本文關(guān)鍵詞： 銀屑病 Th17細(xì)胞 IL-23R 單核苷酸多態(tài)性 遺傳學(xué) IL-17 流式細(xì)胞染色 甲氨蝶呤　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2010年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】： 銀屑病是一種常見的慢性炎癥性疾病,易復(fù)發(fā),難治愈,患病率為1-3%左右,近年來銀屑病的發(fā)病率在不斷上升。由于該病反復(fù)發(fā)作,常需反復(fù)治療,因而給患者及其家庭帶來沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān),對患者的身體健康和精神影響甚大。銀屑病的病因復(fù)雜,其發(fā)病機(jī)理尚不明確,目前認(rèn)為銀屑病的發(fā)病主要涉及免疫、遺傳、心理、環(huán)境因素等方面。銀屑病的主要病理改變?yōu)榻琴|(zhì)形成細(xì)胞異常增生、角化不全、新生血管形成和炎性細(xì)胞浸潤�，F(xiàn)在普遍的觀點(diǎn)為：銀屑病的發(fā)病是一種多基因遺傳多因素作用參與的T細(xì)胞免疫介導(dǎo)性皮膚病,其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜。其中CD4+T淋巴細(xì)胞免疫功能異常在其發(fā)病中尤為重要。CD4+T淋巴細(xì)胞一直被劃分為Th1和Th2兩大類。Th1分泌IFN-γ和IL-12等細(xì)胞因子,在清除胞內(nèi)菌時(shí)起重要作用；而Th2分泌IL-4、IL-2等細(xì)胞因子,主要影響寄生蟲和胞外菌的清除,IFN-γ和IL-4分別是Th1和Th2細(xì)胞亞群標(biāo)志性細(xì)胞因子。近年來,又發(fā)現(xiàn)了一類新的CD4+T細(xì)胞亞群Th17細(xì)胞,高表達(dá)IL-17,同時(shí)也分泌IL-6和TNF-α。Th17具有獨(dú)立的分化和發(fā)育調(diào)節(jié)機(jī)制,在免疫性疾病和感染性疾病中發(fā)揮重要調(diào)節(jié)作用,是目前的研究熱點(diǎn)之一。IL-23主要作用于Th17細(xì)胞,維持其表達(dá),研究證實(shí)IL-23刺激Th17細(xì)胞的擴(kuò)增和維持,且Th17細(xì)胞在人體中的分化依賴于IL-1β和IL-23。故IL-23R對Th17細(xì)胞亞群來說是一個(gè)關(guān)鍵的作用因子。IL23-IL23R-TH17-IL17軸在自身免疫性疾病中的致病性已被證實(shí)。過去認(rèn)為銀屑病是Th1介導(dǎo)的免疫性疾病,伴有IFN-γ信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。Austin等分離出銀屑病患者皮損處T細(xì)胞,通過流式細(xì)胞儀分析發(fā)現(xiàn)絕大部分CD4+和CD8+細(xì)胞分泌IL-2、IFN-γ、TNF-α,而11%的T細(xì)胞表達(dá)IL-4或IL-10,國內(nèi)何玉清等的研究同樣發(fā)現(xiàn)了Th1細(xì)胞分化偏態(tài)性。這表明以IL-2、IFN-γ、TNF-α為代表的Th1細(xì)胞因子在銀屑病發(fā)病機(jī)制中起重要作用。有研究報(bào)道Th17和強(qiáng)直性脊柱炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡等疾病的發(fā)病中起重要作用。近年來Th17細(xì)胞在銀屑病發(fā)病過程中的作用越來越引起人們的重視。最近研究表明,在銀屑病皮損中可檢出白細(xì)胞介素-17(IL-17)mRNA,而非皮損處未檢出。研究結(jié)果還進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)銀屑病皮損來源的大多數(shù)CD4+和CD8+T細(xì)胞表達(dá)IL-17,而與IFN-γ, IL-4的表達(dá)不相關(guān)。國內(nèi)學(xué)者也發(fā)現(xiàn)尋常型銀屑病患者皮損中IL-17, IFN-γ的表達(dá)水平較正常人皮膚組織明顯增高。這一結(jié)果說明銀屑病患者皮損中存在Th17細(xì)胞,并在銀屑病的發(fā)病中發(fā)揮重要作用。Th17在銀屑病發(fā)病中的作用已成為國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)之一。