【摘要】： 惡性黑色素瘤因具有高度遷移性和致死性而被人們熟知。明膠酶,即基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)和基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9),在黑色素瘤遷移過程中參與基底膜降解和細胞外基質(zhì)重構(gòu),與腫瘤惡性化程度密切相關。明膠酶不僅參與胞外基質(zhì)與基底膜重構(gòu),在血管發(fā)生、侵潤和遷移等腫瘤發(fā)生過程中發(fā)揮了重要作用。隨著對明膠酶研究的深入,人們發(fā)現(xiàn)明膠酶不僅由腫瘤細胞分泌并且可以由基質(zhì)細胞分泌,不僅能與細胞外基質(zhì)蛋白相互作用,而且能與包括整合素在內(nèi)的多種非基質(zhì)蛋白相互作用。 在黑色素瘤中,整合素αvβ3(integrin)是一類重要的異二聚體跨膜糖蛋白,能夠與含有RGD片段的配體結(jié)合,通過這種結(jié)合αvβ3可以介導細胞外配體與胞內(nèi)骨架蛋白和各種信號途徑間的信號傳遞。然而,整合素αvβ3與MMP-2間的識別是通過MMP-2羧基端的PEX區(qū)而非RGD區(qū),對于MMP-2是否能通過與αvβ3的這種結(jié)合而發(fā)揮一定的信號傳遞作用目前還沒有報道。 在本研究中,我們首先利用明膠酶譜法對A375細胞中明膠酶的表達進行了檢測,證實在人源黑色素瘤A375細胞中MMP-2和MMP-9均有所表達。通過使用MMP廣譜抑制劑對A375細胞鋪展和遷移進行觀察發(fā)現(xiàn),MMP-2對A375細胞的影響比較顯著。通過對A375細胞鋪展過程中MMP-2和F-actin進行免疫熒光標記,發(fā)現(xiàn)MMP-2與肌動蛋白細胞骨架的變化有一定相關性。同時,免疫熒光標記觀察發(fā)現(xiàn)MMP-2和整合素αvβ3在A375細胞懸浮、鋪展和遷移三種狀態(tài)下均有共定位現(xiàn)象。通過靜止粘附實驗我們證實,MMP-2能夠影響整合素αvβ3與其配體的結(jié)合能力。這些結(jié)果表明,MMP-2在A375中可能通過整合素αvβ3而發(fā)揮某些信號作用從而影響腫瘤細胞的發(fā)展。
[Abstract]:Malignant melanoma is well known for its high mobility and mortality. Gelatinase, namely matrix metalloproteinase 2 (MMP-2) and matrix metalloproteinase 9 (MMP-9), is involved in basement membrane degradation and extracellular matrix remodeling during melanoma migration, which is closely related to the malignancy of the tumor. Gelatinase not only participates in the remodeling of extracellular matrix and basement membrane, but also plays an important role in angiogenesis, invasion and migration. With the further study of gelatinase, it has been found that gelatinase is not only secreted by tumor cells but also by stromal cells, and can interact with extracellular matrix proteins. And can interact with a variety of non-matrix proteins, including integrins. In melanoma, integrin 偽 v 尾 3 (integrin) is an important heterodimer transmembrane glycoprotein that binds to ligand containing RGD fragments. This binding 偽 v 尾 3 mediates signal transduction between extracellular ligands, intracellular cytoskeleton proteins and various signal pathways. However, the recognition of integrin 偽 v 尾 3 and MMP-2 is through the PEX region of the carboxyl terminal of MMP-2 rather than the RGD region. It has not been reported whether MMP-2 can play a certain role in signal transduction through the combination of 偽 v 尾 3 with 偽 v 尾 3. In this study, we first detected the expression of gelatinase in A375 cells by gelatinase spectroscopy, and confirmed that both MMP-2 and MMP-9 were expressed in human melanoma A375 cells. The proliferation and migration of A375 cells were observed by using MMP broad-spectrum inhibitor. It was found that MMP-2 had a significant effect on A375 cells. By immunofluorescence labeling of MMP-2 and F-actin during the spreading of A375 cells, it was found that MMP-2 was related to the change of actin cytoskeleton. At the same time, immunofluorescence staining showed that MMP-2 and integrin 偽 v 尾 3 were co-located in A375 cell suspension, spreading and migration. Through the static adhesion experiment, we confirmed that MMP-2 can affect the binding ability of integrin 偽 v 尾 3 to its ligand. These results suggest that MMP-2 may play some signaling role in A375 by integrin 偽 v 尾 3, which may affect the development of tumor cells.
【學位授予單位】：東北師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R739.5

【共引文獻】

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本文編號：2234367