本文關(guān)鍵詞：人表皮細胞對胰酶耐受及黑素小體轉(zhuǎn)運的相關(guān)研究

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【摘要】：目的:觀察人表皮細胞對胰酶消化的耐受能力,探索分離和純化表皮細胞的新方法,探討胰酶耐受細胞的干性表達。并在原代細胞培養(yǎng)的基礎(chǔ)上,探索角質(zhì)形成細胞(Keratinocyte,KC)對黑素小體(Melanosome,MS)的吞噬,同時驗證煙酰胺對吞噬的抑制作用。方法:(1)中性蛋白酶及胰酶消化獲取表皮細胞,用0.25%的胰酶懸浮表皮細胞,以3.0×105/ml的細胞密度種植于12孔板,每間隔半小時或1小時終止胰酶1孔,其中胰酶作用時間最長達46小時,同樣地胰酶處理培養(yǎng)過的表皮細胞,記錄不同細胞貼壁時間、生長狀態(tài),并在接種后第7天,對貼壁細胞進行Nestin、Sox10抗體免疫細胞化學(xué)染色。(2)從人毛發(fā)中提取的黑素小體經(jīng)透射電鏡檢測后,加到人原代角質(zhì)形成細胞中,觀察黑素小體是否被吞噬,用HMB-45抗體免疫細胞化學(xué)染色檢測。同時利用Millicell建立了黑素細胞(Melanocyte,MC)和角質(zhì)形成細胞共培養(yǎng)模型,用HMB-45熒光抗體標(biāo)記角質(zhì)形成細胞吞噬的黑素小體,并分別加煙酰胺進行干預(yù)。結(jié)果:(1)隨著胰酶作用時間的延長,貼壁細胞數(shù)目遞減,細胞貼壁所用時間也延長。所有孔中最早出現(xiàn)的貼壁細胞為樹突狀細胞,這些細胞開始生長緩慢,大約4天后生長迅速,10天后部分孔出現(xiàn)魚群樣細胞團。培養(yǎng)過的表皮細胞胰酶消化后結(jié)果和原代細胞類似,但不出現(xiàn)細胞團。部分孔經(jīng)Nestin、SOX10抗體的免疫細胞化學(xué)染色結(jié)果均為陽性,其中以Nestin抗體較明顯。(2)角質(zhì)形成細胞能吞噬從人毛發(fā)中提取的黑素小體,在共培養(yǎng)模型中,黑素細胞產(chǎn)生的黑素小體可以通過孔徑為8微米的孔膜,并被其下的角質(zhì)形成細胞所吞噬,兩者均驗證了煙酰胺抑制吞噬作用。結(jié)論:(1)人表皮細胞對胰酶消化的耐受能達46小時,中和后,黑素細胞貼壁早于角質(zhì)形成細胞,貼壁后大多數(shù)細胞增殖力強,干細胞表面標(biāo)記顯示陽性。(2)角質(zhì)形成細胞可以吞噬從毛發(fā)中提取的黑素小體,Millicell共培養(yǎng)模型可以用于黑素小體轉(zhuǎn)運的研究中,并為黑素小體轉(zhuǎn)運的研究提供新方法,從而為美白制劑的篩選提供新思路。
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R751

【參考文獻】

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1 宋東穎;王毅;孫嵐;張英鴿;;腫瘤干細胞理論及腫瘤干細胞分離和鑒定研究進展[J];中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志;2012年05期

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本文編號：1252681