甲氨蝶呤(methotrexate, MTX)因其起效快、療效好、經(jīng)濟(jì)等原因,已被用于銀屑病治療。有研究表明系統(tǒng)性應(yīng)用MTX能減少銀屑病皮損內(nèi)T細(xì)胞的數(shù)量,但對銀屑病皮損內(nèi)及血液中免疫細(xì)胞及細(xì)胞因子的調(diào)控作用尚未清楚。且國內(nèi)外關(guān)于MTX治療銀屑病的基礎(chǔ)研究報(bào)道較少。 本研究擬評價(jià)銀屑病患者的Th17細(xì)胞在外周血PBMC的表達(dá)及其與銀屑病臨床的相關(guān)性及意義,并觀察MTX治療尋常性銀屑病患者對Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子的影響作用,探討MTX治療銀屑病新的作用機(jī)制。此外進(jìn)一步在中國漢族人群中鑒定與銀屑病相關(guān)的IL-23R基因的變異體區(qū)域,探討IL-23R基因多態(tài)性與漢族人銀屑病易感性的關(guān)系。 第一部分：探討尋常性銀屑病患者外周血中Th17細(xì)胞的變化與銀屑病臨床相關(guān)性及意義 目的 探討銀屑病患者的Th17細(xì)胞在外周血PBMC的表達(dá)及與其臨床相關(guān)性,初步明確Th17細(xì)胞在銀屑病發(fā)病中的作用機(jī)制及臨床意義。 方法 抽取43例尋常性銀屑病患者,其中進(jìn)行期為25例,靜止期18例及30例正常人對照組外周血,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血單核細(xì)胞CD4(+)IL-17(+)細(xì)胞表達(dá)水平,并分析進(jìn)行期銀屑病組和靜止期銀屑病組與正常對照組差異。 結(jié)果 流式細(xì)胞染色示,銀屑病患者PBMC CD4(+)IL-17(+)細(xì)胞數(shù)量相對于正常人顯著性上調(diào)(t=12.057,P0.001),正常對照組、進(jìn)行期組、靜止期組三者有差別(F=142.34,P0.001)。且銀屑病患者PBMC CD4(+)IL-17(+)的表達(dá)與尋常性銀屑病嚴(yán)重程度指數(shù)PASI呈顯著正相關(guān)。 結(jié)論 銀屑病患者外周血Th17細(xì)胞數(shù)量上調(diào),Th17數(shù)量水平與尋常性銀屑病嚴(yán)重程度呈顯著性正相關(guān),Th17細(xì)胞在銀屑病的發(fā)病中可能有著重要作用,Th17細(xì)胞可能參與銀屑病的發(fā)生發(fā)展的病理生理過程。提示針對Th17的生物靶向治療也許可以作為治療銀屑病的新的有效方法。 第二部分Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子在尋常性銀屑病患者皮損及外周血清中的檢測及其臨床意義探討 目的 檢測尋常性銀屑病患者外周血及局部皮損組織中Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IL-17、IL-23的表達(dá)水平,明確銀屑病患者與正常人之間、不同期銀屑病患者之間Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的差異及其血清水平檢測的臨床意義,并觀察甲氨蝶呤(MTX)對銀屑病患者Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的影響,以期進(jìn)一步探討Th17細(xì)胞在銀屑病致病機(jī)理中發(fā)揮的作用及MTX治療尋常性銀屑病新的作用機(jī)制。 方法 尋常性銀屑病患者35例,正常人對照組30例,應(yīng)用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測血清中IL-17、IL-23水平；應(yīng)用巢式聚合酶鏈反應(yīng)方法(nested polymerase chain reaction)檢測皮損或皮膚組織中IL-17mRNA、IL-23mRNA的表達(dá)水平。并動態(tài)觀察治療前后IL-17、IL-23的變化與尋常性銀屑病患者病情活動指標(biāo)之間的關(guān)系。 結(jié)果 (1)尋常性銀屑病患者皮損內(nèi)IL-17mRNA、IL-23mRNA表達(dá)水平高于正常人對照組(t值分別為8.341,8.748；P值分別為1.235×10-9,4.130×10-10)。