發(fā)布時間：2018-07-16 11:28

【摘要】： 目的:紅色毛癬菌(trichophyton rubrum)是一種最常見的親人性致病性皮膚癬菌,主要侵犯人的皮膚,指(趾)甲,偶可侵犯人的毛發(fā)。國內(nèi)外多個研究均顯示在淺部真菌病患者病原菌分析中,紅色毛癬菌的分離率占到首位。此外,國內(nèi)金學(xué)洙等人吉林15年菌種分析研究顯示在頭癬致病菌中,紅色毛癬菌的分離率隨年代逐漸增高,到90年代后期,由80年代后期的10.6%明顯增高至76.9%。紅色毛癬菌不僅引起皮膚感染,最近報道也引起深部組織感染如膿癬、肉芽腫等,其發(fā)病率也在逐年升高。由于該菌所致真菌病病程持久,且難治愈,易復(fù)發(fā),成為臨床亟待研究問題之一。臨床上對于紅色毛癬菌引起的足癬治療,推薦采用“1+1聯(lián)合治療”方案,即一種外用抗真菌藥物加一種口服抗真菌藥物聯(lián)合治療,可以縮短療程、提高療效及患者依從性、降低復(fù)發(fā)率。目前臨床上應(yīng)用的抗真菌藥物對紅色毛癬菌病有較好的療效,但這些藥物大都價格昂貴,毒副作用較大,且隨著這些抗真菌藥物的廣泛應(yīng)用,耐藥菌株不斷出現(xiàn),為臨床治療帶來困難。為減少藥物不良反應(yīng),減少耐藥菌株出現(xiàn),臨床常采用聯(lián)合用藥。亞硝酸鈉是一種常用的食品添加劑,世界食品衛(wèi)生科學(xué)委員會1992年發(fā)布的人體安全攝入亞硝酸鈉的標(biāo)準(zhǔn)為0~0.1mg/kg體重,按此標(biāo)準(zhǔn)使用和食用,對人體不會造成危害。亞硝酸鈉來源豐富,成本低廉,國外已有研究證實亞硝酸鈉在酸性條件下對多種酵母菌及皮膚癬菌有較強的殺傷作用,并且臨床上應(yīng)用其外用制劑治療足癬及甲真菌病有效。我科研究人員既往曾應(yīng)用MTT法測定亞硝酸鈉對紅色毛癬菌抗菌活性的影響,結(jié)果顯示在沙氏液基中亞硝酸鈉對紅色毛癬菌具有抑制作用;在1.25mmol/L ~160mmol/L濃度范圍內(nèi),亞硝酸鈉純品對紅色毛癬菌無細(xì)胞毒作用,其中在1.25mmol/L~10mmol/L濃度范圍內(nèi),隨著作用濃度的增加,抑制作用逐漸增強;而在10mmol/L~160mmol/L濃度范圍內(nèi)對紅色毛癬菌抑制作用差異無顯著性。電鏡觀察結(jié)果顯示,亞硝酸鈉影響菌絲超微結(jié)構(gòu),表現(xiàn)為菌絲的形態(tài)學(xué)改變以及紅色毛癬菌細(xì)胞膜和細(xì)胞壁的破壞,并在一定濃度范圍內(nèi)隨亞硝酸鈉藥物濃度的增加及作用時間的延長,對菌絲破壞程度增強,呈現(xiàn)劑量和時間依賴性。但目前尚未見亞硝酸鈉聯(lián)合其他臨床常用抗真菌藥物對紅色毛癬菌體外聯(lián)合抗菌作用的報道。 在過去的幾年里,對于皮膚癬菌的體外藥敏試驗方法及結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)尚無統(tǒng)一界定,直至2008年,美國國家臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)化研究所(CLSI)提出了產(chǎn)孢絲狀真菌微量液基稀釋法抗真菌藥敏試驗方案(M38-A方案)的第二次改良方案(M38-A2方案),其中增加了皮膚癬菌的相關(guān)內(nèi)容。本試驗參照該方案及其他相關(guān)文獻(xiàn),采用微量稀釋法應(yīng)用亞硝酸鈉聯(lián)合伊曲康唑、特比萘芬、氟康唑、伏立康唑及卡泊芬凈五種抗真菌藥物對臨床分離的30株紅色毛癬菌進行體外藥敏試驗,以探討其體外聯(lián)合用藥的抗菌活性及最佳聯(lián)合濃度,從而指導(dǎo)臨床合理使用抗真菌藥,有效預(yù)防和治療紅色毛癬菌引起的真菌感染性疾病提供依據(jù)。 方法: 1菌株分離、培養(yǎng)及鑒定 30株紅色毛癬菌均分離自河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院皮膚科門診的股癬及甲真菌病患者。自病變部位取材鏡檢并培養(yǎng),根據(jù)顯微鏡下特征及沙氏和馬鈴薯培養(yǎng)基菌落特征等鑒定為紅色毛癬菌。 2體外藥敏試驗 2.1抗真菌藥物單獨藥敏試驗 用移液器分別取抗真菌藥物倍比稀釋液100uL,依次加入96孔板的每行第1~10孔中,第11、12孔為空白及陽性對照,分別加入200uL及100uL RPMI1640液體培養(yǎng)基。將菌懸液用RPMI1640液體培養(yǎng)基稀釋50倍,得到二倍終濃度菌懸液,再依次將100uL菌懸液加入96孔板的第1~10列及第12列。