本文關(guān)鍵詞：神經(jīng)梅毒的診斷及其免疫炎癥性損傷機制的研究

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【摘要】：研究背景： 梅毒是由梅毒螺旋體（Treponema pallidum）感染引起的一種慢性、播散性性傳播疾病。梅毒螺旋體通過破損的皮膚或粘膜入侵機體，可侵犯機體所有的組織和器官，其中以神經(jīng)系統(tǒng)的損傷最常見，危害最大。在經(jīng)歷了20余年的梅毒流行后，近年來，神經(jīng)梅毒的報道在我國日益增多，嚴重影響患者的生活質(zhì)量，威脅人類健康。 至今，神經(jīng)梅毒是世界性難題。首先，診斷神經(jīng)梅毒沒有敏感性和特異性均令人滿意的標準試劑，即使是現(xiàn)有有限的神經(jīng)梅毒診斷試劑中，試劑的敏感性、特異性、可得性和操作的便捷性都面臨挑戰(zhàn)；其次，盡管有研究顯示機體的免疫狀態(tài)在神經(jīng)梅毒的發(fā)病中起重要作用，但神經(jīng)梅毒的發(fā)病機制目前仍不清楚。 目前，腦脊液性病實驗室試驗（venerealdisease research laboratorytest，VDRL）是國際上公認的診斷神經(jīng)梅毒的金標準，該方法的特異性較高，但其敏感性較低，臨床上VDRL陰性不能排除神經(jīng)梅毒，并且VDRL試劑在中國沒有商品化的試劑盒，保存不易，操作繁瑣，價格昂貴因而不能被廣泛推廣。用于血清學篩選梅毒的非梅毒螺旋體抗體試驗快速血漿反應素試驗（rapid plasma regain，RPR）和甲苯胺紅不加熱血清反應素試驗（toluidine red unheated serum test，TRUST），在我國其商品化試劑易得，保存方便，操作簡單，價格便宜，但在用于神經(jīng)梅毒的診斷中其敏感性和特異性均遭受挑戰(zhàn)，但這類研究一般均基于小樣本的檢測，因而其在神經(jīng)梅毒診斷中的價值尚存爭議。 長期以來機體的細胞免疫在清除中樞神經(jīng)系統(tǒng)梅毒螺旋體感染中的作用一直是神經(jīng)梅毒發(fā)病機制的研究熱點。而近年來免疫炎癥性損傷在感染性疾病中的作用被廣泛關(guān)注。梅毒螺旋體侵入中樞神經(jīng)系統(tǒng)后，在局部誘導免疫應答。有研究報道，感染局部的輔助性T細胞1（Th1）免疫反應有利于梅毒螺旋體的清除。但是機體的免疫應答是一把雙刃劍，一方面有助于病原體的清除，，而另一方面在疾病的病理損傷中也發(fā)揮重要的作用。因而感染局部的免疫狀態(tài)對疾病的轉(zhuǎn)歸具有重要的作用。對疾病免疫反應狀態(tài)的研究對闡明疾病的發(fā)病機制具有重要的意義。輔助性T細胞17（Th17）是近年來發(fā)現(xiàn)的一類新的Th細胞亞群。研究顯示，在病原體的早期感染中Th17有助于機體對病原體的清除，但在許多慢性感染性疾病中Th17參與了局部的病理損傷，并與疾病的預后相關(guān)。因此提示Th17可能在感染性疾病中可能發(fā)揮重要的作用。但Th17是否參與了神經(jīng)梅毒的中樞系統(tǒng)的損傷目前尚無研究報道。 研究目的： 第一部分.比較分析腦脊液VDRL、RPR、TRUST在神經(jīng)梅毒診斷中的敏感性、特異性、陽性預測值和陰性預測值，探索RPR、TRUST在神經(jīng)梅毒診斷中的價值。 第二部分.分析研究各期梅毒患者、各類型神經(jīng)梅毒外周血及腦脊液標本中Th17或IL-17的表達水平。探討Th17細胞在神經(jīng)梅毒病程的進展和轉(zhuǎn)歸中的作用，研究其在神經(jīng)梅毒免疫炎癥性損傷中的可能機制。 研究方法： 第一部分.收集1132例梅毒病人的腦脊液和血清標本，分別進行RPR、TRUST和VDRL實驗，同時還進行了腦脊液RPR抗原稀釋實驗（CSF-RPR-V），該試驗是RPR抗原用10%生理鹽水1：2稀釋，該抗原制備是按照VDRL用于腦脊液檢測的抗原稀釋方法進行稀釋后制備而成，抗原制備后按照血清RPR檢測方法進行定性和定量試驗。RPR和TRUST實驗是按照血清的操作步驟進行操作，VDRL是按照腦脊液的操作步驟進行操作，比較它們在神經(jīng)梅毒診斷中的敏感性、特異性、陽性預測值和陰性預測值。 第二部分 1.收集69例非神經(jīng)梅毒患者、103例神經(jīng)梅毒患者和70例健康人的外周血，分離單個核細胞，加入含佛波醇酯(PMA)、離子霉素(ionomycin)和莫能霉素（Monensin）的培養(yǎng)基培養(yǎng)4小時后進行胞內(nèi)染色，用流式細胞術(shù)檢測健康和各組病人外周血中IL-17陽性細胞和Th17的百分比； 2.收集上述69例非神經(jīng)梅毒患者、103例神經(jīng)梅毒患者和29例非梅毒感染無神經(jīng)系統(tǒng)損傷的外科手術(shù)者對照組的腦脊液，并對其中的44例神經(jīng)梅毒患者進行1年隨訪，收集其腦脊液標本。用ELISA法檢測這些病人和對照腦脊液中IL-17的水平。 