本文關鍵詞：NF-κB特異性抑制劑PDTC對鼠黑素瘤B16細胞作用的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《安徽醫(yī)科大學》 2012年

NF-κB特異性抑制劑PDTC對鼠黑素瘤B16細胞作用的實驗研究

周艷梅  

【摘要】：黑素瘤是常見惡性腫瘤之一,但往往發(fā)現(xiàn)較晚且病情發(fā)展迅速�；熓且环N重要的腫瘤治療方法,通常作為手術后的輔助治療、腫瘤術后復發(fā)治療和不能手術切除治療的重要手段之一�；熕幬餁[瘤細胞主要是通過促進其發(fā)生凋亡而起到治療腫瘤的目的。然而,在化療過程中腫瘤細胞對化療藥物誘導的凋亡具有抵抗能力,某些腫瘤甚至可在化療后出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象,嚴重影響了化療效果。顯然化療藥物誘導腫瘤細胞凋亡的同時激活了腫瘤細胞內的一系列生物信號,在內、外生物信號和藥物誘導凋亡之間存在著平衡,促進和抑制凋亡因素之間的相互作用決定了細胞的存亡 核轉錄因子-KB(nuclear factor-KB, NF-κB)是一類廣泛分布于真核細胞中、作用多樣的轉錄因子,在腫瘤細胞增殖、凋亡、侵襲、轉移和血管生成中起著關鍵作用。近年來有報道認為腫瘤對化療藥物的耐藥與NF-KB關系密切。NF-KB能被多種因素所激活,其中包括促炎細胞因子、細胞應激以及生長因子等；它也能被化療藥物激活,包括柔紅霉素、阿霉素以及順鉑等化療藥物。NF-κB也是凋亡的關鍵調節(jié)因子,它可以誘導某些抗凋亡因子的表達,如Survivin和Bcl-2,抑制細胞凋亡。NF-KB的激活受到NF-KB抑制劑(inhibitor of NF-κB, IκB)的嚴格調控,所以,在傳統(tǒng)化療藥物治療的同時給予NF-KB抑制劑,可能通過阻斷NF-κB通路和抑制相關蛋白的表達,降低腫瘤局部復發(fā)和提高患者的生存率。 吡咯烷二硫代氨基甲酸鹽(pyrrolidine dithiocarbamate, PDTC)是一種小分子毓基化合物,它具有多種生化活性,如改變氧化還原狀態(tài)、重金屬的螯合及抑制酶的作用。PDTC最初被作為一種抗氧化劑應用,它既能抵抗自由基的毒性作用,也能干擾促炎細胞因子的生成,現(xiàn)已被用作NF-KB的強效抑制劑。目前已發(fā)現(xiàn)PDTC可以促進多種體外培養(yǎng)腫瘤細胞的凋亡,抑制其增殖,并可增加腫瘤細胞對化療及放療的敏感性。關于PDTC對黑素瘤細胞的作用,國內外尚無研究。因此,本課題通過體外實驗,研究PDTC對黑素瘤B16細胞增殖和凋亡相關蛋白的影響,并研究PDTC對腫瘤血管生成和轉移關系密切的血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)的作用。 目的：研究NF-KB特異性抑制劑PDTC對鼠黑素瘤B16細胞增殖及凋亡的影響；并測定其對VEGF表達的影響,了解PDTC體外抗黑色素瘤作用及其機制,為PDTC治療黑色素瘤提供重要的實驗室基礎和理論依據。 方法：以不同濃度的PDTC (25、50、100μmol/L)作用于鼠黑素瘤B16細胞不同時間(12、24、36h)后： (1)倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)學變化； (2)四甲基噻唑氮藍(MTT)法測定其對B16細胞增殖的抑制率； (3)比色法檢測Caspase-3活性變化； (4)免疫細胞化學方法檢測細胞內增殖細胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)、 Bcl-2和Survivin的表達； (5) ELISA檢測PDTC作用下B16細胞VEGF的表達情況。 結果：(1)倒置顯微鏡下,對照組細胞緊貼瓶底,細胞生長活躍,呈梭狀,有較長偽足；加入PDTC后培養(yǎng)的B16細胞形態(tài)逐漸變圓,而典型的呈梭狀生長細胞減少,與鄰近細胞接觸減少,并有大量細胞呈漂浮狀態(tài)； (2)MTT法顯示,不同濃度PDTC (25、50、100μmol/L)作用B16細胞不同時間(12、24、36h)后,能夠顯著抑制B16細胞的增殖,且呈現(xiàn)劑量和時間依賴性,實驗組和對照組之間比較差異有顯著性(P0.01)； (3)比色法檢測顯示,隨著藥物濃度加大,Caspase-3活性增加,與對照組比較差異有顯著性(P0.01),且高濃度組比低濃度組活性增高,其差異也有顯著性(P0.01)； (4)免疫組化法顯示,PDTC作用24h后細胞中PCNA、 Bcl-2、 Survivin表達均下調,與對照組比較差異有顯著性(P0.01)； (5) ELISA法顯示,PDTC作用24h后B16細胞VEGF表達降低,與對照組比較差異有顯著性(P0.01),且呈明顯的劑量依賴關系。 結論：(1)PDTC能抑制鼠黑素瘤B16細胞增殖,促進細胞凋亡,存在時間和劑量依賴性； (2) PDTC能誘導鼠黑素瘤B16細胞凋亡,其治療腫瘤機制可能是通過抑制NF-κB活性并下調PCNA、 Bcl-2和Survivin表達,促進Caspase-3活化而抑制腫瘤細胞生長和誘導腫瘤細胞凋亡； (3) PDTC能有效降低鼠黑素瘤B16細胞VEGF的分泌； (4) PDTC有望為黑色素瘤化學預防和化學輔助治療帶來新的前景。

【關鍵詞】：
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R739.5
【目錄】：

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