玫瑰糠疹患者外周血單個核細胞中TLR4、TLR9 mRNA及其下游MyD88、TRIFmRNA的
本文關鍵詞:玫瑰糠疹患者外周血單個核細胞中TLR4、TLR9 mRNA及其下游MyD88、TRIFmRNA的表達及意義,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。
《河北醫(yī)科大學》 2013年
玫瑰糠疹患者外周血單個核細胞中TLR4、TLR9 mRNA及其下游MyD88、TRIFmRNA的表達及意義
石麗平
【摘要】:目的:本課題應用SYBR Green I實時熒光定量RT-PCR技術檢測玫瑰糠疹(pityriasis rosea,PR)患者外周血單個核細胞(the peripheral bloodmononuclear cells,PBMC)中TLR4、TLR9mRNA及其下游MyD88、TRIFmRNA的表達狀況,從免疫角度探討TOLL樣受體在玫瑰糠疹發(fā)病機制中的意義。PR是一種臨床常見的炎癥性皮膚病,病程6-8周,具有自限性,其特征性表現(xiàn)是長軸與皮紋一致的圓形或橢圓形附有糠狀鱗屑的玫瑰色、鮮紅色或黃紅色的斑疹或丘疹。PR的病因不明,發(fā)病機制尚不清楚,目前多認為與病毒感染和細胞免疫有關。 機體在抵御病原體的入侵時有兩套免疫防御機制:固有性免疫和適應性免疫[1]。固有性免疫是宿主防御的第一道防線。固有性免疫應答利用皮膚和粘膜上皮這兩個物理屏障來避免感染并迅速作出應答。適應性免疫應答是由T和B細胞介導的相對較慢的過程,由于復雜的DNA重組使得其抗原受體高度多樣化,因此它既能識別異常的抗原也能識別保守的抗原。固有性免疫通過病原相關分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMPs)識別病原體,哺乳動物中負責識別PAMPs的受體稱為模式識別受體(pattern recognition receptors,PRRs)。TOLL樣受體(Toll-likereceptors,TLRS)是固有性免疫系統(tǒng)中一種重要的模式識別受體,它們完全是種系編碼并以既定的形式表達于免疫和非免疫細胞[1]。TLRS是近年研究的一個熱點,它們分布廣泛,既可以表達于免疫細胞也可以表達于非免疫細胞,被認為是固有性免疫和適應性免疫的橋梁。當TLRS識別病原體后便可介導固有免疫的跨膜信號轉(zhuǎn)導,并激活多種促炎癥因子如IL-12、TNF-α,進而參與抗感染的炎癥過程。此外,TLRS還可以通過細胞因子(如TNF-a、IL-1)、趨化因子(如IL-8、MIP2)、協(xié)同刺激分子(如CD-40、CD-80)和粘附分子(如ICAM-1)的產(chǎn)生[2-4]和上調(diào)抗原提呈細胞表面共刺激分子(如CD80/CD86)的表達,,在固有免疫和適應性免疫應答中起調(diào)節(jié)作用[5、6]。其中TLR4主要分布于抗原提呈細胞,革蘭陰性菌的細胞壁成分脂多糖是它的配體。TLR9表達于許多人類細胞,低甲基化的胞嘧啶磷酸鳥核苷酸(cytosine phosphate guanosine,CpG)DNA是它的配體,這種基序普遍存在于細菌及病毒的DNA中,但在哺乳動物中卻極為罕見。TLRS依賴于胞漿外區(qū)的接頭蛋白分子和激酶進行信號轉(zhuǎn)導。據(jù)接頭蛋白的不同分為MyD88(Myeloid differentiation factor-88,髓樣分化因子88)依賴性途徑和TRIF(Toll-IL-IR domain-containing adaptor-inducinginterferon-β,誘導干擾素β的含TIR結構域的銜接蛋白)依賴性途徑。TLR4既可以通過MyD88依賴性途徑也可以通過TRIF依賴性途徑進行信號轉(zhuǎn)導;TLR9僅通過MyD88依賴性途徑進行信號轉(zhuǎn)導。近年來,TLRS在皮膚炎癥、皮膚惡性腫瘤和防御機制方面都有著重大進展。 方法:病例組:26例玫瑰糠疹患者;對照組:20例健康人群。病例組:均來自河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院皮膚科門診,男12例,女14例,平均年齡:22.5歲,病程3天-1月,患者入選標準:⑴均有典型的臨床表現(xiàn):胸背部與皮紋長軸一致的黃紅色圓形或橢圓形境界清楚的斑疹或丘疹;⑵受試前臨床檢查無其他免疫相關性疾病、過敏性疾病、腫瘤和其他嚴重系統(tǒng)性疾;⑶1個月內(nèi)無系統(tǒng)用藥史,未服用免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素及抗組胺藥。