發(fā)布時(shí)間：2018-05-12 03:22

  本文選題：銀屑病 + 微小RNA-146a　； 參考：《廣州醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：【背景】銀屑病(psoriasis)是一種臨床常見(jiàn)的慢性炎癥性增生性皮膚病,其特征性皮損表現(xiàn)為境界清楚、厚層銀白色鱗屑性斑塊。銀屑病發(fā)病機(jī)制不明確,是當(dāng)前皮膚病領(lǐng)域內(nèi)重點(diǎn)研究的疾病之一�；诩蚁导叭后w的流行病學(xué)研究均提示該病是具有遺傳易感性的個(gè)體,在外界環(huán)境刺激下發(fā)生角質(zhì)形成細(xì)胞和免疫細(xì)胞,包括T細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的表達(dá)失衡,導(dǎo)致角質(zhì)形成細(xì)胞異常增殖,新生血管形成和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)所致。目前普遍的觀點(diǎn)認(rèn)為,銀屑病的發(fā)病是一種多基因遺傳背景下多因素參與的T細(xì)胞免疫介導(dǎo)的皮膚病。銀屑病具有很強(qiáng)的遺傳易感性。目前全基因組關(guān)聯(lián)研究發(fā)現(xiàn)越來(lái)越多的銀屑病易感基因參與免疫細(xì)胞和角質(zhì)形成細(xì)胞的功能,但其中的調(diào)控機(jī)制仍不清楚。微小RNA(microRNA,miRNA)是一類(lèi)分布廣泛調(diào)控基因表達(dá)的小的非編碼RNA,長(zhǎng)度約18-22個(gè)核苷酸。它們調(diào)節(jié)多種生物學(xué)信號(hào)通路,生物信息學(xué)數(shù)據(jù)顯示,每個(gè)miRNA可以調(diào)節(jié)幾十到數(shù)百個(gè)靶基因,這也表明miRNA可以影響所有的信號(hào)途徑。mi RNA通過(guò)與靶基因mRNA的3'-非翻譯區(qū)(3'-untranslated regions,3'-UTR)完全或部分互補(bǔ)結(jié)合,使mRNA發(fā)生降解或介導(dǎo)其翻譯抑制,參與基因轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控,在細(xì)胞發(fā)育、增殖、分化和腫瘤發(fā)生等生物學(xué)行為中發(fā)揮重要作用。近年來(lái)研究揭示了miRNA在免疫系統(tǒng)中同樣發(fā)揮顯著的調(diào)控作用,與自身免疫性疾病過(guò)程中的病理生理密切相關(guān),參與調(diào)控機(jī)體免疫應(yīng)答,但對(duì)其具體作用機(jī)制尚處于探索階段。迄今為止,越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)miRNA參與到銀屑病的發(fā)病過(guò)程中,且miRNA在銀屑病患者皮損表達(dá)明顯不同于未累及的皮膚和健康人皮膚。銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞的增生和分化異常通常伴隨免疫細(xì)胞的浸潤(rùn),大量細(xì)胞因子和趨化因子分泌及刺激。因此研究與銀屑病發(fā)病免疫相關(guān)的miRNA顯得尤為重要。人類(lèi)微小RNA-146a(microRNA-146a,miR-146a)是miR-146家族中研究最多的一員,近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),mi R-146a作為新型的免疫調(diào)節(jié)分子,在固有免疫調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)以及抗病毒中發(fā)揮著重要作用。但對(duì)miR-146a與銀屑病發(fā)病機(jī)制的關(guān)系研究,目前甚少報(bào)道。因此,明確miR-146a的靶基因及其對(duì)靶基因的作用機(jī)制有助于更加深入的了解其在銀屑病的發(fā)病機(jī)理。通過(guò)靶基因預(yù)測(cè)軟件及文獻(xiàn)回顧分析發(fā)現(xiàn)miR-146a具有多個(gè)靶基因。其中,miR-146a對(duì)白介素1受體相關(guān)激酶1(Interleukin-1 receptor-associated Kinase 1,IRAK1)、腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6(receptor-associated factor 6,TRAF6)這兩個(gè)免疫因子起抑制作用,防止炎癥反應(yīng)過(guò)激,從而對(duì)免疫細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)起一種負(fù)反饋的調(diào)節(jié)作用。