本文關(guān)鍵詞：大鼠間充質(zhì)干細(xì)胞對小鼠黑色素瘤影響的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的：惡性黑色素瘤（malignant melanoma,MM）來源于黑色素細(xì)胞，是一種惡性程度較高的具有黑色素細(xì)胞分化的惡性腫瘤，占所有惡性腫瘤的1%～2%，大部分發(fā)生于皮膚［1-2］，其次為直腸、肛門、生殖道、消化道、鼻竇、喉、肺等，也可發(fā)生于脈絡(luò)膜及軟腦膜處［3-5］。惡性黑色素瘤占皮膚腫瘤的7%～20%，近年來其發(fā)生率呈明顯增高趨勢。與黑色素瘤發(fā)生的相關(guān)因素有遺傳、紫外線、色素痣等。因惡性黑色素瘤病理組織學(xué)和細(xì)胞學(xué)形態(tài)的多樣性，部分腫瘤不含黑色素，容易誤診和漏珍。目前的治療方法常采用手術(shù)、生物、放療及化療，但效果不甚理想。因此尋求療效好、副作用小的治療方法是當(dāng)下研究的熱點(diǎn)問題。 間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)最早從骨髓中分離發(fā)現(xiàn)的,具有塑料貼壁性,呈纖維狀,能夠在體內(nèi)外分化為脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞及軟骨細(xì)胞,也可向其它生殖系統(tǒng)分化。由于MSCs具有多潛能的分化特性,最早是用來修復(fù)組織。近年來研究表明,它還具有抗增殖和抗炎癥的作用，同時還具有很好的遷移能力和腫瘤趨向性。在腫瘤生長的微環(huán)境中,腫瘤細(xì)胞及其周圍的纖維基質(zhì)可分泌各種細(xì)胞因子,能促進(jìn)MSCs向腫瘤部位遷移集聚、增殖分化,進(jìn)而影響腫瘤的生長。因此,關(guān)注和研究MSCs對腫瘤微環(huán)境的影響,MSCs用于臨床抗腫瘤治療研究方面有著重要的作用。 方法： 1用密度梯度離心法分離并純化大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，并且將MSCs細(xì)胞培養(yǎng)于含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基（含青霉素100U/ml，含鏈霉素100U/ml，PH7.2）中，放入37℃、5％CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行常規(guī)傳代培養(yǎng)。 2通過誘導(dǎo)，讓所得到的間充質(zhì)干細(xì)胞通過向成骨細(xì)胞和神經(jīng)元樣細(xì)胞分化，來驗(yàn)證其作為干細(xì)胞具有多向分化的潛能。 3將B16惡性黑色素瘤細(xì)胞培養(yǎng)于含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基（含青霉素100U/ml，含鏈霉素100U/ml，PH7.2）中，放入37℃、5％CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行常規(guī)傳代培養(yǎng)。 4黑色素瘤動物模型的制備：將小鼠黑色素瘤細(xì)胞B16向小鼠后肢皮下注射，制備黑色素瘤動物模型。 5動物模型制備完成后，隨機(jī)將小鼠分為A（對照組）、B（實(shí)驗(yàn)組）兩組，每組6只。 6動物實(shí)驗(yàn)A組小鼠注射生理鹽水，B組小鼠注射間充質(zhì)干細(xì)胞。讓小鼠自由進(jìn)食水，觀察并記錄腫瘤的生長情況。 7間充質(zhì)干細(xì)胞移植兩周后將小鼠全部處死，取下A、B兩組小鼠的腫瘤，做常規(guī)組織病理檢查。 8統(tǒng)計學(xué)分析運(yùn)用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。 結(jié)果： 1以密度梯度離心法分離純化的細(xì)胞，可逐步得到呈長梭形放射狀排列的細(xì)胞。 2通過誘導(dǎo)，所得到的間充質(zhì)干細(xì)胞可以向成骨細(xì)胞以及神經(jīng)元樣細(xì)胞分化。 3經(jīng)皮下注射小鼠黑色素瘤細(xì)胞B16的小鼠，1周后成瘤，2周時腫瘤明顯增大，小鼠活力正常。 4間充質(zhì)干細(xì)胞移植兩周后，小鼠活力正常，并將小鼠全部處死。A組小鼠部分腫瘤組織的頂端出現(xiàn)不同程度的破潰。B組小鼠未見明顯異常。 5A組（對照組）小鼠腫瘤組織直徑平均長度0.28cm，平均寬度0.18cm，平均濕重0.65g；B組（實(shí)驗(yàn)組）小鼠皮下脂肪基本消失，腫瘤直徑長度平均直徑2.35cm，平均寬度0.71cm；平均濕重7.90g，，部分腫瘤組織的頂端出現(xiàn)不同程度的破潰及出血。 6A組（對照組）顯微鏡下觀察：大部分、真皮的結(jié)構(gòu)正常，大量腫瘤細(xì)胞已侵襲真皮以下組織。腫瘤細(xì)胞大小不一，較大，染色深，呈紫黑色，可見較多核分裂。部分區(qū)域腫瘤組織密集排列，有成巢傾向，其周圍可見纖維組織間隔，血管分布少，腫瘤細(xì)胞呈多角形；部分腫瘤組織呈彌漫性分布，腫瘤間質(zhì)少，血管豐富，腫瘤細(xì)胞較大，呈圓心或橢圓形。腫瘤組織間血管豐富，管腔擴(kuò)張，內(nèi)充滿紅細(xì)胞，腫瘤組織密集排列區(qū)域，部分腫瘤細(xì)胞已侵入血管壁，管壁破壞，進(jìn)入管腔內(nèi)。間質(zhì)可見淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、漿細(xì)胞,有脂肪壞死。B（實(shí)驗(yàn)組）組顯微鏡下觀察：腫瘤組織已侵入表皮下，接近基底膜帶，核分裂象多見。腫瘤組織間血管數(shù)量明顯增多，血管直徑明顯增大。炎細(xì)胞與A組（對照組）相比可見淋巴細(xì)胞（較多）、中性粒細(xì)胞（中量）、漿細(xì)胞（少）。可見較多脂肪壞死。 7B組小鼠腫瘤平均重量7.90g、腫瘤平均體積0.659mm3，與A組小鼠腫瘤平均重量0.65g、腫瘤平均體積0.009mm3相比有明顯差異，統(tǒng)計分析P0.001，具有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論： 1腫瘤體積明顯增大，重量明顯增加，MSCs對黑色素瘤的生長可產(chǎn)生明顯的影響。 2腫瘤組織間血管數(shù)量明顯增多。 3MSCs腫瘤組織間可見較多淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及核塵，MSCs具有明顯的免疫調(diào)節(jié)性。
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R739.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1169176