本文選題：銀屑病 + 微小RNA-146a�。� 參考：《廣州醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：【背景】銀屑病(psoriasis)是一種臨床常見的慢性炎癥性增生性皮膚病,其特征性皮損表現為境界清楚、厚層銀白色鱗屑性斑塊。銀屑病發(fā)病機制不明確,是當前皮膚病領域內重點研究的疾病之一�；诩蚁导叭后w的流行病學研究均提示該病是具有遺傳易感性的個體,在外界環(huán)境刺激下發(fā)生角質形成細胞和免疫細胞,包括T細胞、樹突狀細胞和中性粒細胞的表達失衡,導致角質形成細胞異常增殖,新生血管形成和炎性細胞浸潤所致。目前普遍的觀點認為,銀屑病的發(fā)病是一種多基因遺傳背景下多因素參與的T細胞免疫介導的皮膚病。銀屑病具有很強的遺傳易感性。目前全基因組關聯研究發(fā)現越來越多的銀屑病易感基因參與免疫細胞和角質形成細胞的功能,但其中的調控機制仍不清楚。微小RNA(microRNA,miRNA)是一類分布廣泛調控基因表達的小的非編碼RNA,長度約18-22個核苷酸。它們調節(jié)多種生物學信號通路,生物信息學數據顯示,每個miRNA可以調節(jié)幾十到數百個靶基因,這也表明miRNA可以影響所有的信號途徑。mi RNA通過與靶基因mRNA的3'-非翻譯區(qū)(3'-untranslated regions,3'-UTR)完全或部分互補結合,使mRNA發(fā)生降解或介導其翻譯抑制,參與基因轉錄后水平的調控,在細胞發(fā)育、增殖、分化和腫瘤發(fā)生等生物學行為中發(fā)揮重要作用。近年來研究揭示了miRNA在免疫系統(tǒng)中同樣發(fā)揮顯著的調控作用,與自身免疫性疾病過程中的病理生理密切相關,參與調控機體免疫應答,但對其具體作用機制尚處于探索階段。迄今為止,越來越多的研究發(fā)現miRNA參與到銀屑病的發(fā)病過程中,且miRNA在銀屑病患者皮損表達明顯不同于未累及的皮膚和健康人皮膚。銀屑病角質形成細胞的增生和分化異常通常伴隨免疫細胞的浸潤,大量細胞因子和趨化因子分泌及刺激。因此研究與銀屑病發(fā)病免疫相關的miRNA顯得尤為重要。人類微小RNA-146a(microRNA-146a,miR-146a)是miR-146家族中研究最多的一員,近年來研究發(fā)現,mi R-146a作為新型的免疫調節(jié)分子,在固有免疫調節(jié)、炎癥反應以及抗病毒中發(fā)揮著重要作用。但對miR-146a與銀屑病發(fā)病機制的關系研究,目前甚少報道。因此,明確miR-146a的靶基因及其對靶基因的作用機制有助于更加深入的了解其在銀屑病的發(fā)病機理。通過靶基因預測軟件及文獻回顧分析發(fā)現miR-146a具有多個靶基因。其中,miR-146a對白介素1受體相關激酶1(Interleukin-1 receptor-associated Kinase 1,IRAK1)、腫瘤壞死因子受體相關因子6(receptor-associated factor 6,TRAF6)這兩個免疫因子起抑制作用,防止炎癥反應過激,從而對免疫細胞內信號轉導起一種負反饋的調節(jié)作用。IRAK1是白介素1受體相關激酶(IRAKs)家族的一員,IRAKs是一類具有獨特的死亡結構域蛋白激酶,在Toll樣受體(TLRs)和白細胞介素-1受體(IL-1Rs)兩個受體家族信號轉導通路中發(fā)揮關鍵作用。此外,IRAK1作為關鍵環(huán)節(jié)調節(jié)TH17和Treg細胞分化之間的微妙平衡。本課題組成員在前期的研究發(fā)現miR-146a在尋常型銀屑病患者外周血單個核細胞及皮損中異常高表達,并與尋常型銀屑病的分期相關。IRAK1作為miR-146a的一個重要靶基因,在miR-146a相關的炎癥反應中發(fā)揮重要作用。因此,我們推測miR-146a可能是一個與銀屑病免疫狀態(tài)密切相關的基因,與IRAK1共同作為銀屑病免疫功能網絡異常的一個環(huán)節(jié),在疾病起始階段調控整個免疫應答,或者調控下游細胞因子的分泌,促進銀屑病的發(fā)生和發(fā)展。然而,對于異常表達增高的miR-146a促成銀屑病發(fā)病過程的分子機制仍不是很清楚�！灸康摹垦芯繉こＰ豌y屑病患者皮損中miR-146a、IRAK1的表達,分析二者的相關性;通過體外實驗探討過表達或抑制miR-146a對人永生化表皮細胞株HaCaT細胞的影響,鑒定mi R-146a調控的下游靶基因,系統(tǒng)揭示miR-146a在銀屑病發(fā)生發(fā)展中的相關分子機制,并初步探討mi R-146a對細胞因子分泌的影響。本研究可能為探索銀屑病發(fā)病機制建立新的有效途徑,為完善miR-146a參與銀屑病的發(fā)病提供更多的理論支持,并為以miR-146a為靶點治療及預后分析銀屑病提供新的策略,從而加深對銀屑病發(fā)病機制的認識,為研究銀屑病提供新思路�！痉椒ā�1、篩選并收集各30例尋常型銀屑病患者皮損和正常對照組的皮膚組織,提取組織RNA,通過RT-qPCR檢測miR-146a、基因IRAK1的表達水平。計量資料用均數±標準差(sx±)表示,分析二者相關性,統(tǒng)計分析各組結果是否具有統(tǒng)計學意義;采用Western Blot檢測尋常型銀屑病皮損和正常對照組皮膚中IRAK1蛋白表達情況。2、通過培養(yǎng)HaCaT細胞系,用miR-146a的模擬物和抑制劑(mi R-146a mimics、miR-146a inhibitor)轉染到人永生化表皮細胞株HaCaT細胞,實現miR-146a瞬時過表達或特異性抑制,采用RT-qPCR進一步檢測各組miR-146a、IRAK1的表達水平,用Western Blot檢測靶基因IRAK1的蛋白表達。