銀屑病患者經(jīng)過MTX治療8周后,皮損明顯改善,皮損內(nèi)IL-17mRNA、IL-23mRNA的表達(dá)水平低于銀屑病患者治療前的表達(dá)水平(t值分別為57.86,7.20；P值均0.001),但與正常對照者皮膚中的表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(t值分別為1.220,0.461,P值均0.05)。 (2)尋常性銀屑病患者外周血清中IL-17、IL-23的濃度較正常人對照組顯著增高。IL-17、IL-23血清水平與尋常性銀屑病的分期有關(guān),其中進(jìn)行期患者組顯著高于靜止期患者組(F值分別為38.56,42.27；P值均0.001)。經(jīng)MTX治療8周后血清中IL-17、IL-23水平均較治療前顯著下降,與正常對照者皮膚中的表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F值分別為107.76,27.21；P值0.001)。 (3)尋常性銀屑病患者皮損內(nèi)IL-17mRNA與IL-23mRNA二者的表達(dá)呈顯著正相關(guān)(r=0.469,P=0.0112)。尋常性銀屑病患者IL-17、IL-23的血清濃度變化與尋常性銀屑病嚴(yán)重程度指數(shù)PASI評分有相關(guān)性(r分別為：0.732、0.611,P值分別為0.022,0.275)。而IL-17與IL-23血清濃度之間有顯著相關(guān)性(r=0.684,P=0.014)。 結(jié)論 (1)結(jié)果提示尋常性銀屑病患者外周血及局部皮損中Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子IL-17、IL-23的表達(dá)水平均顯著高于正常對照,且進(jìn)行期患者明顯高于靜止期患者,提示Th17細(xì)胞相關(guān)細(xì)胞因子可能在尋常性銀屑病的發(fā)病中起重要作用,銀屑病患者外周血及局部皮損中IL-17、IL-23細(xì)胞因子水平可望作為評價(jià)銀屑病判斷病情和預(yù)后的指標(biāo)。 (2)MTX能調(diào)節(jié)銀屑病患者的免疫功能,通過抑制Th17細(xì)胞的功能而發(fā)揮作用。這有可能是MTX治療銀屑病的作用機(jī)理之一。 第三部分漢族人銀屑病患者IL-23R單核苷酸多態(tài)性的研究目的 探討白細(xì)胞介素-23受體(IL-23R)基因多態(tài)性與中國漢族人群銀屑病易感性的關(guān)系。 方法 在NCBI數(shù)據(jù)庫(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)上檢索IL-23R的7個(gè)SNP位點(diǎn)(rs11209026、rs1004819、rs10489629、rs1343151、rs10889677、rs11209032、rs1495965)。從門診病人中收集銀屑病患者93例,正常對照者108例。檢測該201例樣品中7個(gè)SNP位點(diǎn)與銀屑病易感性的關(guān)系。多態(tài)性及其單倍型與銀屑病相對危險(xiǎn)度等數(shù)據(jù)處理均采用SPSS軟件系統(tǒng)進(jìn)行。 結(jié)果 7個(gè)TagSNP位點(diǎn)中的4個(gè)等位基因(rs1004819、rs1343151、rs10889677、rs1495965)頻率在病例組和對照組之間的差異有顯著性(P＜0.001)。 結(jié)論 IL23R基因多態(tài)性與漢族人銀屑病易感性有關(guān)聯(lián)。其中4個(gè)SNP位點(diǎn)(rs1004819、rs1343151、rs10889677、rs1495965)與銀屑病發(fā)病顯著相關(guān)。
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【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R758.63

【引證文獻(xiàn)】

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1 宋勝玉;Th17細(xì)胞及其相關(guān)因子在口腔扁平苔蘚發(fā)病中的變化及意義[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2014年

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本文編號：1494415