發(fā)布時間：2018-03-30 08:56

  本文選題：強脈沖光　切入點：轉化生長因子β1　出處：《中南大學》2011年碩士論文

【摘要】：目的 1.觀察轉化生長因子-p1對體外培養(yǎng)人皮膚成纖維細胞增殖的影響。 2.探討強脈沖光在轉化生長因子-p1介導的成纖維細胞增殖中的作用及細胞外信號調節(jié)激酶(ERK)信號通路的研究。 方法 1.利用包皮環(huán)切術切除的正常青少年包皮組織,體外分離培養(yǎng)人正常皮膚原代成纖維細胞,采用角蛋白和Ⅰ、Ⅲ型膠原染色進行成纖維細胞的鑒定。 2.實驗分為3部分： (1)實驗一：TGF-β1濃度處理組,采用不同濃度的TGF-β1分別處理各組成纖維細胞,采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測各組細胞增殖情況； (2)實驗二：分為①TGF-β1濃度組：10.0ng/ml、5.0ng/ml、1.0ng/ml及0ng/ml.②時間組：給予10.0ng/ml的TGF-β1刺激細胞,分別在不同時間Omin、15min、30min、60min及120min的時間點提取蛋白。應用蛋白質免疫印跡(western blot)法測定各組磷酸化細胞外信號調節(jié)激酶(p-ERK)的變化。 (3)實驗三：對照組、TGF-β11.0ng/ml、10.0ng/ml、IPL照射劑量72J/cm2組、72J/cm2+TGF-β110.Ong/ml、PD98059+72J/cm2組、PD98059+TGF-β110.Ong/ml組及PD98059+72J/cm2+TGF-β110.0ng /ml組分別處理成纖維細胞后,采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測各組細胞增殖情況；應用蛋白質免疫印跡(western blot)法測定各組磷酸化細胞外信號調節(jié)激酶(p-ERK)的變化。 結果 1.體外培養(yǎng)成纖維細胞經Ⅰ、Ⅲ型膠原染色陽性,角蛋白染色陰性,細胞具有成纖維細胞形態(tài)。 2.1成纖維細胞經不同濃度轉化生長因子-β1作用后,與對照組比較,各組濃度的TGF-β1分別處理24及48小時后,0.01ng/ml、0.1 ng/ml、1.0ng/ml、50.0ng/ml的TGF-β1對成纖維細胞增殖活性均無顯著增加(P0.05),在TGF-β1濃度為10.0ng/ml時,細胞增殖活性較對照組顯著增高(P0.05)。 2.2與對照組相比：TGF-β1各濃度組及時間組p-ERK蛋白表達均有差異,隨著TGF-β1劑量的增加和作用時間的延長,其磷酸化ERK蛋白表達水平逐漸增強,在TGF-β1 10.0ng/ml時p-ERK表達達高峰,在15分鐘時,磷酸化ERK蛋白表達水平開始增加,在60分鐘時p-ERK表達水平達高峰。120分鐘時p-ERK表達有所衰減。 2.3在抑制劑干預組中,與對照組相比：在IPL照射及TGF-β1作用24及48小時后,TGF-β110.0ng/ml、IPL照射劑量72J/cm2組和72J/cm2+TGF-β110.0ng/ml組成纖維細胞增殖活性明顯增加(P0.01),其磷酸化ERK表達水平亦增加。而PD98059+TGF-β110.0ng/ml、PD98059+72J/cm2較對照組細胞增殖活性降低(P0.05),但其磷酸化ERK表達水平稍有增加。余組未見明顯變化。 結論 1.大劑量TGF-β1可促進體外培養(yǎng)的成纖維細胞增殖并且可上調細胞內的ERK信號蛋白活性。TGF-β1誘導的成纖維細胞的p-ERK水平增高可能是依賴ERK通路激活的。 2.強脈沖光可促進體外培養(yǎng)的成纖維細胞增殖,其增殖機制之一可能是通過ERK信號通路實現的。 3. TGF-β1與IPL在成纖維細胞增殖作用中可能存在協同交互作用。
[Abstract]:Purpose. 1. To observe the effect of transforming growth factor-p 1 on the proliferation of human skin fibroblasts in vitro. 2. To investigate the role of intense pulsed light in the proliferation of transforming growth factor-p1-mediated fibroblasts and the study of extracellular signal-regulated kinase (ERK) signaling pathway. Method. 1. Primary human normal skin fibroblasts were isolated and cultured by circumcision of prepuce. The fibroblasts were identified by keratin and collagen 鈪，

本文編號：1685214