【摘要】：目的構(gòu)建絲聚合蛋白(FLG)基因RNA干擾(RNA interference,RNAi)慢病毒表達載體。方法設(shè)計針對人FLG基因的mRNA干擾靶序列,合成相應(yīng)雙鏈DNA,通過BamH I和EcoRI酶切后的PGLV/H1/GFP載體連接產(chǎn)生shRNA載體,并與pHelper 1.0、pHelper 2.0兩種載體共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞培養(yǎng),獲得重組慢病毒載體后,轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞,實現(xiàn)針對FLG基因的RNA干擾。結(jié)果經(jīng)鑒定該實驗的慢病毒載體,對人正常皮膚細(xì)胞HACAT干擾效果達75%~95%,以RNAi3的沉默效應(yīng)最佳。結(jié)論重組的慢病毒載體為有關(guān)FLG基因的進一步研究奠定良好實驗基礎(chǔ),并能廣泛用于體內(nèi)基因治療及基因功能研究。
[Abstract]:Objective to construct the lentivirus expression vector of (FLG) gene RNA interference (RNA interference RNAi). Methods the mRNA interference target sequence of human FLG gene was designed and the corresponding double-stranded DNA was synthesized. The shRNA vector was ligated with the PGLV/H1/GFP vector digested by BamH I and EcoRI. The shRNA vector was co-transfected with pHelper 1.0pHelper 2.0 vector into 293T cells and the recombinant lentivirus vector was obtained. The RNA interference against FLG gene was realized by transfection of the target cells. Results the lentivirus vector was identified to interfere with HACAT of human normal skin cells, and the silencing effect of RNAi3 was the best. Conclusion the recombinant lentivirus vector provides a good experimental basis for the further study of FLG gene and can be widely used in gene therapy and gene function study in vivo.
【作者單位】： 山東大學(xué)附屬濟南市中心醫(yī)院皮膚科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No:81101183)
【分類號】：R758.2;Q782

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