本文關(guān)鍵詞：銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀態(tài)的研究

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【摘要】：目的：銀屑病是一種常見的慢性炎癥性皮膚病,其病因及發(fā)病機(jī)制尚未明確。研究表明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(endoplasmic reticulum stress ERS)調(diào)節(jié)炎癥介質(zhì)產(chǎn)生,在慢性炎癥中發(fā)揮重要作用。但就內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在銀屑病發(fā)病機(jī)制中的作用尚未受到重視。因此,本課題以銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞(keratinocytes, KCs)為研究對象,研究銀屑病KCs中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)、ERS標(biāo)志蛋白及腫瘤壞死因子(TNF)-a的變化,初步明確銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀態(tài)及其與炎癥介質(zhì)TNF-a之間的關(guān)系,為進(jìn)一步闡明角質(zhì)形成細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在銀屑病發(fā)病機(jī)制中的作用提供理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法：征得本院倫理委員會同意。以進(jìn)行期尋常型斑塊狀銀屑病患者皮損部位角質(zhì)形成細(xì)胞為研究對象；應(yīng)用透射電子顯微鏡觀察標(biāo)本角質(zhì)形成細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)微結(jié)構(gòu),分析生理病理狀態(tài)下角質(zhì)形成細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形態(tài)及結(jié)構(gòu)的的改變；采用免疫印跡(Western-blot)技術(shù)檢測標(biāo)本KCs中ERS標(biāo)志蛋白葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78 (glucose regulated protein78, GRP78)和炎癥因子TNF-a,統(tǒng)計(jì)學(xué)分析GRP78與TNF-a表達(dá)變化,及其之間的相關(guān)性；用免疫組織化學(xué)法定位檢測GRP78和TNF-a指標(biāo)在標(biāo)本表皮的分布。結(jié)果：(1)銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)數(shù)量增多,體積增大。透射電子顯微鏡觀察的結(jié)果顯示：對照組角質(zhì)形成細(xì)胞排列整齊,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)數(shù)量較少,主要集中于細(xì)胞核周圍,結(jié)構(gòu)正常；而銀屑病皮損角質(zhì)形成細(xì)胞排列紊亂,代謝活躍,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)數(shù)量增多,結(jié)構(gòu)膨脹、擴(kuò)張,網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)直徑相對較粗。(2)銀屑病角角質(zhì)形成細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志Bip/GRP78表達(dá)增高；蛋白質(zhì)免疫印跡(Western-blot)結(jié)果顯示：與對照組相比,銀屑病患者KCs中Bip/GRP78蛋白含量顯著高增高,差異具有統(tǒng)計(jì)意義(0.79±0.31vs0.42±0.24, P＜0.001);免疫組化的結(jié)果顯示對照組Bip/GRP78少量、散在分布于表皮,且主要局限于表皮基底細(xì)胞層；而在銀屑病標(biāo)本中,Bip/GRP78的表達(dá)顯著增強(qiáng),且彌漫分布于表皮全層,表達(dá)強(qiáng)度明顯高于對照組,且在真皮上乳頭的血管周圍亦有表達(dá)。(3)銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞中TNF-a表達(dá)增高；蛋白質(zhì)免疫印跡(Western-blot)結(jié)果顯示：與對照組相比,銀屑病患者表皮KCs中TNF-a表達(dá)水平顯著增高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(0.49±0.15vs0.17±0.10,P0.01)。免疫組化結(jié)果與Bip/GRP78分布類似,對照組TNF-α少量、散在分布于表皮,且主要分布于表皮基底細(xì)胞層；在銀屑病皮損中,TNF-α的表達(dá)顯著增強(qiáng),且彌漫分布于表皮全層,表達(dá)強(qiáng)度明顯高于對照組,且在真皮上乳頭的血管周圍亦有表達(dá)。(4)銀屑病皮損部位內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志Bip/GRP78與TNF-α呈正相關(guān)：采用Pearson相關(guān)性分析銀屑病皮損KCs中Bip/GRP78與TNF-α蛋白含量呈正相關(guān)(r=0.59,P0.01)。結(jié)論：銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)微結(jié)構(gòu)發(fā)生改變,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激標(biāo)志蛋白Bip/GRP78在銀屑病皮損高表達(dá),提示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可能參與了銀屑病的發(fā)病機(jī)制；Bip/GRP78與TNF-α呈正相關(guān),大量數(shù)據(jù)顯示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號通路可誘導(dǎo)TNF-α分泌,因此我們推測,銀屑病皮損表皮角質(zhì)形成細(xì)胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可能調(diào)節(jié)TNF-α的生成。這是我們首次提出并證明內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激在銀屑病發(fā)病機(jī)制中扮演重要角色,為揭示銀屑病發(fā)病機(jī)制和合理治療的機(jī)理提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R758.63

【參考文獻(xiàn)】

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1 林麗,唐朝樞,袁文俊;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激[J];生理科學(xué)進(jìn)展;2003年04期

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本文編號：1259573