IRAK1是白介素1受體相關(guān)激酶(IRAKs)家族的一員,IRAKs是一類(lèi)具有獨(dú)特的死亡結(jié)構(gòu)域蛋白激酶,在Toll樣受體(TLRs)和白細(xì)胞介素-1受體(IL-1Rs)兩個(gè)受體家族信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中發(fā)揮關(guān)鍵作用。此外,IRAK1作為關(guān)鍵環(huán)節(jié)調(diào)節(jié)TH17和Treg細(xì)胞分化之間的微妙平衡。本課題組成員在前期的研究發(fā)現(xiàn)miR-146a在尋常型銀屑病患者外周血單個(gè)核細(xì)胞及皮損中異常高表達(dá),并與尋常型銀屑病的分期相關(guān)。IRAK1作為miR-146a的一個(gè)重要靶基因,在miR-146a相關(guān)的炎癥反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。因此,我們推測(cè)miR-146a可能是一個(gè)與銀屑病免疫狀態(tài)密切相關(guān)的基因,與IRAK1共同作為銀屑病免疫功能網(wǎng)絡(luò)異常的一個(gè)環(huán)節(jié),在疾病起始階段調(diào)控整個(gè)免疫應(yīng)答,或者調(diào)控下游細(xì)胞因子的分泌,促進(jìn)銀屑病的發(fā)生和發(fā)展。然而,對(duì)于異常表達(dá)增高的miR-146a促成銀屑病發(fā)病過(guò)程的分子機(jī)制仍不是很清楚�！灸康摹垦芯繉こＰ豌y屑病患者皮損中miR-146a、IRAK1的表達(dá),分析二者的相關(guān)性;通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)探討過(guò)表達(dá)或抑制miR-146a對(duì)人永生化表皮細(xì)胞株HaCaT細(xì)胞的影響,鑒定mi R-146a調(diào)控的下游靶基因,系統(tǒng)揭示miR-146a在銀屑病發(fā)生發(fā)展中的相關(guān)分子機(jī)制,并初步探討mi R-146a對(duì)細(xì)胞因子分泌的影響。本研究可能為探索銀屑病發(fā)病機(jī)制建立新的有效途徑,為完善miR-146a參與銀屑病的發(fā)病提供更多的理論支持,并為以miR-146a為靶點(diǎn)治療及預(yù)后分析銀屑病提供新的策略,從而加深對(duì)銀屑病發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí),為研究銀屑病提供新思路�！痉椒ā�1、篩選并收集各30例尋常型銀屑病患者皮損和正常對(duì)照組的皮膚組織,提取組織RNA,通過(guò)RT-qPCR檢測(cè)miR-146a、基因IRAK1的表達(dá)水平。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(sx±)表示,分析二者相關(guān)性,統(tǒng)計(jì)分析各組結(jié)果是否具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;采用Western Blot檢測(cè)尋常型銀屑病皮損和正常對(duì)照組皮膚中IRAK1蛋白表達(dá)情況。2、通過(guò)培養(yǎng)HaCaT細(xì)胞系,用miR-146a的模擬物和抑制劑(mi R-146a mimics、miR-146a inhibitor)轉(zhuǎn)染到人永生化表皮細(xì)胞株HaCaT細(xì)胞,實(shí)現(xiàn)miR-146a瞬時(shí)過(guò)表達(dá)或特異性抑制,采用RT-qPCR進(jìn)一步檢測(cè)各組miR-146a、IRAK1的表達(dá)水平,用Western Blot檢測(cè)靶基因IRAK1的蛋白表達(dá)。3、對(duì)HaCaT細(xì)胞系分別轉(zhuǎn)染miR-146a mimics、miR-146a inhibitor到HaCaT細(xì)胞,一定濃度IL-17刺激后,ELISA法檢測(cè)各組細(xì)胞上清中IL-23表達(dá)情況�！窘Y(jié)果】1、研究結(jié)果表明,RT-qPCR檢測(cè)30例尋常型銀屑病患者的皮損和30例正常對(duì)照組皮膚中miR-146a、IRAK1表達(dá)水平,miR-146a在尋常型銀屑病患者皮損中相對(duì)表達(dá)量顯著高于正常對(duì)照組(1.96+0.36,0.92+0.14,t=14.05,P0.01);IRAK1的表達(dá)水平顯著高于健康對(duì)照組(2.56+0.42,0.43+0.15,t=39.45,P0.01),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;Pearson相關(guān)分析顯示,尋常型銀屑病患者皮損中miR-146a表達(dá)與IRAK1表達(dá)無(wú)相關(guān)性(r=0.230,P=0.221);Western Blot結(jié)果顯示IRAK1蛋白表達(dá)在銀屑病組較對(duì)照組明顯上調(diào)。