研究結(jié)果： 第一部分： 1.210例神經(jīng)梅毒腦脊液樣本中，腦脊液VDRL試驗敏感性是81.4%、特異性是90.3%；腦脊液RPR試驗敏感性是76.2%、特異性是93.4%；腦脊液TRUST試驗的敏感性是76.2%、特異性是93.1%；腦脊液RPR-V試驗的敏感性是79.5%、特異性是92.7%； 2.四種檢測方法的敏感性、陽性預測值、陰性預測值一致（p0.05），腦脊液VDRL試驗特異性比RPR低（88.2%vs.93.4%, p0.05），腦脊液VDRL實驗特異性低于腦脊液TRUST實驗（88.2%vs.93.1%, p0.05），腦脊液VDRL和腦脊液RPR-V的特異性無明顯統(tǒng)計學差異。 3.腦脊液TRUST與RPR試驗相比較，兩種檢測方法一致有統(tǒng)計學意義并且一致性較好（κ=0.86，p0.01）。 第二部分：1.神經(jīng)梅毒組外周血Th17百分比比正常對照組高（1.94%±1.09%vs1.64%±0.53%p=0.034）和總IL-17+細胞百分比比正常對照組高（1.15%±0.59%vs0.84%±0.27%,p=0.002），而非神經(jīng)梅毒組外周血Th17百分比和總IL-17+細胞百分比與神經(jīng)梅毒組間無差異（p0.05）。同時在神經(jīng)梅毒組中有癥狀神經(jīng)梅毒外周血總Th17和IL-17+細胞百分比比無癥狀神經(jīng)梅毒高分別為（2.14±1.16vs1.65±0.91,p=0.027）和（1.29±0.67vs0.95±0.39, p=0.013）。2.神經(jīng)梅毒組腦脊液中IL-17的檢出率為55.33%， IL-17的水平為6.81±10.79pg/ml；在非神經(jīng)梅毒組腦脊液中IL-17的檢出率為11.59%，IL-17的水平為0.18±0.54pg/ml；健康對照組腦脊液中未檢出IL-17。在有癥狀神經(jīng)梅毒和無癥狀神經(jīng)梅毒患者腦脊液中IL-17的檢出率分別為47.5%和61.9%，并且有癥狀神經(jīng)梅毒組腦脊液中IL-17水平較高（8.97±11.98pg/ml vs3.42±7.56pg/ml, p=0.009），其中以麻痹性癡呆患者腦脊液中IL-17水平最高（10.92±11.29pg/ml）。 4.腦脊液IL-17的水平與腦脊液中總蛋白濃度（r=0.249, p=0.012）和VDRL滴度（r=0.342, p=0.001）呈正相關(guān)。 5.在14例腦脊液白細胞增高患者腦脊液中CD4+T占58.4±5.2%，Th17（CD3+CD4~+IL-17~+）細胞百分比為3.45±1.96%。其中IL-17來源于CD4+T占88±4.8%。 6.根據(jù)44例隨訪1年神經(jīng)梅毒患者腦脊液中IL-17的水平分為IL-17陽性和IL-17陰性組，與26例IL-17陽性患者相比，18例IL-17陰性腦脊液VDRL的轉(zhuǎn)陰率較高（p0.05）。 結(jié)論： 第一部分腦脊液RPR、TRUST、RPR-V、VDRL實驗敏感性無差異，陰性預測值和陽性預測值相一致，而腦脊液RPR、RPR-V、TRUST試驗特異性比CSF-VDRL實驗高，這一結(jié)果提示腦脊液TRUST或RPR在神經(jīng)梅毒的診斷具有一定的應用價值，適合在我國和一些資源緊缺及設(shè)備落后的地方作為診斷神經(jīng)梅毒的替代指標。 第二部分 1.在神經(jīng)梅毒患者外周血和腦脊液中TH17或IL-17的水平均升高，并且有癥狀神經(jīng)梅毒患者外周血和腦脊液中IL-17的水平均高于無癥狀神經(jīng)梅毒患者。 2.神經(jīng)梅毒患者腦脊液中IL-17的水平與腦脊液中蛋白濃度和VDRL的滴度呈正相關(guān)，提示在神經(jīng)梅毒患者腦脊液中IL-17與中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷程度呈正相關(guān)。 3.神經(jīng)梅毒患者腦脊液中IL-17的水平與VDRL的轉(zhuǎn)陰率呈負相關(guān)，腦脊液中IL-17陰性組VDRL的轉(zhuǎn)陰率高，提示腦脊液中IL-17可能與神經(jīng)梅毒患者的預后有關(guān)。 4.神經(jīng)梅毒患者腦脊液中IL-17主要來源于CD4+T細胞。 5.綜上所述，提示Th17可能參與了神經(jīng)梅毒中樞神經(jīng)系統(tǒng)的局部免疫損傷，但其在神經(jīng)梅毒中的具體作用機制還有待進一步研究。
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R759.13

【參考文獻】

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1 周平玉,熊思東,顧志英,閻春林,徐金華,陸�？�,廖康煌;白介素-4、12和干擾素-γ在早期顯性梅毒轉(zhuǎn)歸中的動態(tài)變化[J];臨床皮膚科雜志;2005年10期

2 周平玉;;神經(jīng)梅毒[J];臨床皮膚科雜志;2008年03期

3 周平玉,熊思東,閻春林,徐金華,廖康煌;梅毒患者皮損中Th1/Th2細胞因子表達與RPR試驗陰轉(zhuǎn)的關(guān)系[J];中華皮膚科雜志;2004年12期

本文編號：1304575