本文關(guān)鍵詞：ABCC11基因SNP在腋臭發(fā)病中作用機(jī)制的研究及臨床應(yīng)用的探索

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【摘要】：腋臭,俗稱狐臭,是一種常見疾病,臨床表現(xiàn)為雙側(cè)腋部難聞的氣味,患者多有家族史。雖其本身不對機(jī)體健康造成直接損害,但其散發(fā)出的難聞氣味,給患者帶來很大自卑感及心理負(fù)擔(dān),影響人際交往及日常生活。因此,患者往往不斷尋求診治,且多要求徹底祛除。目前腋臭的治療方法種類繁多,可分為保守治療和手術(shù)治療。保守治療有效時(shí)間相對較短,一般難以達(dá)到徹底根治。手術(shù)治療仍是目前祛除腋臭最為徹底的方法。但是手術(shù)治療痛苦相對較大,還可能出現(xiàn)難以接受的并發(fā)癥。因此,尋求一種療效持久,痛苦少,并發(fā)癥少,為大家公認(rèn)的方法仍需要不斷的研究和嘗試。 但是,臨床上對腋臭的診斷和治療存在著以下瓶頸：首先,腋臭癥的確切發(fā)病機(jī)制尚不明確。一般認(rèn)為特殊異味的產(chǎn)生來自于腋窩部的頂泌汗腺。其分泌物質(zhì)經(jīng)皮膚表面的細(xì)菌作用,分解為多種不飽和脂肪酸,從而產(chǎn)生特殊的氣味。但是其具體分子機(jī)制及典型的常染色體顯性遺傳性未得到良好的解釋。因此,對腋臭遺傳基礎(chǔ)的進(jìn)一步研究有助于揭示其發(fā)病機(jī)制并為腋臭的治療提供新方向。其次,目前在臨床上,腋臭的診斷仍主要根據(jù)患者腋部特殊異味的主觀感覺判斷,仍缺乏客觀可靠的指標(biāo)。特別是對腋臭較輕以及術(shù)后異味殘留的患者,僅憑氣味判斷嚴(yán)重程度有時(shí)存在一定的爭議。再次,腋臭的嚴(yán)重程度及療效評價(jià)標(biāo)準(zhǔn)尚不統(tǒng)一,以至于各種治療方法難以進(jìn)行科學(xué)有效的比較研究。因此,腋臭發(fā)病機(jī)制的進(jìn)一步研究對尋找腋臭客觀的診斷及評價(jià)指標(biāo)、指導(dǎo)腋臭的治療及相關(guān)治療藥物的研發(fā)均具有重要的臨床意義和價(jià)值。 目的： 1.分析ABCC11基因單核苷酸多態(tài)性與腋臭發(fā)病的相關(guān)性,分析不同基因型與腋臭的嚴(yán)重程度的關(guān)系； 2.研究腋窩頂泌汗腺中ABCC11基因編碼蛋白在腋臭患者與正常人的表達(dá)差異,進(jìn)一步探討ABCC11單核苷酸多態(tài)性在腋臭發(fā)病中的作用機(jī)制。 3.人頂泌汗腺細(xì)胞體外模型的建立,培養(yǎng)并觀察腺細(xì)胞的生長特性,分析ABCC11基因不同基因型頂泌汗腺細(xì)胞的生長及增殖差異,為進(jìn)一步的研究打下基礎(chǔ)。 4.檢測不同基因型人頂泌汗腺中ABCC11/MRP8及ApoD蛋白表達(dá)及轉(zhuǎn)錄水平,分析二種蛋白的相關(guān)性,進(jìn)一步揭示腋臭的發(fā)病機(jī)制,也為尋找腋臭的臨床診斷及療效評價(jià)的客觀指標(biāo)提供新方向。 5.采用負(fù)壓剝離結(jié)合消痔靈灌注的新方法治療腋臭,隨訪觀察治療效果及并發(fā)癥,結(jié)合ABCC11/MRP8及ApoD蛋白表達(dá)水平的檢測評價(jià)手術(shù)效果,分析基因型、腋臭嚴(yán)重程度、療效及預(yù)后的關(guān)系。為腋臭的診斷評價(jià)指標(biāo)及腋臭的手術(shù)治療方法的改進(jìn)提供理論依據(jù)。 方法： 1.取正常成人及腋臭患者外周血液以提取DNA,應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-高分辨率溶解曲線(PCR-HRM)技術(shù),結(jié)合測序驗(yàn)證檢測ABCC11基因多態(tài)性位點(diǎn)rs17822931的基因型,分析不同等位基因在腋臭患者及正常人群中的分布情況,探討其與中國漢族人群腋臭發(fā)病的相關(guān)性。 2.建立人頂泌汗腺細(xì)胞體外模型,觀察不同基因型人頂泌汗腺細(xì)胞的生長特性并繪制生長曲線,分析不同基因型對人頂泌汗腺細(xì)胞增殖能力的影響。 3.隨機(jī)收取不同基因型的受試者腋窩全層皮膚標(biāo)本,采用組織切片觀察頂泌汗腺的形態(tài),采用免疫組織化學(xué)、realtime-PCR及western-blotting技術(shù)檢測不同基因型腋窩頂泌汗腺組織中ABCC11/MRP8及ApoD蛋白的表達(dá)和轉(zhuǎn)錄水平,采用SPSS13.00軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì),分析兩種蛋白水平之間的相關(guān)性及與腋臭程度的關(guān)系,分析二種蛋白表達(dá)水平在不同基因型組間是否存在差異,P0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4.收集于湘雅醫(yī)院整形美容外科門診行負(fù)壓剝離結(jié)合消痔靈灌注祛除腋臭患者的一般情況及相關(guān)臨床資料,隨訪觀察并記錄治療效果及并發(fā)癥,與其他報(bào)道的方法進(jìn)行對比分析,評價(jià)該治療方法的效果,為手術(shù)方法的進(jìn)一步改進(jìn)提供理論基礎(chǔ)；結(jié)合ABCC11/MRP8及ApoD蛋白表達(dá)水平的檢測分析評價(jià)手術(shù)效果,為尋找手術(shù)后療效評價(jià)的客觀參考指標(biāo)提供理論依據(jù)。 