本文關(guān)鍵詞：脂肪來(lái)源干細(xì)胞對(duì)光老化成纖維細(xì)胞的治療作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《復(fù)旦大學(xué)》 2014年

脂肪來(lái)源干細(xì)胞對(duì)光老化成纖維細(xì)胞的治療作用

曾繼平  

【摘要】：皮膚的老化分為兩種,即內(nèi)源性和外源性老化。內(nèi)源性老化是指隨年齡增大,由基因控制的衰老過(guò)程；外源性老化主要由紫外線引起,可顯著加速皮膚衰老,表現(xiàn)為粗大皺紋、異常色素沉著、細(xì)胞外基質(zhì)降解沉積等。近年來(lái)的治療主要集中于逆轉(zhuǎn)真皮層成纖維細(xì)胞的改變,使其重新分泌細(xì)胞外基質(zhì),促進(jìn)皮膚新生。本研究通過(guò)體外構(gòu)建光老化模型,并采用脂肪來(lái)源干細(xì)胞(Adipose-derived stem cells, ADSCs)分泌的生長(zhǎng)因子進(jìn)行治療,明確脂肪來(lái)源干細(xì)胞對(duì)光老化FB的作用及其機(jī)制。目的：利用亞細(xì)胞毒劑量中波紫外線(Ultraviolet B,UVB)反復(fù)照射小鼠皮膚成纖維細(xì)胞(Murine dermal fibroblasts, MDFs)構(gòu)建體外光老化模型。方法：體外培養(yǎng)原代MDFs至第2代,采用UVB反復(fù)照射,劑量選用60、120、180、240mJ/cm2,間隔時(shí)間為12小時(shí),共照射4次；每次照射完畢均更換為含1%血清的培養(yǎng)液培養(yǎng),檢測(cè)caspase-3表達(dá)和細(xì)胞增殖曲線判斷最佳照射劑量；采用最佳劑量進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn),在單次照射后立即檢測(cè)活性氧的生成,在4次照射后12、24、48小時(shí)分別檢測(cè)線粒體膜電位、細(xì)胞周期、細(xì)胞外基質(zhì)分泌功能等。結(jié)果：120 mJ/cm2為最佳劑量；反復(fù)UVB可導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)一系列衰老表型,經(jīng)檢測(cè)符合光老化特征改變,并且可避免單次照射劑量過(guò)大引起的細(xì)胞死亡,或劑量過(guò)小引起的細(xì)胞修復(fù)。結(jié)論：亞細(xì)胞毒劑量UVB反復(fù)照射可成功建立體外光老化模型,為下一步測(cè)試光老化治療藥物或其他手段奠定基礎(chǔ),也可進(jìn)一步深入研究以闡明光老化機(jī)制。目的：探討富含生長(zhǎng)因子的ADSCs裂解液(ADSCs-E)皂否治療成纖維細(xì)胞的一系列衰老表型。方法：體外培養(yǎng)小鼠ADSCs至P2代,將其消化離心后加入適量裂解液,1ml針頭反復(fù)吹打,與培養(yǎng)液(DMEM+1%FBS)混合制成治療液,以鼠成纖維細(xì)胞裂解液作為對(duì)照。預(yù)處理成纖維細(xì)胞12h后,采用UVB照射4次,繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)或72小時(shí),觀察細(xì)胞形態(tài)、衰老相關(guān)β半乳糖苷酶染色、細(xì)胞周期、細(xì)胞外基質(zhì)分泌和降解功能的變化；檢測(cè)ROS生成和p53等探討有關(guān)機(jī)制。結(jié)果：DSCs-E可減少UVB引起的細(xì)胞肥大和衰老相關(guān)β半乳糖苷酶染色,還可促進(jìn)成纖維細(xì)胞分泌細(xì)胞基質(zhì),減少基質(zhì)金屬蛋白酶的分泌；ADSCs-E對(duì)細(xì)胞周期有部分逆轉(zhuǎn)作用,可能是通過(guò)減少p53的乙酰化,從而減少細(xì)胞周期阻滯。結(jié)論：ADSCs分泌的細(xì)胞因子可用于治療光老化成纖維細(xì)胞的一系列早衰表型,并具有一定的抗氧化作用。具體發(fā)揮作用的細(xì)胞因子是下一步研究的重點(diǎn)。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R758.1
【目錄】：

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