30℃恒溫培養(yǎng)4~7天,陽性對照100%生長后判讀結(jié)果。 2.2亞硝酸鈉交叉聯(lián)合抗真菌藥物藥敏試驗 用微量移液器將藥物加入96孔板內(nèi),其中每行的第1~10孔,依次加入亞硝酸鈉倍比稀釋液50uL,濃度從高到低;每列第1~8孔依次加入抗真菌藥物倍比稀釋液50uL,濃度從高到低,余操作同單獨藥敏試驗。30℃恒溫培養(yǎng)5~7天,陽性對照100%生長后判讀結(jié)果。 3統(tǒng)計學(xué)方法: 應(yīng)用SPSS16.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理。單獨應(yīng)用抗真菌藥物MIC值之間比較采用多獨立樣本比較的Kruskal-wallis H檢驗,進一步兩兩比較采用秩轉(zhuǎn)換后單因素方差分析;各抗真菌藥物聯(lián)合亞硝酸鈉前后MIC值的比較采用配對樣本比較的Wilcoxon符號秩檢驗;亞硝酸鈉和抗真菌藥物聯(lián)合抗菌FIC值之間以及各抗真菌藥物不同濃度之間FIC值比較采用多個獨立樣本比較的Kruskal-wallis H檢驗,進一步兩兩比較采用Nemenyi法檢驗,P0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果: 1臨床分離菌株敏感性分布情況: 伊曲康唑耐藥菌株共5株;劑量依賴敏感菌株共20株;敏感菌株共5株。30株菌對特比奈芬均為敏感菌株。氟康唑耐藥菌株共1株;劑量依賴敏感菌株共3株;敏感菌株共26株。未發(fā)現(xiàn)同時對兩種或兩種以上藥物耐藥菌株。 2單獨應(yīng)用亞硝酸鈉和抗真菌藥物MIC值結(jié)果: 亞硝酸鈉、伊曲康唑、特比萘芬、氟康唑、伏立康唑、卡泊芬凈最低抑菌濃度MIC幾何均數(shù)分別為40mmol/L、0.3299ug/mL、0.0155ug/mL、4.8121ug/mL、0.0640ug/mL、1.5157ug/mL。各藥間采用多個獨立樣本比較的Kruskal-wallis H檢驗,χ2=160.138,P0.01,有統(tǒng)計學(xué)意義。兩兩比較經(jīng)秩轉(zhuǎn)換后單因素方差分析,任兩組之間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05。(table 1) 3抗真菌藥物聯(lián)合亞硝酸鈉后MIC值結(jié)果: 伊曲康唑、特比萘芬、氟康唑、伏立康唑、卡泊芬凈分別與亞硝酸鈉聯(lián)合之后MIC幾何均數(shù)分別為0.1403ug/mL、0.0214ug/mL、5.7890ug/mL、0.0532ug/mL、0.5236ug/mL。與聯(lián)合之前相比,經(jīng)配對樣本比較的Wilcoxon符號秩檢驗,伊曲康唑、卡泊芬凈MIC值降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05;特比奈芬、氟康唑MIC值升高,差異無統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05;伏立康唑MIC值降低,差異無統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05。(table 1) 4亞硝酸鈉和五種抗真菌藥交叉聯(lián)合抗菌FIC結(jié)果: 4.1亞硝酸鈉聯(lián)合不同濃度伊曲康唑抗菌FIC結(jié)果: 亞硝酸鈉各濃度分別與2ug/mL、1ug/mL、0.5ug/mL、0.25ug/mL、0.125ug/mL、0.0625ug/mL、0.0313ug/mL、0.0156ug/mL伊曲康唑交叉聯(lián)合所得FIC1所占比例分別為:3.3%(1/30)、3.3%(1/30)、16.7%(5/30)、20%(6/30)、50%(15/30)、30%(9/30)、10%(3/30)、13.3%(4/30);1≤FIC2所占比例分別為:0%(0/30)、13.3%(4/30)、16.7%(5/30)、53.3%(16/30)、23.3%(7/30)、33.3%(10/30)、50%(15/30)、46.7%(14/30);FIC≥2所占比例分別為:96.7%(29/30)、83.3%(25/30)、66.7%(20/30)、26.7%(8/30)、26.7%(8/30)、36.7%(11/30)、40%(12/30)、40%(12/30)。經(jīng)多個獨立樣本比較的Kruskal-wallis H檢驗,χ2=33.827,P0.001,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。