本文選題：黑色素瘤 + microRNA��； 參考：《中山大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)科學(xué)版)》2014年02期

【摘要】：【目的】研究外源性靶向microRNA對惡性黑色素瘤細胞血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)基因表達的抑制作用,以及對癌細胞增殖和侵襲遷移能力的影響。【方法】根據(jù)VEGF基因序列人工設(shè)計合成4對microRNA干擾片段,構(gòu)建質(zhì)粒真核表達載體,分別為:X-26-1-3、X-26-2n-1、X-26-3-2和X-26-4-4,測序分析鑒定插入序列的完整性;脂質(zhì)體法將該四個重組表達載體轉(zhuǎn)染黑色素瘤細胞株SKmel-28,RT-PCR檢測轉(zhuǎn)染細胞中VEGF基因的mRNA表達變化,Western Blot檢測microRNA對VEGF蛋白表達水平的調(diào)控效應(yīng),明確抑制效果最為顯著的microRNA干擾序列。MTS和EDU法分別檢測靶向VEGF的microRNA對SKmel-28生長的抑制作用,流式細胞儀觀察轉(zhuǎn)染對腫瘤細胞凋亡的影響,Transwell檢測細胞侵襲和遷移能力變化�！窘Y(jié)果】測序分析證實4個重組體插入片段的堿基序列均完全正確,成功轉(zhuǎn)染SKmel-28細胞后,均能顯著抑制腫瘤細胞VEGF mRNA和蛋白的表達,與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。抑制效應(yīng)最強的重組載體是X-26-2n-1;MTS和EDU檢測顯示,SKmel-28細胞轉(zhuǎn)染X-26-2n-1后,細胞增殖受到明顯抑制,與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),增殖抑制效應(yīng)具有時間依賴性,細胞侵襲和遷移能力也顯著減弱(P0.01);流式細胞儀檢測顯示腫瘤細胞早期凋亡率、晚期凋亡率、總凋亡率也顯著高于對照組(P0.01)。【結(jié)論】外源性靶向VEGF的microRNA能夠顯著降低黑色素瘤細胞SKmel-28 VEGF基因和蛋白的表達水平,誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡,抑制腫瘤細胞的體外增殖和侵襲遷移能力。
[Abstract]:[objective] to study the inhibitory effect of exogenous targeted microRNA on the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) gene in malignant melanoma cells. [methods] according to the sequence of VEGF gene, 4 pairs of microRNA interference fragments were synthesized, and the eukaryotic expression vectors were constructed. The eukaryotic expression vectors were: 1: X-26-1-3X -26 -2n-1X -26-3-2 and X-26-4-4. The integrality of the inserted sequence was identified by sequencing. The four recombinant expression vectors were transfected into melanoma cell line SKmel-28 by liposome method. RT-PCR was used to detect the mRNA expression of VEGF in the transfected cells. Western Blot was used to detect the effect of microRNA on the expression of VEGF protein. The inhibitory effects of microRNA interference sequence. MTS and EDU on SKmel-28 growth were determined by microRNA targeting VEGF. The effect of transfection on apoptosis of tumor cells was observed by flow cytometry. Transwell was used to detect the changes of cell invasion and migration ability. [results] sequencing analysis confirmed that the base sequences of the four inserted fragments of the recombinant were all correct, and the SKmel-28 cells were successfully transfected. The expression of VEGF mRNA and protein in tumor cells was significantly inhibited compared with the control group (P 0.05). The expression of X-26-2n-1mMTS and EDU showed that the proliferation of SKM-28 cells transfected with X-26-2n-1 was significantly inhibited, with a significant difference compared with the control group (P 0.05), and the inhibitory effect was time-dependent. The ability of cell invasion and migration was also significantly decreased (P 0.01). Flow cytometry showed that tumor cells had early apoptosis rate and late apoptosis rate. The total apoptosis rate was also significantly higher than that of the control group (P 0.01). [conclusion] exogenous microRNA targeting VEGF can significantly reduce the expression of VEGF gene and protein in melanoma cells and induce apoptosis of tumor cells. Inhibition of tumor cell proliferation, invasion and migration in vitro.
【作者單位】： 廣東省人民醫(yī)院//廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院皮膚科;廣東省人民醫(yī)院//廣東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院普通外科;
【基金】：廣東省科技計劃項目(2010B080701022,2010B080701021)
【分類號】：R739.5

【參考文獻】

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【共引文獻】

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【二級參考文獻】

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本文編號：2040003