【摘要】：白癜風(fēng)是一種常見(jiàn)的色素病，世界人口的發(fā)病率為0.5%-4%[1]，以局限性或泛發(fā)性皮膚色素脫失為特征。是一種毀容性的疾病，對(duì)病人造成很大的精神和心理壓力。發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，治療困難。盡管白癜風(fēng)的治療手段多種多樣，但是均不能達(dá)到治愈的目的。目前白癜風(fēng)的治療技術(shù)主要分為藥物治療、光療和外科治療等，對(duì)于穩(wěn)定期的白癜風(fēng)，，移植治療是一種快速有效的方法。但是難治易動(dòng)部位的白癜風(fēng)如關(guān)節(jié)、口周等活動(dòng)部位黑素細(xì)胞附著有一定的困難，因此利用組織工程技術(shù)，組織工程膜作為載體，應(yīng)用于白癜風(fēng)的治療領(lǐng)域。 目的： 探討利用殼聚糖／明膠復(fù)合交聯(lián)膜（ＣＣＧＭ）作為載體進(jìn)行黑素細(xì)胞移植，確定最佳移植時(shí)機(jī)，明確移植后黑素細(xì)胞在動(dòng)物創(chuàng)傷部位定植的動(dòng)態(tài)情況。方法： 將黑色素細(xì)胞接種于CCGM上，分別于4h、1d、2d、3d、4d、5d時(shí)通過(guò)MTT法測(cè)定黑素細(xì)胞的生長(zhǎng)情況、NaOH裂解法測(cè)定黑素含量，評(píng)估CCGM上黑素細(xì)胞的活性，確定載有黑素細(xì)胞組織工程膜的最佳移植時(shí)機(jī)。應(yīng)用皮膚共聚焦激光掃描顯微鏡結(jié)合免疫組化技術(shù)檢測(cè)CCGM上搭載的黑素細(xì)胞向動(dòng)物皮膚創(chuàng)面轉(zhuǎn)移情況。 結(jié)果： 4h、1d、2d、3d、4d、5d時(shí)黑素細(xì)胞在CCGM和普通培養(yǎng)皿上的增殖速度基本一致，黑素制造量均呈現(xiàn)逐漸增多的狀態(tài),以黑素細(xì)胞接種到CCGM48h黑素細(xì)增殖速度最快，黑素制造量最多，48h后黑素細(xì)胞的增殖及黑素制造量進(jìn)入平臺(tái)期，可知黑素細(xì)胞接種CCGM48h黑素細(xì)胞活性較好。黑素細(xì)胞接種到CCGM和普通培養(yǎng)皿上48h再移植到裸鼠的移植部位，移植后7d、14d、21d、28d皮膚共聚焦激光掃描顯微鏡和免疫組化檢測(cè)移植部位均有黑素細(xì)胞定植，以移植后28d最為明顯。 結(jié)論： 最佳移植時(shí)間是黑素細(xì)胞接種到CCGM上48h，移植后7d黑素細(xì)胞會(huì)種植在動(dòng)物創(chuàng)面基底層部位，后逐步增多。
[Abstract]:Vitiligo is a common pigment disease, the incidence of the world population is 0.5-4%, characterized by localized or generalized skin pigment loss. Is a disfigurement disease, causing great mental and psychological pressure to patients. The pathogenesis is complicated and the treatment is difficult. Although the treatment of vitiligo is varied, none of them can achieve the goal of cure. At present, the treatment of vitiligo is mainly divided into drug therapy, phototherapy and surgical treatment. Transplantation is a rapid and effective method for stable vitiligo. However, it is difficult to attach melanocytes in vitiligo such as joints and perioral areas. Therefore, tissue engineering technology and tissue engineering membrane are used as carriers for the treatment of vitiligo. Aim: to investigate the optimal time for melanocyte transplantation by using chitosan / gelatin composite cross-linked membrane (CCGM) as the carrier to determine the dynamic situation of melanocyte colonization in animal trauma site after transplantation. Methods: melanocytes were inoculated on CCGM. The growth of melanocytes was measured by MTT method and the content of melanin was determined by NaOH lysis method. The activity of melanocytes on CCGM was evaluated. To determine the optimal time for transplantation of tissue engineering membrane containing melanocytes. Skin confocal laser scanning microscopy and immunohistochemical technique were used to detect the metastasis of melanocytes on CCGM to animal skin wounds. Results: the proliferation rate of melanocytes on CCGM was basically the same as that on common culture dishes at 4 h, 1 d, 2 d, 3 d and 4 d, and the production of melanin increased gradually, and melanocytes inoculated into CCGM48h had the fastest fine proliferation rate. The proliferation of melanocytes and the amount of melanin production entered the plateau stage after 48 hours of maximum melanin production. The results showed that melanocytes inoculated with CCGM48h melanocytes had better activity. Melanocytes were inoculated into CCGM and common culture dish for 48 h and then transplanted to nude mice. After 7 days, 14 days, 21 days and 28 days after transplantation, melanocyte colonization was detected by confocal laser scanning microscope and immunohistochemistry, especially 28 days after transplantation. Conclusion: the best time of transplantation is that melanocytes are inoculated into CCGM for 48 hours. The melanocytes will be implanted in the basal layer of animal wound 7 days after transplantation and then increase gradually.
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R758.41

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本文編號(hào)：2152452