本文關(guān)鍵詞：馬爾尼菲青霉酵母細(xì)胞黑素的分離純化及理化性質(zhì)的分析

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【摘要】：目的提取、純化馬爾尼菲青霉(PM)酵母細(xì)胞的黑素并研究其理化性質(zhì),為PM的發(fā)病機(jī)制及其毒力作用的研究提供理論依據(jù)。 方法在基礎(chǔ)液體培養(yǎng)基中加入2.0mM左旋多巴(L-DOPA)37℃振蕩培養(yǎng)PM酵母細(xì)胞10-14天,通過溶壁酶、變性劑和濃鹽酸等處理PM酵母細(xì)胞以分離提取黑素粗品,再用黑素“堿溶酸沉”的原理多次純化得到黑素的純品,然后采用化學(xué)分析、紫外光譜、紅外光譜以及電子順磁共振(EPR)波普研究了PM黑素的理化性質(zhì)。同時(shí)使用黑素的特異性抑制劑(曲酸：特異性地抑制多巴黑素的合成；三環(huán)唑：特異性地抑制DHN黑素的合成)觀察在BHI中培養(yǎng)的PM酵母細(xì)胞的黑素抑制情況,包括觀察其菌落的顏色及培養(yǎng)基的顏色變化。 結(jié)果PM黑素與合成多巴黑素的理化性質(zhì)很相似,均為黑色顆粒,均溶解于堿,耐酸,不溶于水和大多數(shù)有機(jī)溶劑,在PH≤3時(shí)出現(xiàn)沉淀,能被氧化劑H2O2漂白；紫外-可見光譜分析顯示其在205nm處有最大吸收峰,其吸收值隨著波長的增加而逐漸減��；紅外光譜分析表明PM黑素具有經(jīng)典的黑素紅外吸收特征,即在3μm附近和6μm附近各有一個(gè)吸收峰；EPR提示PM黑素含有穩(wěn)定的自由基。100μg/mL的曲酸和三環(huán)唑均能使在BHI中生長的PM菌落表面變淡,分泌到培養(yǎng)基中的黑素減少。 結(jié)論P(yáng)M酵母細(xì)胞能利用外源性左旋多巴合成多巴黑素。曲酸和三環(huán)唑都能抑制BHI中PM酵母細(xì)胞黑素的合成,說明PM在BHI中既能合成多巴黑素,又能合成DHN黑素。
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R756

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1265725