本文關(guān)鍵詞：TCF4對人皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞株生物學(xué)行為的影響

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【摘要】：一．研究背景和目的 皮膚鱗狀細(xì)胞癌(squamous cell carcinoma, SCC)是一種皮膚惡性腫瘤，起源于表皮和皮膚附屬器角質(zhì)形成細(xì)胞，目前病因仍不清楚。Wnt/β-catenin信號通路，即經(jīng)典的Wnt信號通路，在生物的結(jié)構(gòu)形成、細(xì)胞分化、形態(tài)發(fā)生和腫瘤進展等方面起著重要作用。在發(fā)生腫瘤的機體中，β-聯(lián)蛋白(β-catenin)的代謝平衡紊亂，從而導(dǎo)致β-catenin在胞漿水平上升，進而進入細(xì)胞核，與核內(nèi)T細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子/淋巴樣增強因子(T cell factor/lymphoid enhancer factor，TCF/LEF)結(jié)合，激活TCF/LEF下游基因轉(zhuǎn)錄，，導(dǎo)致調(diào)控腫瘤生長、分化、侵潤的β-catenin/TCF信號通路的靶基因的調(diào)節(jié)改變，致使腫瘤發(fā)生的可能性增加。TCF/LEF屬于高遷移率組蛋白(High Mobility Group，HMG)，具有高度保守的結(jié)構(gòu)，是核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子，其成員包括TCF-1、LEF1、TCF-3和TCF-4。其中，TCF-4是近年研究證實的與腫瘤關(guān)系最為密切的轉(zhuǎn)錄因子。 近年研究報道，TCF4在肺癌、腎癌、結(jié)腸癌、胃癌、肝癌等腫瘤發(fā)生過程中表達明顯增強，而在這些腫瘤腫瘤發(fā)生過程中共同的早期事件是異常升高的TCF4刺激下游靶基因表達。研究報道，作用于β-catenin/TCF的抑制劑，可以有效的控制腫瘤的形成、侵襲及轉(zhuǎn)移，目前在這一領(lǐng)域的研究具有非常廣闊的前景和深遠(yuǎn)的意義。本研究以皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株A431為研究對象，研究TCF4對A431細(xì)胞株生物學(xué)行為的影響，探索β-catenin/TCF通路在皮膚鱗狀細(xì)胞癌中的作用，闡明皮膚鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)病機制，為尋找其新的治療靶點，改善患者的預(yù)后提供理論依據(jù)。 二、實驗方法和結(jié)果 1、設(shè)置實驗分組：未轉(zhuǎn)染組、轉(zhuǎn)染control siRNA組和轉(zhuǎn)染TCF4siRNA組。 2、采用siRNA表達載體技術(shù)，轉(zhuǎn)染control siRNA及si-TCF4RNA至A431細(xì)胞株，提取總RNA，供后續(xù)實驗用。 3、采用RT-PCR方法檢測轉(zhuǎn)染si-TCF4RNA后，A431細(xì)胞株TCF4mRNA表達的變化。 4、提取A431細(xì)胞株蛋白，免疫印跡法(Western blot)檢測轉(zhuǎn)染si-TCF4RNA后A431細(xì)胞株TCF4蛋白的表達變化。 5、Transwell方法檢測轉(zhuǎn)染si-TCF4RNA后，A431細(xì)胞株細(xì)胞的遷移和侵襲能力變化。 6、CCK-8方法檢測轉(zhuǎn)染si-TCF4RNA后，A431細(xì)胞株的增殖力變化。 7、流式細(xì)胞術(shù)檢測轉(zhuǎn)染si-TCF4RNA后，A431細(xì)胞株的細(xì)胞周期變化。 8、結(jié)果證實，與未轉(zhuǎn)染組和轉(zhuǎn)染control siRNA組相比，轉(zhuǎn)染TCF4siRNA有效地下調(diào)了A43l細(xì)胞株的TCF4mRNA及蛋白的表達水平。TCF4受到抑制后，431細(xì)胞的遷移能力及侵襲能力明顯下降(p＜0.05)，細(xì)胞的生長增殖也受到抑制(p＜0.05)。流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期發(fā)現(xiàn)，在皮膚鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞株中，TCF4siRNA可阻滯細(xì)胞于G2/M期。 三、結(jié)論 1、si-TCF4可抑制皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞TCF4mRNA和蛋白的表達。 2、TCF4可促進皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞株的增殖、遷移和侵襲。 3、抑制TCF4后，可抑制皮膚鱗狀細(xì)胞癌A431細(xì)胞株的生長。 通過以上實驗，為進一步了解Wnt/β-catenin信號通路在皮膚鱗狀細(xì)胞癌中的調(diào)控機制奠定了基礎(chǔ)，實驗結(jié)果提示TCF4可作為皮膚鱗狀細(xì)胞癌潛在的基因治療靶點。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R739.5

【參考文獻】

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1 張鮮英;劉毅;肖斌;張緒生;陳黎明;;皮膚鱗狀細(xì)胞癌的外科治療[J];臨床腫瘤學(xué)雜志;2012年12期

本文編號：1257430