本文關(guān)鍵詞：線粒體DNA缺失對模擬日光照射誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《第三軍醫(yī)大學(xué)》 2013年

線粒體DNA缺失對模擬日光照射誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響探討

陳胡林  

【摘要】：背景：人類的各種社會活動，主要是鹵代烴類的排放，導(dǎo)致平流層臭氧空洞形成，這使得日光到達(dá)地面的有害射線增多。日光照射是一個已明確的導(dǎo)致人類皮膚光老化和皮膚癌發(fā)生的自然因子。長期的日照對皮膚的損害主要表現(xiàn)為皮膚光老化和暴露部位皮膚腫瘤的多發(fā)。光損傷誘導(dǎo)多種類型的線粒體DNA缺失在光老化皮膚及暴露部位皮膚腫瘤中大量累積已被廣泛證實，但其生物學(xué)意義仍有待進(jìn)一步闡明。細(xì)胞凋亡在皮膚光老化和日光相關(guān)皮膚腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中具有重要意義，一方面，日光誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡可使皮膚組織中的細(xì)胞成份減少，，從而出現(xiàn)退行性的老化改變；另一方面，出現(xiàn)了基因突變的細(xì)胞如果不能及時凋亡則可能導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。日光照射是否能通過對線粒體DNA的作用影響細(xì)胞的凋亡目前還不是很清楚。本研究以線粒體DNA缺失細(xì)胞(Rho°206細(xì)胞)及其母本細(xì)胞(143B細(xì)胞)為模型，利用模擬日光照射誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，進(jìn)而探討線粒體DNA對凋亡的影響，為闡明線粒體DNA缺失在慢性皮膚光損傷中的作用提供依據(jù)。 目的：通過研究模擬日光照射誘導(dǎo)Rho°206細(xì)胞和143B細(xì)胞凋亡，探討線粒體DNA缺失對模擬日光照射誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的影響及其可能機(jī)制。 方法：1、TEM觀察細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化。2、普通光學(xué)顯微鏡觀察不同模擬日光照射劑量(177mJ/cm~2+3.39J/cm~2、354mJ/cm~2+6.78J/cm~2、531mJ/cm~2+10.17J/cm~2和708mJ/cm~2+13.56J/cm~2)誘導(dǎo)Rho°206細(xì)胞和143B細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化。3、Hoechst33258染色熒光顯微鏡觀察不同模擬日光照射劑量誘導(dǎo)Rho°206細(xì)胞和143B細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化。4、采用流式細(xì)胞儀檢測不同模擬日光照射劑量誘導(dǎo)Rho°206細(xì)胞和143B細(xì)胞的凋亡情況。5、采用流式細(xì)胞儀檢測不同模擬日光照射劑量誘導(dǎo)Rho°206細(xì)胞和143B細(xì)胞的活性氧簇水平。 結(jié)果：1、形態(tài)學(xué)結(jié)果顯示，在照射組中，兩細(xì)胞都出現(xiàn)了典型的凋亡形態(tài)學(xué)改變。和143B細(xì)胞相比，線粒體DNA缺失細(xì)胞相應(yīng)照射劑量組誘導(dǎo)的凋亡效應(yīng)較輕。而在假照射組中，兩細(xì)胞的凋亡形態(tài)未見明顯差異。2、Annexin V/7-AAD檢測結(jié)果顯示，在假照射組，143B細(xì)胞的凋亡率(9.23±0.85%)和Rho°206細(xì)胞(9.10±1.20%)相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。而在照射組中，143B細(xì)胞相應(yīng)照射劑量組凋亡率分別為30.51±1.61%、39.76±1.15%、46.56±1.30%和55.86±1.81%，Rho°206細(xì)胞凋亡率分別為22.93±1.15%、27.26±0.91%、36.10±1.20%和39.53±1.15%，同一細(xì)胞不同劑量組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；兩細(xì)胞同樣照射劑量組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞內(nèi)ROS水平結(jié)果顯示，在假照射組，143B細(xì)胞的ROS水平(8.25±0.86%)和Rho°206細(xì)胞(8.15±0.92%)相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。而在照射組中，143B細(xì)胞相應(yīng)照射劑量組ROS水平分別為21.41±1.04%、24.82±1.12%、28.85±1.07%和32.78±1.14%，Rho°206細(xì)胞ROS水平分別為14.99±1.17%、18.36±1.05%、24.44±1.14%和27.61±1.11%，同一細(xì)胞不同劑量組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)；兩細(xì)胞同樣照射劑量組間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論：1、模擬日光照射可誘導(dǎo)線粒體DNA缺失細(xì)胞及其母本細(xì)胞凋亡，且其凋亡在一定范圍內(nèi)呈照射劑量依賴性，即隨著照射劑量的增加其凋亡也增加。2、在一定劑量范圍內(nèi)，與其母本細(xì)胞相比，線粒體DNA缺失細(xì)胞能抵抗模擬日光誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡；3、線粒體DNA缺失細(xì)胞抵抗模擬日光照射誘導(dǎo)的凋亡作用可能與其ROS生成減少有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R758.14
【目錄】：

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