結(jié)果： 1.ABCC11基因多態(tài)性位點(diǎn)rs17822931存在三種基因型：G/G、A/G、A/A,在52個(gè)病例組中頻率分別為9.62%、88.46%、1.92%；在52例對照組均為AA型；98.08%的腋臭患者存在G型等位基因,說明該位點(diǎn)的G型等位基因是腋臭的發(fā)生的顯性遺傳因素。不同基因型之間腋臭的嚴(yán)重程度存在差異且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.0350.05)； 2.收集腋窩全層皮膚標(biāo)本58例,其中AA型的正常人8例,不同程度的腋臭患者50例(GG型5例,GA型45例)；免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示ABCC11及ApoD蛋白均特異性的在人腋窩頂泌汗腺細(xì)胞中表達(dá)。不同程度的腋臭患者腋窩皮膚中兩種蛋白的表達(dá)水平存在差異；ABCC11/MRP8蛋白表達(dá)陽性率的秩和檢驗(yàn)分析顯示GG型及GA型的腋臭患者腋窩頂泌汗腺中的ABCC11/MRP8陽性率明顯高于基因型為AA型的正常人；但GG型與GA型的ABCC11/MRP8陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3.光鏡下觀察腋窩皮膚組織切片樣本顯示：基因型為GG及GA型的腋臭患者的頂泌汗腺數(shù)量及處在分泌活躍期的頂泌汗腺比例均明顯高于基因型為AA型的正常人。GG型及GA型之間無顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 4.頂泌汗腺細(xì)胞培養(yǎng)觀察表明不同基因型的細(xì)胞具有共同特征：培養(yǎng)潛伏期為1-2天；3天后細(xì)胞增殖活躍,進(jìn)入對數(shù)增殖期,細(xì)胞呈‘鵝卵石’樣,體積較大、透明度好；對數(shù)增殖期持續(xù)約10-12天,直至第7天達(dá)峰值,第12天各基因型的人頂泌汗腺細(xì)胞增殖受到不同程度的抑制。通過繪制生長曲線并分析比較,顯示GG型及GA型人頂泌汗腺細(xì)胞在第6天、第9天,第12天的細(xì)胞數(shù)量明顯多于AA型,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 5.免疫組織化學(xué)、Western blotting及PCR檢測結(jié)果顯示腋臭患者腋窩頂泌汗腺中的ABCC11和ApoD表達(dá)及轉(zhuǎn)錄水平均明顯高于正常人,ABCC11的基因型與其mRNA及蛋白水平存在相關(guān)性。ABCC11與ApoD蛋白的水平相關(guān)性分析顯示二者呈正相關(guān)。 6.收集并隨訪從2009年3月至2013年3月于湘雅醫(yī)院整形美容外科門診行負(fù)壓剝離結(jié)合消痔靈灌注祛除腋臭的患者171名,其中重度63例,中度81例,輕度27例,隨訪6個(gè)月至26個(gè)月。隨訪顯示治愈316側(cè),占92.4%；有效26側(cè),約占7.6%,有效率100%；滿意度調(diào)查顯示,157例患者對手術(shù)效果表示非常滿意(91.8%),13例患者表示基本滿意(占7.6%),滿意度達(dá)99.4%。與已有各種腋臭治療手術(shù)方法比較,認(rèn)為該手術(shù)方法滿意度相對較高,并發(fā)癥發(fā)生率相對較低。 7.手術(shù)前后腋窩皮膚Western blotting及PCR結(jié)果顯示術(shù)后ABCC11/MRP8和ApoD表達(dá)明顯減少或無表達(dá)。不同嚴(yán)重程度與治愈率檢驗(yàn)分析顯示：中度及輕度患者的治愈率相對重度較高,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義； 結(jié)論： 1.ABCC11基因rs17822931位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性是腋臭形成的重要遺傳因素,G型等位基因的存在是腋臭發(fā)生的遺傳基礎(chǔ)；該基因在腋窩大汗腺中特異性的表達(dá),其表達(dá)水平在不同基因型存在差異,影響腋臭的嚴(yán)重程度。ABCC11基因rs17822931位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性基因型的檢測可作為臨床上客觀診斷及評價(jià)腋臭的參考依據(jù)之一； 2.ABCC11不同基因型的頂泌汗腺內(nèi)蛋白表達(dá)水平及mRNA水平存在差異,該基因可能是通過調(diào)控轉(zhuǎn)運(yùn)多種脂類腋臭前體物質(zhì)的蛋白量,直接影響臭味物質(zhì)的分泌,從而決定腋臭的發(fā)生。 3.不同腋臭嚴(yán)重程度頂泌汗腺ABCC11/MRP8及ApoD的表達(dá)水平不同,術(shù)后兩種蛋白的水平明顯減少,兩種蛋白的表達(dá)水平呈正相關(guān),但相關(guān)性較弱。ABCC11/MRP8及ApoD檢測有助于腋臭的診斷及療效評判。 4.ABCC11基因單核苷酸位點(diǎn)多態(tài)性的不同基因型對大汗腺的生長增值及新陳代謝存在一定的影響,但其具體機(jī)制有待進(jìn)一步的研究。圖25幅,表23個(gè),參考文獻(xiàn)65篇
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R758.741

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本文編號：1245225