及tp0548基因測(cè)序結(jié)果分型,聯(lián)合確定梅毒螺旋體基因型別。 結(jié)果：共入組372例患者,其中梅毒螺旋體DNA陽(yáng)性者316例,可以完全分型者304例。共檢測(cè)出10種arp型別,分別為4,6,8,9,11,12,13,14,15及19型；檢出3種tpr型別,分別為a d及o型。聯(lián)合arp及tpr,可區(qū)分為12個(gè)CDC型別,最常見(jiàn)型別為14d。依據(jù)tp0548測(cè)序結(jié)果,可分為a,c,f,g及i五種型別。聯(lián)合arp、tpr、tp0548三基因,12種CDC型別可進(jìn)一步區(qū)分為14種基因亞型。最常見(jiàn)亞型為14d/f,占絕大多數(shù)(88.8%,270/304),次常見(jiàn)亞型為.1.5d/f有11例(11/304,3.6%),其次為13d/f和19d/c,分別有4例患者感染(4/304,1.3%)。5年時(shí)間內(nèi),14d/f型一直為上海地區(qū)優(yōu)勢(shì)基因型。304例可完全分型的患者中,有52例進(jìn)行了腰椎穿刺。其中44例感染14d/f型的患者中,2例診斷為神經(jīng)梅毒；2例感染19d/c型的患者,均診斷為神經(jīng)梅毒；另有6例感染非14d/f非19d/c型的梅毒患者,未發(fā)現(xiàn)神經(jīng)梅毒。 結(jié)論：上海地區(qū)梅毒螺旋體型別分布較為集中,最常見(jiàn)基因型別為14d/f型,持續(xù)5年均占絕對(duì)主導(dǎo)優(yōu)勢(shì)。本研究中未發(fā)現(xiàn)感染14d/f型是神經(jīng)梅毒發(fā)病的高危因素�；蛐蛣e與神經(jīng)梅毒的相關(guān)性研究,尚需積累更多的數(shù)據(jù)。 第二部分：血液梅毒螺旋體DNA提取取方法的構(gòu)建 背景：目前多采用梅毒患者的濕潤(rùn)皮損拭子進(jìn)行DNA提取,對(duì)梅毒螺旋體進(jìn)行分子流行病學(xué)研究及耐藥基因檢測(cè)等。用梅毒患者其他類(lèi)型臨床樣本進(jìn)行DNA提取及分子分型研究較少,結(jié)果不一,國(guó)內(nèi)尚無(wú)相關(guān)報(bào)道。而多數(shù)梅毒患者就診時(shí)無(wú)濕性潰瘍,限制了分子生物學(xué)的相關(guān)研究。 方法：采集未經(jīng)治療的一期,二期,隱性梅毒患者全血及血漿。使用Qiagen DNA Blood Mini試劑盒,優(yōu)化條件進(jìn)行DNA提取,tp47基因篩選梅毒螺旋體DNA, PCR擴(kuò)增arp、tpr及tp0548三種基因,聯(lián)合確定基因型別。 結(jié)果：共提取60份樣本,其中包括15例血漿樣本、45例全血樣本。45例全血樣本中,來(lái)自一期梅毒10例,二期梅毒患者25例,隱性梅毒10例。血漿樣本所提取DNA經(jīng)tp47基因篩查均為陰性。全血樣本中,一期梅毒陽(yáng)性率0%(0/10),二期梅毒陽(yáng)性率36%(9/25),隱性梅毒陽(yáng)性率20%(2/10)。tp47基因陽(yáng)性樣本中,arp基因陽(yáng)性率為45.5%(5/11),tpr基因陽(yáng)性率為54.5%(6/11)。 結(jié)論：初步構(gòu)建、優(yōu)化了從血液中提取梅毒螺旋體DNA的方法。二期梅毒患者的全血標(biāo)本用于梅毒螺旋體DNA提取及分型,陽(yáng)性率較高。
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【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類(lèi)號(hào)】：R759.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2354587