進一步各濃度之間分別兩兩比較,伊曲康唑0.125ug/mL組分別與0.25ug/mL組、0.0625ug/mL組比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05;與其余各組相比,均有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05。(Fig.1, table 2) 4.2亞硝酸鈉聯(lián)合不同濃度特比奈芬抗菌FIC結(jié)果: 亞硝酸鈉各濃度分別與0.04ug/mL、0.02ug/mL、0.01ug/mL、0.005ug/mL、0.0025ug/mL、0.0013ug/mL、0.0006ug/mL特比奈芬交叉聯(lián)合所得FIC1所占比例分別為:0%(0/30)、3.3%(1/30)、10%(3/30)、20%(6/30)、13.3%(4/30)、13.3%(4/30)、13.3%(4/30);1≤FIC2所占比例分別為: 3.3%(1/30)、36.7%(11/30)、36.7%(11/30)、36.7%(11/30)、43.3%(13/30)、43.3%(13/30)、43.3%(13/30);FIC≥2所占比例分別為:96.7%(29/30)、60%(18/30)、53.3%(16/30)、43.3%(13/30)、43.3%(13/30)、43.3%(13/30)、43.3%(13/30)。經(jīng)多個獨立樣本比較的Kruskal-wallis H檢驗,χ2=4.299,P0.05,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。(Fig.2, table 3) 4.3亞硝酸鈉聯(lián)合不同濃度氟康唑抗菌FIC結(jié)果: 亞硝酸鈉各濃度分別與16ug/mL、8ug/mL、4 ug/mL、2ug/mL、1ug/mL、0.5ug/mL、0.25ug/mL、0.125ug/mL氟康唑交叉聯(lián)合所得FIC1所占比例分別為:3.3%(1/30)、10%(3/30)、10%(3/30)、10%(3/30)、10%(3/30)、10%(3/30)、13.3%(4/30)、13.3%(4/30);1≤FIC2所占比例分別為:10%(3/30)、26.7%(8/30)、43.3%(13/30)、43.3%(13/30)、36.7%(11/30)、40%(12/30)、36.7%(11/30)、36.7%(11/30);FIC≥2所占比例分別為:86.7%(26/30)、63.3%(19/30)、46.7%(14/30)、46.7%(14/30)、53.3%(16/30)、50%(15/30)、50%(15/30)、50%(15/30)。經(jīng)多獨立樣本比較的Kruskal-wallis H檢驗,χ2=14.234,P0.05,各濃度間差異有統(tǒng)計學(xué)意義。進一步兩兩比較,16ug/mL濃度組與其他組差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05;其余任兩組之間差異均無統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05。(Fig.3, table 4) 4.4亞硝酸鈉聯(lián)合不同濃度伏立康唑抗菌FIC結(jié)果: 亞硝酸鈉各濃度分別與0.5ug/mL、0.25ug/mL、0.125ug/mL、0.0625ug/mL、0.0313ug/mL、0.0156 ug/mL、0.0078 ug/mL、0.0039ug/mL伏立康唑交叉聯(lián)合所得FIC1所占比例分別為:0%(0/30)、3.3%(1/30)、3.3%(1/30)、16.7%(5/30)、26.7%(8/30)、23.3%(7/30)、3.3%(1/30)、3.3%(1/30) ; 1≤FIC2所占比例分別為: 3.3%(1/30)、6.7%(2/30)、23.3%(7/30)、33.3%(10/30)、43.3%(13/30)、33.3%(10/30)、43.3%(13/30)、43.3%(13/30);FIC≥2所占比例分別為:96.7%(29/30)、90%(27/30)、73.3%(22/30)、50%(15/30)、30%(9/30)、43.3%(13/30)、53.3%(16/30)、53.3%(16/30)。經(jīng)多個獨立樣本比較的Kruskal-wallis H檢驗,χ2=30.760,P0.001,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。