本文選題：銀屑病　切入點：HSulf-1　出處：《安徽醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：背景銀屑病是一種與免疫、炎癥、細胞增殖與凋亡、微血管生成等多種因素相關(guān)的慢性復(fù)發(fā)性疾病,確切發(fā)病機制不明。組織病理學上的主要特征有角質(zhì)形成細胞過度增殖和血管生成。目前研究表明缺氧與銀屑病發(fā)病相關(guān)。銀屑病的角質(zhì)形成細胞增殖可能導(dǎo)致耗氧量的增加,而表皮的增厚也能促使氧的彌散距離增加,氧氣供應(yīng)減少,出現(xiàn)局部缺氧。缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)為缺氧微環(huán)境中的關(guān)鍵性因子,已知其參與銀屑病的發(fā)生發(fā)展,在銀屑病及人永生化角質(zhì)形成細胞(Ha Ca T細胞)中高表達。人硫酸酯酶-1(HSulf-1)是近年來發(fā)現(xiàn)的新型腫瘤抑制基因,存在于細胞表面,在正常組織中恒定表達,而在多數(shù)惡性腫瘤中表達下降或缺失,其再表達可導(dǎo)致腫瘤細胞增殖、遷移或侵襲的能力相對減弱。有報道HSulf-1為HIF-1α的下游靶基因,HSulf-1轉(zhuǎn)錄起始上游的啟動子端存在可與HIF-1α結(jié)合的缺氧反應(yīng)元件(HRE)位點,缺氧可能導(dǎo)致HSulf-1異�；罨档�,從而引起下游信號通路、細胞侵襲和轉(zhuǎn)移的改變�；阢y屑病與惡性腫瘤都具有特征性局部缺氧和細胞增殖的特點,我們推測HSulf-1可能在銀屑病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮一定作用,本課題旨在研究HSulf-1和HIF-1α在銀屑病皮損區(qū)與正常皮膚中的表達水平以及在常氧和缺氧時人永生化角質(zhì)形成細胞株Ha Ca T細胞中的表達情況,并構(gòu)建HSulf-1基因的過表達載體便于后續(xù)進一步體內(nèi)外研究其與角質(zhì)形成細胞增殖的關(guān)系。目的探討HSulf-1、HIF-1α在銀屑病皮損區(qū)與正常皮膚中的表達以及常氧和缺氧時人永生化角質(zhì)形成細胞株Ha Ca T細胞中的表達,構(gòu)建HSulf-1基因過表達載體便于后續(xù)進一步體內(nèi)外研究其與角質(zhì)形成細胞增殖的關(guān)系。方法第一部分:(1)分別應(yīng)用HSulf-1、HIF-1α抗體對銀屑病皮損組織及正常人皮膚組織進行免疫組織化學染色檢測,高倍鏡下觀察陽性細胞的數(shù)量。(2)Ha Ca T細胞培養(yǎng)后,分別加入不同濃度(濃度分別為0μmol/L、100μmol/L、300μmol/L、600μmol/L)處理的二氯化鈷(Co Cl2)處理24小時,收集總蛋白后行Western blotting檢測不同缺氧濃度下Ha Ca T細胞中HSulf-1、HIF-1α蛋白的表達情況。第二部分:構(gòu)建重組質(zhì)粒p CDH-HSulf-1,Western blotting法篩選HSulf-1過表達穩(wěn)轉(zhuǎn)Ha Ca T細胞株。結(jié)果第一部分:(1)HSulf-1在銀屑病皮損區(qū)低表達,在正常組織中高表達。HIF-1α在銀屑病皮損區(qū)高表達,在正常組織中低表達。(2)相對于常氧,HIF-1α蛋白在缺氧條件下高表達,而HSulf-1蛋白在缺氧條件下低表達,二者表達呈負相關(guān)。第二部分:(1)經(jīng)Nhel I和Bam HI雙酶切PCR鑒定和DNA測序顯示,成功構(gòu)建p CDH-HSulf-1重組質(zhì)粒;(2)對p CDH-HSulf-1進行慢病毒包裝,出現(xiàn)綠色GFP熒光;(3)HSulf-1過表達組與對照組及空白組相比,HSulf-1過表達組的HSulf-1蛋白的表達水平顯著提高(P0.05),成功篩選過表達的穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株。結(jié)論HSulf-1在銀屑病皮損區(qū)低表達,在正常組織中高表達;缺氧下HSulf-1在Ha Ca T細胞中低表達,這都與其在腫瘤細胞或腫瘤組織中表達一致,因其過表達可抑制腫瘤細胞增殖。我們推測過表達HSulf-1可能抑制角質(zhì)形成細胞的增殖。構(gòu)建HSulf-1基因過表達載體,成功篩選過表達Ha Ca T穩(wěn)定細胞株,便于進一步體內(nèi)外研究其與角質(zhì)形成細胞增殖的關(guān)系。
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【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R758.63

【參考文獻】

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1 徐高亞;季衛(wèi)丹;嚴妍;包龍龍;沈舒文;顧蕾;傅曉輝;姜小清;蘇長青;吳孟超;;hSulf-1過表達提高乳腺癌MCF-7細胞對PARP抑制劑AZD2281的敏感性[J];中國腫瘤生物治療雜志;2014年03期

2 季衛(wèi)丹;包龍龍;嚴妍;曹璐;傅曉輝;姜小清;蘇長青;;hSulf-1基因腺病毒表達載體的構(gòu)建及其對血管內(nèi)皮細胞增殖、遷移能力的影響[J];第二軍醫(yī)大學學報;2012年03期

3 楊井;陶娟;李延;劉業(yè)強;陸潔捷;涂亞庭;;缺氧對HaCaT細胞HIF-1α、GLUT-1表達的影響及與細胞增殖的關(guān)系[J];中國皮膚性病學雜志;2009年10期

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1 王育玨;HSulf-1在黑素瘤中的表達及抑制腫瘤細胞遷移的作用[D];華中科技大學;2014年

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本文編號：1684796