2、體外過(guò)表達(dá)或抑制miR-146a實(shí)驗(yàn),結(jié)果顯示與control組比較,miR-146a在miR-146a mimics組細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)水平顯著增加(P0.05),IRAK1 mRNA表達(dá)水平顯著降低(P0.05),IRAK1蛋白表達(dá)下調(diào);而轉(zhuǎn)染miR-146a inhibitor后,inhibitor對(duì)miR-146a、IRAK1 mRNA水平和蛋白水平均無(wú)顯著影響。3、miR-146a mimics、miR-146a inhibitor、mi RNA control轉(zhuǎn)染HaCaT細(xì)胞,一定濃度IL-17刺激后,ELISA法檢測(cè)細(xì)胞上清中IL-23表達(dá)情況。與control組比較,IL-23在miR-146a mimics組、及mimics+IL-17組均表達(dá)下調(diào),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);與control組比較,IL-23在miR-146a inhibitor組、及mi R-146a inhibitor+IL-17組均表達(dá)升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)�！窘Y(jié)論】1、尋常型銀屑病患者皮損中miR-146a、IRAK1表達(dá)升高,提示miR-146a與IRAK1共同作用促進(jìn)銀屑病的發(fā)生和發(fā)展。2、miR-146a可以抑制IRAK1靶基因的表達(dá),銀屑病皮損中IRAK1異常表達(dá)升高,銀屑病患者皮損中miR-146并未對(duì)IRAK1產(chǎn)生有效抑制。3、miR-146a能夠顯著減少I(mǎi)L-23表達(dá),miR-146a可能在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮負(fù)性調(diào)節(jié)作用。4、miR-146a可能通過(guò)IRAK1介導(dǎo)炎癥因子的表達(dá)。銀屑病患者皮損中過(guò)表達(dá)的miR-146a并未對(duì)IRAK1產(chǎn)生有效抑制作用減少下游炎癥因子的表達(dá)。
[Abstract]:MicroRNA ( microRNA , miRNA ) is one of the most important diseases in the pathogenesis of psoriasis . In this study , it is possible to study the role of miR - 14s in the pathogenesis of psoriasis , and to provide a new approach to the treatment and prognosis of psoriasis in patients with psoriasis vulgaris . In this paper , we screened and collected skin tissue of 30 patients with psoriasis vulgaris and normal control group , extracted tissue RNA , and detected the expression level of miR - 14I in normal control group by RT - qPCR . Compared with control group , the expression level of miR - 14I was significantly higher than that in healthy control group ( P 0.05 ) . Compared with control group , the expression level of miR - 14I was significantly lower than that in healthy control group ( P < 0.05 ) .

【學(xué)位授予單位】：廣州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類(lèi)號(hào)】：R758.63

【參考文獻(xiàn)】

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2 羅權(quán);劉煒鈺;趙恬;張芳;李薇;林玲;張錫寶;;MiR-146a在尋常型銀屑病患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中的表達(dá)及其臨床意義[J];皮膚性病診療學(xué)雜志;2015年04期

3 丁曉嵐;王婷琳;沈佚葳;王曉艷;周城;田珊;劉盈;彭光輝;周俊娥;薛樹(shù)旗;王仁利;唐英;孟雪梅;裴廣德;白云花;劉青;李航;張建中;;中國(guó)六省市銀屑病流行病學(xué)調(diào)查[J];中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志;2010年07期

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本文編號(hào)：1876903