進一步兩兩比較,0.0313ug/mL組除與0.0625ug/mL、0.0156ug/mL組差異無統(tǒng)計學(xué)意義之外,與其余各組比較均有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05。(Fig.4, table5) 4.5亞硝酸鈉聯(lián)合不同濃度卡泊芬凈抗菌FIC結(jié)果: 亞硝酸鈉各濃度分別與8ug/mL、4ug/mL、2ug/mL、1ug/mL、0.5ug/mL、0.25ug/mL、0.125ug/mL卡泊芬凈交叉聯(lián)合所得FIC1所占比例分別為:10%(3/30)、20%(6/30)、26.7%(8/30)、30%(9/30)、73.3%(22/30)、30%(9/30)、6.7%(2/30);1≤FIC2所占比例分別為:10%(3/30)、6.7%(2/30)、3.3%(1/30)、50%(15/30)、10%(3/30)、33.3%(10/30)、46.7%(14/30);FIC≥2所占比例分別為:80%(24/30)、73.3%(22/30)、70%(21/30)、20%(6/30)、16.7%(5/30)、36.7%(11/30)、46.7%(14/30)。經(jīng)多個獨立樣本比較的Kruskal-wallis H檢驗,χ2=51.176,P0.001,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。進一步兩兩比較,0.5ug/mL組與其他各濃度組比較均有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05。(Fig.5, table6) 4.6五種抗真菌藥物分別聯(lián)合亞硝酸鈉后的抗菌作用FIC之間比較結(jié)果: 亞硝酸鈉分別與伊曲康唑、特比萘芬、氟康唑、伏立康唑、卡泊芬凈交叉聯(lián)合后所得FIC1所占比例分別為:63.3%(19/30)、6.7%(2/30)、20%(6/30)、50%(15/30)、70%(21/30) ; 1≤FIC2所占比例分別為:26.7%(8/30)、36.7%(11/30)、33.3%(10/30)、20%(6/30)、13.3%(4/30);FIC≥2所占比例分別為:10%(3/30)、56.7%(17/30)、46.7%(14/30)、30%(9/30)、16.7%(5/30)。不同藥物之間經(jīng)多個獨立樣本比較的Kruskal-wallis H檢驗,χ2值=36.630,P0.01,差異有統(tǒng)計學(xué)意義。進一步分別進行兩兩比較,伊曲康唑與特比萘芬、氟康唑之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.01;伏立康唑與特比萘芬、氟康唑之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.01;卡泊芬凈與特比萘芬、氟康唑之間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.01;伊曲康唑、伏立康唑、卡泊芬凈三者之間任兩組比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05;特比萘芬與氟康唑之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義,P0.05。 結(jié)論: 本試驗參照美國國家臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)化研究所(CLSI)提出的(M38-A2)方案,采用微量稀釋法進行亞硝酸鈉、伊曲康唑、特比萘芬、氟康唑、伏立康唑及卡泊芬凈單獨及聯(lián)合應(yīng)用對臨床分離的30株紅色毛癬菌進行體外抗菌活性研究,得出以下結(jié)論: 1亞硝酸鈉在1640液體培養(yǎng)基中對臨床分離的紅色毛癬菌MIC值較高,高濃度有一定體外抗菌活性。 2亞硝酸鈉與伊曲康唑、卡泊芬凈體外聯(lián)合MIC值降低,協(xié)同作用較強。 3亞硝酸鈉與0.125ug/mL濃度伊曲康唑聯(lián)合協(xié)同作用最好。 4亞硝酸鈉與0.5ug/mL濃度卡泊芬凈聯(lián)合協(xié)同作用最好。 5亞硝酸鈉與特比萘芬、氟康唑體外聯(lián)合MIC值升高,以拮抗作用為主。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R756

