本文關(guān)鍵詞： 孢子絲菌屬 巨噬細(xì)胞 吞噬作用 活性氧 腫瘤壞死因子α 白細(xì)胞介素6 p38絲裂原活化蛋白激酶類 IκB蛋白質(zhì)類 核轉(zhuǎn)錄因子kappaB 脾酪氨酸激酶 C型凝集素-1受體　出處：《北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院》2017年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一章申克孢子絲菌酵母相誘發(fā)人THP-1巨噬細(xì)胞吞噬作用及釋放活性氧的初步研究目的初步探索人THP-1巨噬細(xì)胞對(duì)申克孢子絲菌酵母相的吞噬效應(yīng)及活性氧(reactive oxygen species,ROS)釋放。方法人 THP-1 細(xì)胞經(jīng)佛波酯(Propylene glycol monomethyl ether acetate,PMA)誘導(dǎo)分化形成巨噬細(xì)胞,與申克孢子絲菌酵母相共培養(yǎng),熒光顯微鏡下觀察THP-1巨噬細(xì)胞對(duì)申克孢子絲菌酵母相的吞噬現(xiàn)象,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)吞噬效應(yīng)及ROS釋放水平。結(jié)果人THP-1細(xì)胞經(jīng)PMA誘導(dǎo)分化為成熟的巨噬細(xì)胞,附著于培養(yǎng)瓶,細(xì)胞形態(tài)呈多形性。與申克孢子絲菌酵母相共培養(yǎng)后THP-1巨噬細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)申克孢子絲菌成分,隨著共培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),THP-1巨噬細(xì)胞吞噬率逐漸升高,細(xì)胞內(nèi)ROS表達(dá)水平也明顯升高。結(jié)論人THP-1巨噬細(xì)胞能夠吞噬申克孢子絲菌酵母相,并增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)ROS表達(dá)。第二章申克孢子絲菌酵母相誘導(dǎo)人THP-1巨噬細(xì)胞產(chǎn)生前炎癥因子的初步研究目的探討申克孢子絲菌酵母相對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、白細(xì)胞介素 6(Interleukin-6,IL-6)等前炎癥因子分泌的影響。方法實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析申克孢子絲菌酵母相刺激THP-1巨噬細(xì)胞后3、6 h的TNF-α及IL-6 mRNA表達(dá)水平變化,刺激后24 h采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)TNF-α、IL-6分泌量。凝膠多糖(Curdlan)為陽(yáng)性刺激物。結(jié)果共培養(yǎng)后3、6 h,申克孢子絲菌組、凝膠多糖組、空白對(duì)照組間TNF-α、IL-6 mRNA表達(dá)水平差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001)。申克孢子絲菌酵母相刺激THP-1巨噬細(xì)胞后3、6 h,差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001),TNF-α、IL-6 mRNA水平均隨著申克孢子絲菌酵母相刺激時(shí)間延長(zhǎng)而升高。申克孢子絲菌酵母相刺激THP-1巨噬細(xì)胞后24 h,TNF-α蛋白水平為(4610.419 ± 121.501 pg/mL),顯著高于空白對(duì)照組(186.964 ± 98.073 pg/mL),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001);IL-6蛋白水平為(59.96± 18.16 pg/L),較空白對(duì)照組(5.50±2.30pg/L)明顯升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.004)。結(jié)論THP-1巨噬細(xì)胞與申克孢子絲菌酵母相作用后促進(jìn)TNF-α、IL-6前炎癥因子分泌,參與抗申克孢子絲菌感染的固有免疫反應(yīng)。第三章申克孢子絲菌酵母相活化人THP-1巨噬細(xì)胞Dectin-1受體及其下游信號(hào)通路的初步研究目的研究申克孢子絲菌酵母相對(duì)人THP-1巨噬細(xì)胞表面Dectin-1受體表達(dá)水平及Dectin-1受體下游脾酪氨酸激酶(Syk)、核轉(zhuǎn)錄因子kappaB(NF-κB)、p38絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號(hào)通路激活的影響。方法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)THP-1巨噬細(xì)胞與申克孢子絲菌酵母相作用后0、3、6、12和24 h胞膜表面Dectin-1受體的表達(dá)水平。Western印跡法分析申克孢子絲菌酵母相作用于THP-1巨噬細(xì)胞0、15、30、60、90、120 min后Syk、p38MAPK、IκBα磷酸化水平的變化,免疫熒光法觀察NF-κB-p65核轉(zhuǎn)位。結(jié)果申克孢子絲菌酵母相作用于THP-1巨噬細(xì)胞后3h,胞膜表面的Dectin-1受體表達(dá)量達(dá)最高峰,6、12和24 h組其表達(dá)量仍維持在較高水平。申克孢子絲菌酵母相作用于THP-1巨噬細(xì)胞后0、15、30、60、90、120 min,磷酸化Syk、磷酸化p38 MAPK、磷酸化IκBα蛋白水平明顯升高,IκBα蛋白水平相應(yīng)降低,為時(shí)間依賴性;Syk、p38MAPK蛋白水平無(wú)明顯變化。