本文選題：Epiplakin　切入點：基因敲除　出處：《河北醫(yī)科大學》2012年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的：Epiplakin（EPPK）屬于plakin家族，是一種細胞骨骼連接蛋白，是在表皮下水皰病患者血清中發(fā)現(xiàn)的一種自身抗原，在復層上皮及單層上皮都有表達，與中間絲關系密切。在正常情況下Epiplakin基因敲除鼠（EPPK-/-鼠）和野生鼠的表型無明顯差異。然而在傷口愈合過程中，基因敲除鼠的角蛋白的遷移加速。EPPK缺乏的角質細胞中角蛋白絲的直徑減小。免疫電鏡研究顯示EPPK與K5，K10和K6在傷口邊緣共存。這個數(shù)據(jù)表明在傷口愈合過程中，EPPK在增殖的角質細胞中加速了角蛋白的結合成束；并在有壓力的情況下， EPPK可能有助于加強角蛋白網(wǎng)狀結構。截止目前為止，尚未見有關EPPK-/-鼠和野生鼠舌的超微結構變化的研究，激光掃描共聚焦顯微鏡觀察到野生鼠舌中有豐富的EPPK表達，透明角質顆粒參與角蛋白的形成。本研究擬運用透射電子顯微鏡技術觀察EPPK-/-鼠和野生鼠舌的超微結構變化，特別是透明角質顆粒的變化，進一步探索EPPK與角蛋白之間的關系及功能。 方法：將野生鼠和EPPK-/-鼠鼠舌平均分8部分，從舌尖到舌根方向依次編號1-8號。首先應用光學顯微鏡觀察EPPK-/-鼠和野生鼠舌粘膜上皮的結構，然后應用透射電子顯微鏡從冠狀面對應編號觀察并比較其超微結構變化，特別是透明角質顆粒的變化。 結果： 1光鏡觀察 1.1野生鼠舌粘膜上皮由下而上可見四層結構�；讓蛹毎柿⒎叫�，細胞排列呈波浪樣起伏。棘層細胞呈圓形。基底層和棘層未見透明角質顆粒。顆粒層細胞呈扁平形，在此層舌粘膜乳頭間可見密集透明角質顆粒呈層狀分布，其大小不一（見Fig1、3、5）。透明角質顆粒在HE染色中呈強嗜堿性。角化層細胞扁平，覆蓋在舌表面，未見透明角質顆粒。乳頭部可見透明角質顆粒沿突起呈線狀排列，但數(shù)量較乳頭之間部位少（見Fig1、3、5）。舌根的粘膜沒有乳頭。舌根粘膜也分為4層，角質層不如舌尖厚，其他三層細胞形態(tài)無明顯差異，顆粒層中透明角質顆粒不如舌尖密集（見Fig7）。 1.2EPPK-/-鼠舌粘膜上皮分4層，基底層呈柱狀，細胞呈波浪狀起伏排列。棘層細胞呈圓形�；讓雍图瑢游匆娡该鹘琴|顆粒。顆粒層可見透明角質顆粒稀少，分布零散，分布無規(guī)律（見Fig2、4、6）。角質層細胞扁平，未見透明角質顆粒。舌乳頭基底部細胞呈柱狀，無透明角質顆粒，游離部可見透明角質顆粒，數(shù)量稀少（見Fig2、4、6）。舌根部無舌乳頭，舌根粘膜結構同舌尖乳頭之間的結構無明顯差異，透明角質顆粒稀少，分布零散（見Fig.8）。 2透射電子顯微鏡觀察 2.1低倍（4000倍）透射電鏡下，野生鼠舌粘膜上皮細胞外形規(guī)則，基底層細胞呈長的橢圓形，長軸與基底垂直。棘層細胞的長軸與基底平行，，在此層可見透明角質顆粒分布，呈圓形，數(shù)量不多。顆粒層可見大量透明角質顆粒，呈圓形，主要在乳頭之間分布（見Fig9）。角質層細胞幾乎無透明角質顆粒。EPPK-/-鼠舌粘膜上皮基底層細胞呈柱形，無透明角質顆粒分布。棘層細胞形狀似圓形，幾乎無透明角質顆粒。顆粒層可見透明角質顆粒，類圓形，分布零散（見Fig10）。各層細胞之間連接未見明顯異常。 2.2高倍（25000倍）透射電鏡觀察：野生鼠透明角質顆粒外圍部分電子密度較中央部位高（見Fig11、13）；細胞之間連接緊密（見Fig11、13、15）；張力細絲正常。EPPK-/-鼠透明角質顆粒電子密度均一(見Fig.12、14)，細胞連接較疏松（見Fig.12、14、16）細胞質中的線粒體及高爾基體等細胞器未發(fā)現(xiàn)明顯異常。此高倍透射電鏡觀察結構經(jīng)ACDsee圖像軟件處理后發(fā)現(xiàn)：EPPK-/-鼠的張力細絲較野生鼠的細。 結論： 1光鏡觀察發(fā)現(xiàn)EPPK-/-鼠與野生鼠的舌粘膜上皮結構相比較，EPPK-/-鼠舌粘膜上皮顆粒層中的透明角質顆粒數(shù)量較野生鼠明顯減少。 2電鏡觀察發(fā)現(xiàn)EPPK-/-鼠舌粘膜上皮中的透明角質顆粒較野生鼠舌粘膜上皮中的透明角質顆粒：直徑��；數(shù)目少；并缺少野生鼠透明角質顆粒高電子密度的外圍部分。EPPK-/-鼠舌粘膜上皮的細胞連接不緊密。張力細絲較細。 總之，Epiplakin基因表達缺失引起了舌粘膜上皮細胞超微結構的變化，尤其是透明角質顆粒的變化最明顯。
[Abstract]:Objective: Epiplakin (EPPK) belongs to the plakin family, is a kind of cell skeleton connection protein, is launching a blistering disease in patients found self antigens in the epidermis in stratified epithelium and epithelial monolayers have close relationship with the expression of intermediate filaments. Under the condition of normal Epiplakin gene knockout mice (EPPK-/- mice no significant difference) and the wild mouse phenotype. However, in the process of wound healing, keratin filament keratin gene knock in mouse migration accelerated.EPPK deficient keratinocytes in diameter decrease. Study on immune electron microscopy showed EPPK and K5, K10 and K6 in the wound edge coexist. The data show that in the process of wound healing EPPK, on the proliferation of keratinocytes in accelerated with keratin bundles; and under pressure, EPPK may help strengthen the keratin network structure. So far, no relevant EPPK-/- mice and wild-type mice of tongue Study on the change of micro structure, laser scanning confocal microscope to observe expression of EPPK rich wild rat tongue, the formation of keratohyalin granules in keratin. This study ultrastructural changes by transmission electron microscopy of EPPK-/- mice and wild-type mice of the tongue, especially the changes of keratohyalin granules, and to further explore the relationship between the function between EPPK and keratin.
Methods: wild rats and EPPK-/- mouse tongue average is divided into 8 parts, respectively from the tip of the tongue to the back direction of No. 1-8. The first application structure of optical observation of lingual epithelium of EPPK-/- mice and wild-type mice microscope, then the application of transmission electron microscope from the coronal plane should be numbered and observed and compared the ultrastructural changes, especially the change of keratohyalin particles.
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本文編號：1595616