本文選題：黑色素瘤 + bFGF單抗��； 參考：《暨南大學(xué)》2011年碩士論文

【摘要】：目的：探討bFGF單克隆抗體(bFGFmAb)聯(lián)合放射治療在荷B16黑色素瘤小鼠體內(nèi)的抑瘤效應(yīng)及協(xié)同作用機(jī)制。 方法：(1)制備腹水型bFGFmAb:復(fù)蘇培養(yǎng)本室已建株分泌bFGFmAb的雜交瘤細(xì)胞。福氏不完全佐劑(IFA)免疫BALB/c小鼠,免疫后第7天,小鼠腹腔注射雜交瘤細(xì)胞2×106/只,7～12天腹水形成,抽取腹水。蛋白G親和層析柱純化bFGFmAb, SDS-PAGE電泳檢測bFGFmAb純化后純度,BCA法測定bFGFmAb蛋白原液濃度,間接法ESLIA檢測抗體效價,-20℃凍存?zhèn)溆谩?(2)建立荷B16黑色素瘤動物模型及分組治療：復(fù)蘇培養(yǎng)B16黑色素瘤細(xì)胞,取B16細(xì)胞4×105/只接種于C57BL/6小鼠右后肢皮下,建立荷B16移植瘤小鼠模型。將32只小鼠隨機(jī)分為四組,每組8只,分別為對照組、放療組、bFGFmAb組、bFGFmAb聯(lián)合放療組,bFGFmAb組采用瘤周皮下注射bFGFmAb 900μg/只,1次/3天,共3次；放療組采用6MV、X射線照射瘤體,常規(guī)分割放療5次/周,5Gy/次、共8次、總劑量40Gy;聯(lián)合治療組先采用bFGFmAb治療方法,第9天后聯(lián)合應(yīng)用放療；實驗治療觀察20天。 (3)檢測瘤體：四組小鼠實驗過程中,每兩天測量瘤體大小,計算瘤體積；20天后取出瘤體,稱瘤重,計算抑瘤率；瘤體送病理檢測,TUNEL法檢測瘤內(nèi)B16細(xì)胞凋亡率,免疫組化SP法檢測瘤內(nèi)bFGF、VEGF陽性表達(dá)率及腫瘤微血管密度(MVD)。 結(jié)果：(1)制備腹水型bFGFmAb 14.5ml,效價為1∶1024000。純化后bFGFmAb效價為1:8192000, SDS-PAGE電泳提示抗體純度高,BCA法測定抗體濃度為9.593mg/ml,制備的抗體總量為46.048mg。 (2) bFGFmAb組、放療組、聯(lián)合治療組抑瘤率分別為30.49%、12.17%、48.76%,聯(lián)合治療組抑瘤率明顯高于其它組(P0.05)；與放療組比較,聯(lián)合組放射增敏率為2.37。 (3) TUNEL染色顯示B16細(xì)胞凋亡率對照組為(10.62±1.73)%,bFGFmAb組為(28.45±5.47)%,放療組為(17.21±2.86)%,聯(lián)合治療組為(58.56±6.47)%,聯(lián)合治療組較bFGFmAb組及放療組凋亡明顯增加(P0.01)。 (4)免疫組化結(jié)果：與對照組比較,放療組瘤內(nèi)bFGF、VEGF表達(dá)水平下降,bFGFmAb組bFGF表達(dá)水平明顯下降,聯(lián)合治療組bFGF、VEGF表達(dá)水平較其它兩個治療組均有顯著下降(P0.01)。CD31染色所示瘤內(nèi)微血管數(shù)量,bFGFmAb組血管密度較高,放療組次之,以聯(lián)合治療組最少,壞死區(qū)所占比例大,對照組微血管數(shù)量多,分布密聚。 結(jié)論：bFGFmAb聯(lián)合放射治療在荷B16黑色素瘤小鼠體內(nèi)產(chǎn)生顯著協(xié)同效應(yīng),其機(jī)制是通過降低腫瘤組織bFGF、VEGF表達(dá),抑制血管新生,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡,增強(qiáng)放射治療敏感性,發(fā)揮抑瘤作用。本實驗為bFGF單抗靶向治療黑色素瘤提供實驗依據(jù)。
[Abstract]:Objective: to investigate the anti-tumor effect and synergistic mechanism of bFGF monoclonal antibody (bFGF) combined with radiotherapy in mice bearing B16 melanoma. Methods the ascites bFGFmAb1 was prepared by resuscitation culture of hybridoma cells secreting bFGFmAb. BALB/c mice were immunized with Freund's incomplete adjuvant (IFA). On the 7th day after immunization, the mice were injected intraperitoneally with 2 脳 10 6 hybridoma cells to form ascites for 712 days, and ascites were extracted. The protein G affinity chromatography column was used to purify bFGFmAb.The purity of bFGFmAb protein was determined by SDS-PAGE electrophoresis, and the antibody titer was detected by indirect ESLIA at 20 鈩，

本文編號：1937002