發(fā)布時間：2017-11-15 08:19

  本文關(guān)鍵詞：組織工程皮膚新模型的刺激試驗研究

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【摘要】：目的構(gòu)建以人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞HaCaT為種子細(xì)胞,絲素蛋白修飾聚酯/聚酰胺的無紡布支架的組織工程皮膚模型,并與動物實驗作對比,觀察這自制模型的靈敏度、特異度和準(zhǔn)確性差別和優(yōu)劣,為該組織工程皮膚模型取代動物模型提供相應(yīng)的實驗依據(jù)。方法1采用含血清的高糖培養(yǎng)基對HaCaT細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng),待細(xì)胞生長達(dá)到80%時,接種于絲素蛋白修飾的聚酯/聚酰胺的無紡布支架上,利用掃描電鏡觀察接種后第一天、第三天HaCaT細(xì)胞在支架上的生長狀況與空白支架進(jìn)行對照,檢測HaCaT細(xì)胞在支架材料上的黏附和增殖情況。2以絲素蛋白修飾的聚酯/聚酰胺無紡布為支架,熱塑形成托盤狀,大小適合于24孔板,將成纖維細(xì)胞接種培養(yǎng)4天后,再接種人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞培養(yǎng),待3天左右細(xì)胞相互融合長滿支架時將模型氣-液面培養(yǎng)2周,構(gòu)建出檢測用的組織工程皮膚模型。將培養(yǎng)不同時間的皮膚模型進(jìn)行石蠟切片并常規(guī)HE染色,觀察皮膚模型的細(xì)胞分層狀態(tài)。3從歐洲替代方法實驗驗證中心(ECVAM)規(guī)定用于皮膚刺激性的物質(zhì)中選取20種化學(xué)品,刺激物局部接觸皮膚模型后,應(yīng)用MTT比色法測定細(xì)胞相對活力,然后收集條件培養(yǎng)基用ELISA法檢測IL-1α因子,評價構(gòu)建的皮膚模型的靈敏度和特異性。4將20種化學(xué)品在動物體內(nèi)進(jìn)行急性經(jīng)皮試驗,根據(jù)紅斑、水腫等皮膚反應(yīng)來評價化學(xué)品的皮膚刺激強(qiáng)度。結(jié)果1絲素蛋白修飾用熱塑形成托盤狀的聚酯/聚酰胺復(fù)合無紡布支架,其本身形成許多微孔結(jié)構(gòu)有一定的通透性,HaCaT細(xì)胞能在支架上良好的生長并可以黏附在無紡布纖維上。2將HaCaT細(xì)胞和成纖維細(xì)胞成功接種到絲素蛋白修飾的聚酯/聚酰胺復(fù)合無紡布支架上氣-液培養(yǎng)2周后,HE染色法和掃描電鏡的觀察初步形成15層左右復(fù)層細(xì)胞層與天然細(xì)胞的層數(shù)很相似,但未形成角質(zhì)層。3選取了20種化學(xué)品在組織工程皮膚模型上成功的進(jìn)行了檢測,結(jié)果顯示皮膚模型的敏感性為72.7%,特異性為77.8%,準(zhǔn)確率為75%。4構(gòu)建的皮膚模型與動物模型作對比,有4種化學(xué)品判斷出現(xiàn)錯誤。結(jié)論1成功制備了以絲素蛋白修飾的用熱塑形成托盤狀的聚酯/聚酰胺復(fù)合無紡布支架,為本課題研究提供較好的支架材料。2以HaCaT細(xì)胞為種子細(xì)胞在絲素蛋白修飾的無紡布支架上生長一段時間能進(jìn)行分化和分層,已經(jīng)初步構(gòu)建組織工程皮膚模型。3利用體外構(gòu)建的組織工程皮膚模型對ECVAM規(guī)定的檢測物質(zhì)中選取20種化學(xué)品進(jìn)行檢測,結(jié)果顯示自己構(gòu)建的皮膚模型的檢測的準(zhǔn)確率達(dá)到75%左右。
【學(xué)位授予單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R751

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本文編號：1189040