申克孢子絲菌酵母相刺激THP-1巨噬細(xì)胞16 h后,細(xì)胞核內(nèi)NF-κB-p65較空白組熒光強(qiáng)度增強(qiáng)。結(jié)論申克孢子絲菌酵母相能誘導(dǎo)人THP-1巨噬細(xì)胞上調(diào)胞膜Dectin-1受體表達(dá)量并激活Dectin-1下游Syk、NF-κB、p38 MAPK信號(hào)通路。第四章申克孢子絲菌酵母相誘導(dǎo)人THP-1巨噬細(xì)胞Dectin-1介導(dǎo)固有免疫應(yīng)答的機(jī)制研究目的前期研究發(fā)現(xiàn),申克孢子絲菌酵母相感染后,THP-1巨噬細(xì)胞能夠活化Dectin-1受體及其下游信號(hào)通路,通過(guò)誘導(dǎo)吞噬、ROS釋放及前炎癥因子分泌,引發(fā)抗申克孢子絲菌感染的固有免疫反應(yīng)。本章節(jié)進(jìn)一步探討Dectin-1受體及其信號(hào)通路是否參與調(diào)節(jié)THP-1巨噬細(xì)胞抗申克孢子絲菌感染的固有免疫反應(yīng)。方法首先采用小干擾RNA(siRNA)技術(shù),建立穩(wěn)定Dectin-1受體低表達(dá)的THP-1巨噬細(xì)胞模型,與申克孢子絲菌酵母相共培養(yǎng),檢測(cè)Dectin-1受體低表達(dá)的THP-1巨噬細(xì)胞吞噬、ROS釋放水平及前炎癥因子TNF-α、IL-6mRNA表達(dá)水平的變化。同時(shí)設(shè)置白皮杉醇(Piceatannol,Pic)(Syk抑制劑)抑制組,檢測(cè)100nmol/LPic預(yù)處理THP-1巨噬細(xì)胞2h后Syk、IκBα、p38MAPK的磷酸化水平及吞噬能力、ROS釋放水平及前炎癥因子TNF-α、IL-6mRNA表達(dá)水平的變化;另設(shè)置地塞米松(p38 MAPK和NF-κB抑制劑)抑制組,檢測(cè)100nmol/L地塞米松預(yù)處理THP-1巨噬細(xì)胞30 min后p38 MAPK、IκBα磷酸化水平及吞噬能力、ROS釋放水平及前炎癥因子TNF-α、IL-6 mRNA表達(dá)水平的變化。結(jié)果Dectin-1受體低表達(dá)的THP-1巨噬細(xì)胞與申克孢子絲菌酵母相共培養(yǎng),其吞噬細(xì)胞比率、ROS釋放水平及前炎癥因子TNF-α、IL-6 mRNA的表達(dá)水平均較前明顯降低;100 nmol/L Pic預(yù)處理THP-1巨噬細(xì)胞后與申克孢子絲菌酵母相共培養(yǎng),研究發(fā)現(xiàn),Pic預(yù)處理能夠抑制申克孢子絲菌酵母相誘導(dǎo)的Syk、IκBα蛋白磷酸化水平,減弱THP-1巨噬細(xì)胞內(nèi)ROS釋放水平及前炎癥因子TNF-α、IL-6mRNA表達(dá)水平,但對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞吞噬能力沒(méi)有影響;100 nmol/L地塞米松預(yù)處理THP-1巨噬細(xì)胞后,與申克孢子絲菌酵母相共培養(yǎng),研究發(fā)現(xiàn),地塞米松預(yù)處理能夠降低申克孢子絲菌酵母相誘導(dǎo)的IκBα、p38 MAPK蛋白磷酸化水平,減弱前炎癥因子TNF-α、IL-6 mRNA表達(dá)水平,但對(duì)THP-1巨噬細(xì)胞吞噬、ROS釋放能力沒(méi)有影響。結(jié)論Dectin-1受體參與調(diào)控THP-1巨噬細(xì)胞吞噬、ROS釋放能力及TNF-α、IL-6等前炎癥因子分泌;Syk活化為Dectin-1受體介導(dǎo)的THP-1巨噬細(xì)胞內(nèi)ROS產(chǎn)生及前炎癥因子TNF-α、IL-6分泌過(guò)程所必需,對(duì)Dectin-1受體介導(dǎo)的吞噬過(guò)程無(wú)影響;Dectin-1/Syk下游NF-κB及p38 MAPK信號(hào)通路參與調(diào)控前炎癥因子TNF-α、IL-6分泌過(guò)程。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R756

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 張靜;黃懷球;薛汝增;張曉輝;馮佩英;李美榮;;溫度和培養(yǎng)基在申克孢子絲菌酵母相轉(zhuǎn)化中的作用研究[J];中山大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)科學(xué)版);2010年04期

2 鐘華敏;謝永強(qiáng);鄧秋連;區(qū)小冰;黃勇;;兒童馬爾尼菲青霉菌感染的鑒定及該菌酵母相的體外藥敏分析[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2008年09期

3 蔡晴;李珊山;宋洋;沈永年;呂桂霞;陳偉;劉維達(dá);;微量稀釋法檢測(cè)申克孢子絲菌酵母相體外抗真菌藥物敏感性[J];中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志;2011年05期

4 蔡晴;宋洋;沈永年;呂桂霞;陳偉;李珊山;劉維達(dá);;申克孢子絲菌菌絲相至酵母相轉(zhuǎn)化的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)真菌學(xué)雜志;2010年05期

5 劉棟華;劉曉軍;譚升順;;SELDI技術(shù)對(duì)馬爾尼菲青霉菌酵母相和霉菌相蛋白質(zhì)組表達(dá)差異的分析[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2007年01期

6 李岷,陳l，

本文編號(hào)：1470815