本文關(guān)鍵詞： 黑色素瘤 伊曲康唑 薏苡仁油 B16細(xì)胞 周期 VEGF　出處：《河北醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：目的:黑色素瘤為皮膚及黏膜常見的侵襲性腫瘤,在過去的幾十年間,其發(fā)病率和死亡率在逐年上升,如何能更好的控制其病情的發(fā)展和延長患者生存期,已經(jīng)成為臨床醫(yī)生面臨的主要問題。伊曲康唑?yàn)榕R床常用的一線三唑類抗真菌藥物,廣泛應(yīng)用于各種淺部和深部真菌感染,伊曲康唑注射液還應(yīng)用于系統(tǒng)性真菌感染。近年來W shi等學(xué)者發(fā)現(xiàn),伊曲康唑具有抑制腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的作用[1],Inoue K等通過研究發(fā)現(xiàn)伊曲康唑顯著抑制子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖和遷移[2]。Lockhart NR發(fā)現(xiàn)在用伊曲康唑治療一位胰腺癌晚期患者合并的真菌感染時(shí),原本失去手術(shù)機(jī)會的這位患者在接受了9個(gè)月的治療后,病情得到控制,腫瘤縮小,重新獲得了手術(shù)切除腫瘤的機(jī)會。在whipple手術(shù)后幾年時(shí)間隨訪中未發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移[3]。伊曲康唑的這種抗腫瘤作用已經(jīng)為越來越多的醫(yī)務(wù)工作者所認(rèn)識。薏苡仁油為禾本科植物薏苡種仁中提取的一種活性物質(zhì),其主要活性成份為脂肪酸及脂類,其中抗腫瘤成份為甘油三酯類。P Pei等發(fā)現(xiàn)薏苡仁油(康萊特)在lewis肺癌的治療過程中表現(xiàn)出強(qiáng)有力的抗腫瘤及免疫刺激活性[4]。Lu X等學(xué)者報(bào)道通過基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)薏苡仁提取物對肺癌A549細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用,且可以誘導(dǎo)A549細(xì)胞的凋亡[5]。本文將通過實(shí)驗(yàn)觀察伊曲康唑及薏苡仁油對小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞株的影響及部分作用機(jī)制。方法:1細(xì)胞培養(yǎng)2四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法繪制小鼠B16細(xì)胞的生長曲線,完成對其生長特征觀察。3運(yùn)用MTT法檢測兩種藥物在不同濃度及作用時(shí)間下對小鼠B16細(xì)胞的影響。4倒置顯微鏡下和HE染色法觀察B16細(xì)胞在藥物作用前后細(xì)胞形態(tài)變化。5運(yùn)用流式細(xì)胞技術(shù)(FCM)檢測藥物干預(yù)后B16細(xì)胞周期變化及凋亡情況。6運(yùn)用細(xì)胞免疫組化技術(shù)檢測細(xì)胞血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)表達(dá)情況。7應(yīng)用SPSS21.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果:1MTT法繪制B16細(xì)胞生長曲細(xì)胞在96孔板中培養(yǎng)不同時(shí)間后,用酶標(biāo)儀測OD值,繪制成的生長曲線近“S”型。2MTT法檢測藥物干預(yù)作用結(jié)果MTT結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明,伊曲康唑組隨藥物濃度增大,作用時(shí)間的延長,對B16細(xì)胞的抑制作用越強(qiáng)(P0.05)。薏苡仁油組隨藥物濃度增大,作用時(shí)間的延長,對B16細(xì)胞的抑制作用越強(qiáng)(P0.05)。兩實(shí)驗(yàn)組比較,兩藥物作用24小時(shí)后,1.41μg/ml的伊曲康唑與20μl/ml的薏苡仁油,2.82μg/ml的伊曲康唑與40μl/ml的薏苡仁油,5.65μg/ml的伊曲康唑與80μl/ml的薏苡仁油,11.30μg/ml的伊曲康唑與160μl/ml的薏苡仁油抑制率比較后差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。兩藥物作用48小時(shí)后,1.41μg/ml的伊曲康唑與20μl/ml的薏苡仁油抑制率比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。其余組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。兩藥物作用72小時(shí)后,各濃度伊曲康唑與薏苡仁油組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),其中濃度為11.30μg/ml的伊曲康唑?qū)π∈驜16細(xì)胞的抑制作用最大。3倒置顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)特征和培養(yǎng)基顏色觀察肉眼觀察培基顏色變化:伊曲康唑組隨著作用時(shí)間的延長,培基顏色由最初的淡黃逐漸變化為深紅色,且濃度越大作用時(shí)間越長,顏色深度變化程度越明顯。薏苡仁油組培基顏色變化不太明顯。倒置顯微鏡下形態(tài)變化:對照組B16細(xì)胞生長狀態(tài)良好,細(xì)胞呈多角形或菱形,細(xì)胞連接緊密,貼壁均勻生長,胞膜完整,胞漿透亮,可見胞核。藥物作用后,鏡下可見細(xì)胞數(shù)量減少,細(xì)胞變圓,體積變小,偽足減少甚至消失,細(xì)胞變得皺縮漂浮,可見細(xì)胞碎屑,部分成團(tuán),胞漿不均勻。相對于薏苡仁油組,伊曲康唑組的變化更為明顯。4 HE染色觀察B16細(xì)胞形態(tài)學(xué)特細(xì)胞經(jīng)HE染色,胞核呈藍(lán)色,胞質(zhì)染色均勻呈粉紅色,部分細(xì)胞可見多核及核分裂像,胞膜完整,形態(tài)規(guī)則,細(xì)胞間連接緊密。藥物干預(yù)后細(xì)胞貼壁數(shù)目減少,形態(tài)變圓,體積縮小,部分脫落,胞質(zhì)濃縮邊緣化,與倒置顯微鏡下直接觀察相比,染色后細(xì)胞形態(tài)變化更加直觀、清晰。兩實(shí)驗(yàn)組比較,伊曲康唑組較薏苡仁油組對細(xì)胞形態(tài)影響更為顯著。5藥物對B16細(xì)胞的細(xì)胞周期及凋亡的影響藥物對細(xì)胞周期的影響:兩種藥物與對照組對比可發(fā)現(xiàn),隨著藥物濃度的增高,G0/G1期的細(xì)胞比例逐漸增加,S期比例逐漸減小且均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。藥物對細(xì)胞凋亡的影響:藥物作用24小時(shí)后,DNA直方圖并未發(fā)現(xiàn)明顯的細(xì)胞凋亡峰。6藥物對B16細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)影響免疫組化法檢測VEGF蛋白表達(dá)發(fā)現(xiàn),與對照組比較,兩種藥物作用后VEGF蛋白量表達(dá)均下降(P0.05)伊曲康唑組:隨著藥物濃度的增加VEGF表達(dá)量下降,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。薏苡仁油組:隨著藥物濃度的增加VEGF表達(dá)量下降,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。兩實(shí)驗(yàn)組比較,伊曲康唑組VEGF蛋白表達(dá)量下降更為明顯。結(jié)論:1伊曲康唑和薏苡仁油均對小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞增殖有一定的抑制作用,在一定范圍內(nèi),抑制作用隨藥物濃度加大及作用時(shí)間的延長逐漸增強(qiáng)。2伊曲康唑和薏苡仁油均對小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞VEGF蛋白表達(dá)有抑制作用并呈濃度依賴,且伊曲康唑的抑制作用強(qiáng)于薏苡仁油。由此可見,抑制VEGF蛋白表達(dá)可能是兩種藥物抗B16細(xì)胞增殖的原因之一。3伊曲康唑和薏苡仁油均可以將小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞的細(xì)胞周期阻滯在G0/G1期。本實(shí)驗(yàn)未檢測到明顯凋亡峰,可能原因?yàn)楸緦?shí)驗(yàn)細(xì)胞凋亡的發(fā)生處于早期階段,細(xì)胞凋亡峰不明顯,兩種藥物通過影響細(xì)胞凋亡機(jī)制來抑制其增殖的作用還有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)。4伊曲康唑?qū)π∈蠛谏亓黾?xì)胞增殖的抑制作用強(qiáng)于薏苡仁油。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R739.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 黃曉兵;石毅;王春森;王曉冬;陳姣;車菲菲;;三氧化二砷聯(lián)合伊曲康唑?qū)Χ喟l(fā)性骨髓瘤細(xì)胞Hedgehog信號通路的影響及抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)研究[J];中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2016年05期