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 佟盼琢;王冰心;馮琴;楊曉亮;楊云;謝紅霞;;鹽酸小檗堿聯(lián)合抗真菌藥物對紅色毛癬菌的體外藥敏實驗[J];中國皮膚性病學(xué)雜志;2011年05期

2 米拉;帕麗達(dá)·阿布利孜;劉旭;董瀟陽;哈德麗亞;周珊;;260例淺部真菌病及致病菌種分析[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;2011年07期

3 聶振華;孔祥君;李振化;;224株臨床分離淺部真菌病致病病原菌藥物敏感實驗分析[J];中國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)雜志;2011年03期

4 ;高效無毒滅蚊煙熏紙[J];生意通;2011年08期

5 劉魁英;廖磊;李蜀平;劉冬平;劉洋;;蘇香1號對小鼠記憶障礙模型的影響[J];中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用;2011年14期

6 朱本浩;;零食“控”悠著點[J];家庭醫(yī)學(xué);2011年07期

7 黃宗銹;陳冠敏;林春芳;吳麗琨;;角鯊烯對小鼠缺氧耐受力的影響[J];實用預(yù)防醫(yī)學(xué);2011年08期

8 ;皮膚科學(xué)基礎(chǔ)[J];中國醫(yī)學(xué)文摘(皮膚科學(xué));2011年04期

9 何正軍;賈國夫;尼科;郭敏;;紅景天軟膠囊提高缺氧耐受力功能實驗研究[J];草業(yè)與畜牧;2011年07期

10 吳紹熙;郭寧如;劉維達(dá);;中國致病皮膚真菌流行病學(xué)研究——1986、1996、2006年[J];皮膚性病診療學(xué)雜志;2011年03期

相關(guān)會議論文 前10條

1 佟盼琢;謝紅霞;楊云;;亞硝酸鈉對紅色毛癬菌抑制作用的實驗研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十五次全國皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

2 夏修蛟;沈宏;朱惠軍;劉澤虎;桑波;鐘燕;許愛娥;;紅色毛癬菌在7種培養(yǎng)基上的生物學(xué)特性[A];2011全國中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

3 胡小平;陳偉;尤立平;萬U，

本文編號：2126241