3、對HaCaT細胞系分別轉染miR-146a mimics、miR-146a inhibitor到HaCaT細胞,一定濃度IL-17刺激后,ELISA法檢測各組細胞上清中IL-23表達情況�！窘Y果】1、研究結果表明,RT-qPCR檢測30例尋常型銀屑病患者的皮損和30例正常對照組皮膚中miR-146a、IRAK1表達水平,miR-146a在尋常型銀屑病患者皮損中相對表達量顯著高于正常對照組(1.96+0.36,0.92+0.14,t=14.05,P0.01);IRAK1的表達水平顯著高于健康對照組(2.56+0.42,0.43+0.15,t=39.45,P0.01),差異具有統(tǒng)計學意義;Pearson相關分析顯示,尋常型銀屑病患者皮損中miR-146a表達與IRAK1表達無相關性(r=0.230,P=0.221);Western Blot結果顯示IRAK1蛋白表達在銀屑病組較對照組明顯上調。2、體外過表達或抑制miR-146a實驗,結果顯示與control組比較,miR-146a在miR-146a mimics組細胞內的表達水平顯著增加(P0.05),IRAK1 mRNA表達水平顯著降低(P0.05),IRAK1蛋白表達下調;而轉染miR-146a inhibitor后,inhibitor對miR-146a、IRAK1 mRNA水平和蛋白水平均無顯著影響。3、miR-146a mimics、miR-146a inhibitor、mi RNA control轉染HaCaT細胞,一定濃度IL-17刺激后,ELISA法檢測細胞上清中IL-23表達情況。與control組比較,IL-23在miR-146a mimics組、及mimics+IL-17組均表達下調,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05);與control組比較,IL-23在miR-146a inhibitor組、及mi R-146a inhibitor+IL-17組均表達升高,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。【結論】1、尋常型銀屑病患者皮損中miR-146a、IRAK1表達升高,提示miR-146a與IRAK1共同作用促進銀屑病的發(fā)生和發(fā)展。2、miR-146a可以抑制IRAK1靶基因的表達,銀屑病皮損中IRAK1異常表達升高,銀屑病患者皮損中miR-146并未對IRAK1產生有效抑制。3、miR-146a能夠顯著減少IL-23表達,miR-146a可能在炎癥反應中發(fā)揮負性調節(jié)作用。4、miR-146a可能通過IRAK1介導炎癥因子的表達。銀屑病患者皮損中過表達的miR-146a并未對IRAK1產生有效抑制作用減少下游炎癥因子的表達。
[Abstract]:MicroRNA ( microRNA , miRNA ) is one of the most important diseases in the pathogenesis of psoriasis . In this study , it is possible to study the role of miR - 14s in the pathogenesis of psoriasis , and to provide a new approach to the treatment and prognosis of psoriasis in patients with psoriasis vulgaris . In this paper , we screened and collected skin tissue of 30 patients with psoriasis vulgaris and normal control group , extracted tissue RNA , and detected the expression level of miR - 14I in normal control group by RT - qPCR . Compared with control group , the expression level of miR - 14I was significantly higher than that in healthy control group ( P 0.05 ) . Compared with control group , the expression level of miR - 14I was significantly lower than that in healthy control group ( P < 0.05 ) .

【學位授予單位】：廣州醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R758.63

【參考文獻】

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1 鄧蕙妍;林玲;周欣;劉煒鈺;羅權;;尋常型銀屑病患者皮損miR-146a的表達及意義[J];中國中西醫(yī)結合皮膚性病學雜志;2016年03期

2 羅權;劉煒鈺;趙恬;張芳;李薇;林玲;張錫寶;;MiR-146a在尋常型銀屑病患者外周血單個核細胞中的表達及其臨床意義[J];皮膚性病診療學雜志;2015年04期

3 丁曉嵐;王婷琳;沈佚葳;王曉艷;周城;田珊;劉盈;彭光輝;周俊娥;薛樹旗;王仁利;唐英;孟雪梅;裴廣德;白云花;劉青;李航;張建中;;中國六省市銀屑病流行病學調查[J];中國皮膚性病學雜志;2010年07期

4 張學軍;;全基因組關聯分析對銀屑病遺傳學研究的啟示[J];浙江大學學報(醫(yī)學版);2009年04期

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本文編號：1876903