2 丁洪基;;腫瘤誘導(dǎo)的淋巴管生成和腫瘤轉(zhuǎn)移研究進(jìn)展[J];臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志;2016年04期

3 包永睿;王帥;孟憲生;鞏曉杰;楊欣欣;;薏苡仁脂肪酸類成分對人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的影響[J];中成藥;2014年02期

4 王允芬;姚艷雯;劉紅兵;呂鏜烽;袁冬梅;宋勇;;伊曲康唑?qū)ewis肺癌荷瘤裸鼠惡性胸腔積液生成的抑制作用[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2014年01期

5 王娟;馬淑梅;陳秀華;;索拉非尼合并伊曲康唑的抗腫瘤作用[J];中國醫(yī)藥工業(yè)雜志;2013年04期

6 石華;劉士瑞;李福秋;;伊曲康唑治療甲真菌病療效觀察[J];吉林醫(yī)學(xué);2011年10期

7 唐衛(wèi)萍;劉向倩;;伊曲康唑在兒童中的應(yīng)用和安全性[J];中國新藥與臨床雜志;2010年04期

8 張晶;張玉鎖;;口服伊曲康唑治療兒童頭癬療效及安全性觀察[J];中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2009年02期

9 褚娟紅;葉騫;;薏苡仁的藥理及臨床研究概況[J];遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2008年04期

10 馮剛,孔慶志,黃冬生,黃濤,盧宏達(dá),費(fèi)雁,馮覺平;薏苡仁注射液對小鼠移植性S180肉瘤血管形成抑制的作用[J];腫瘤防治研究;2004年04期

，

本文編號：1491889