對照組:20例均無過敏性疾病、自身免疫性疾病及家族史的健康人群,其性別、年齡與病例組經(jīng)統(tǒng)計學分析,均無統(tǒng)計學差異。本研究采用SYBR Green I實時熒光定量RT-PCR技術檢測病例組與對照組外周血單個核細胞中TLR4、TLR9及MyD88、TRIF mRNA的表達狀況,實驗數(shù)據(jù)應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件分析,以P<0.05為有統(tǒng)計學意義。統(tǒng)計學方法選用的是正態(tài)性檢驗、秩和檢驗中的Mann-Whitney檢驗,定量數(shù)據(jù)用中位數(shù)或四分位數(shù)表示。 結果: 1TLR4的mRNA表達水平檢測結果:經(jīng)過正態(tài)性檢驗P<0.1,不服從正態(tài)分布,結果用中位數(shù)或四分位數(shù)間距表示。病例組與正常對照組TLR4的mRNA表達水平的RQ值分別是8.102/11.87;7.275/4.96,采用秩和檢驗中的Mann-Whitney檢驗,二者在統(tǒng)計學上無顯著性差異(P=0.09>0.05),所以尚不能認為兩組TLR4的mRNA表達水平有差別。 2TLR9的mRNA表達水平檢測結果:經(jīng)過正態(tài)性檢驗P<0.1,不服從正態(tài)分布,結果用中位數(shù)或四分位數(shù)間距表示。病例組與正常對照組TLR9mRNA表達水平的RQ值分別是:1.592/3.86;3.13/8.93,采用Mann-Whitney檢驗,二者在統(tǒng)計學上有差異(P=0.030.05)。 3MyD88的mRNA表達水平檢測結果:經(jīng)過正態(tài)性檢驗P<0.1,不服從正態(tài)分布,結果用中位數(shù)或四分位數(shù)間距表示。病例組與正常對照組MyD88mRNA表達水平的RQ值分別是1.5005/1.445;1.7445/1.297,采用Mann-Whitney檢驗,二者在統(tǒng)計學上無顯著性差異(P=0.36>0.05),所以尚不能認為兩組MyD88的mRNA表達水平有差別。 4TRIF的mRNA表達水平檢測結果:經(jīng)過正態(tài)性檢驗P<0.1,不服從正態(tài)分布,結果用中位數(shù)或四分位數(shù)間距表示。病例組與正常對照組TLR4的mRNA表達水平的RQ值分別是3.0115/4.431;3.443/5.970,采用Mann-Whitney檢驗,二者在統(tǒng)計學上無顯著性差異(P=0.23>0.05),所以尚不能認為兩組TRIF的mRNA表達水平有差別。 結論: 1玫瑰糠疹患者外周血單個核細胞中的TLR4mRNA與TRIFmRNA表達水平與正常對照組相比均無統(tǒng)計學意義(P均0.05),表明病例組與正常對照組TLR4mRNA與TRIF mRNA表達水平無差別,推測玫瑰糠疹的發(fā)病可能與革蘭氏陰性菌感染無關。 2玫瑰糠疹患者外周血單個核細胞中的TLR9mRNA表達水平與正常對照組相比有統(tǒng)計學意義(P 0.05),表明玫瑰糠疹患者外周血單個核細胞中的TLR9mRNA低于正常對照組,原因可能是機體存在某些特定DNA序列抑制了TLR9的表達。根據(jù)本研究結果推測TLR9可能參與了玫瑰糠疹的發(fā)病。 3玫瑰糠疹患者外周血單個核細胞中的MyD88mRNA表達水平與正常對照組相比無統(tǒng)計學意義(P0.05),表明玫瑰糠疹患者外周血單個核細胞中的MyD88mRNA表達水平與正常對照組相比無差別,可能的原因是MyD88依賴途徑的上游不僅僅只有TLR9,多個TLRS均可以依賴MyD88依賴途徑進行信號傳導。
【關鍵詞】:
【學位授予單位】:河北醫(yī)科大學
【學位級別】:碩士
【學位授予年份】:2013
【分類號】:R758.64
【目錄】:
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本文編號:221436
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