發(fā)布時間：2018-02-02 21:19

  本文關鍵詞： mic R- 黑色素瘤 增殖 凋亡　出處：《中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志》2017年21期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的研究mi R-194對人惡性黑色素瘤細胞的增殖和凋亡的影響及機制。方法應用實時熒光定量聚合酶鏈反應(q RT-PCR)分別檢測mi R-194在原代正常人皮膚黑色素細胞系PIG1和5種惡性黑色素瘤細胞系(A375、SK-MEL-1、SK-MEL-2、SK-MEL-5及SK-MEL-28)中的相對表達量。利用Lipofectamine TM 2000分別將A375細胞系轉(zhuǎn)染mi R-194 mimics和陰性對照質(zhì)粒,從而將A375細胞系分為mi R-194模擬物組和陰性對照組;應用MTT法和流式細胞術分別測定mi R-194模擬物組和陰性對照組細胞的增殖能力及凋亡率,蛋白印跡(Western blot)分別檢測mi R-194模擬物組和陰性對照組的細胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、裂解型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)蛋白表達情況。結果 mi R-194在5種黑色素瘤細胞系A375、SKMEL-1、SK-MEL-2、SK-MEL-5及SK-MEL-28中的表達水平低于正常人皮膚黑色素細胞系PIG1,依次分別是正常細胞系的(0.18±0.03)、(0.25±0.05)、(0.37±0.03)、(0.39±0.04)及(0.45±0.03)倍(均P0.05)。轉(zhuǎn)染后第0、1、2、3、4及5天,mi R-194模擬物組vs陰性對照組的O D值分別為:(0.18±0.02)vs(0.19±0.03)(P0.05)、(0.29±0.02)vs(0.27±0.03)(P0.05)、(0.42±0.08)vs(0.45±0.07)(P0.05)、(0.63±0.09)vs(1.17±0.12)(P0.05)、(1.05±0.15)vs(2.15±0.21)(P0.05)及(1.87±0.23)vs(3.18±0.27)(P0.05)。mi R-194模擬物組和陰性對照組的細胞凋亡率分別為24.2%和9.3%(P0.05)。Cyclin D1和Cleaved Caspase-3蛋白在mi R-194模擬物組中的表達量分別是陰性對照組的(0.36±0.04)和(3.2±0.28)倍(均P0.05)。結論 mi R-194在黑色素瘤細胞中低表達,mi R-194表達上調(diào)可促進黑色素瘤細胞凋亡并抑制黑色素瘤細胞的增殖,其機制可能為下調(diào)Cyclin D1蛋白及上調(diào)Cleaved Caspase-3蛋白表達。
[Abstract]:Objective to study the effect and mechanism of miR-194 on proliferation and apoptosis of human malignant melanoma cells. Mi R-194 was detected in primary normal human melanoma cell line PIG1 and 5 malignant melanoma cell lines, A375, respectively. SK-MEL-1, SK-MEL-2. SK-MEL-5 and SK-MEL-28). A375 cell line was transfected into mi R-194 mimics and negative control plasmid by Lipofectamine TM2000. A375 cell line was divided into miR-194 analogue group and negative control group. MTT assay and flow cytometry were used to determine the proliferative ability and apoptosis rate of mitR-194 analogue group and negative control group, respectively. Western blot was used to detect cyclin D1cyclin D1 in miR-194 mimetic group and negative control group. Results the expression of caspase-3 protein was detected in 5 melanoma cell lines A375. The expression levels of SK-MEL-5 and SK-MEL-28 in SKMEL-1 and SK-MEL-2 were lower than those in normal human melanoma cell line PIG1. The normal cell lines were 0.18 鹵0.03, 0.25 鹵0.05, 0.37 鹵0.03, respectively. 0. 39 鹵0. 04) and 0. 45 鹵0. 03) times (P 0. 05). The O-D values of the miR-194 analogue group vs the negative control group were 0.18 鹵0.02 鹵0.02 vs 0.19 鹵0.03 respectively (P 0.05). 0. 29 鹵0. 02? VSD 0.27 鹵0. 03? P0. 05??? P0. 42 鹵0. 08? VSD 0.45 鹵0. 07? P0. 05). 0.63 鹵0.09 VSD 1.17 鹵0.12 (P0.05). 1. 05 鹵0. 15 鹵0. 15 鹵0. 21 (P0.05) and 1. 87 鹵0. 23 VSD 3. 18 鹵0. 27 (P0.05) (P < 0. 05, P 0. 05, P 0. 05, P 0. 05, P 0. 05). The apoptotic rates in the miR-194 analogue group and the negative control group were 24.2% and 9.3 respectively (P 0.05). The expression of Cyclin D1 and Cleaved Caspase-3 protein in the miR-194 analog group was 0.36 鹵0.04) and (. Conclusion the expression of miR-194 is low in melanoma cells. The up-regulated expression of miR-194 could promote the apoptosis of melanoma cells and inhibit the proliferation of melanoma cells. The mechanism may be down-regulation of Cyclin D1 protein and up-regulation of Cleaved Caspase-3 protein expression.
【作者單位】： 華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬武漢中心醫(yī)院皮膚科;湖北省武漢市第一醫(yī)院腫瘤科;
【分類號】：R739.5
【正文快照】： 惡性黑色素瘤是一類惡性程度較高的皮膚腫瘤[1-2],常見于皮膚,約占皮膚腫瘤的10%,死亡率可接近80%[3-4],其發(fā)病率在全球呈不斷上升趨勢[3-4],有家族聚集傾向[3-4]。本病早期癥狀不典型,我國每年新發(fā)病例持續(xù)增長約2萬例[2],本病易于早期轉(zhuǎn)移,預后多較差,5年生存率僅約15%[2]。

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本文編號：1485508