發(fā)布時(shí)間：2017-11-10 00:33

  本文關(guān)鍵詞：PCBP1在皮膚鱗狀細(xì)胞癌干細(xì)胞維持中的作用研究

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【摘要】：目的：研究皮膚鱗狀細(xì)胞癌(Skin squamous-cell carcinoma, SCC)干細(xì)胞維持過程中多聚胞嘧啶結(jié)合蛋白PCBP1的表達(dá),并在體外和體內(nèi)驗(yàn)證其對(duì)SCC發(fā)生發(fā)展的作用,進(jìn)一步研究調(diào)控PCBP1在SCC干細(xì)胞維持過程中表達(dá)抑制的內(nèi)在分子機(jī)制。方法：1、采取無(wú)血清成球培養(yǎng)法從SCC細(xì)胞系COLO-16富集腫瘤干細(xì)胞(Cancer Stem Cells, CSCs),使之繼續(xù)增殖、去分化、建立較為穩(wěn)定的CSC細(xì)胞,利用流式細(xì)胞技術(shù)和免疫熒光技術(shù)驗(yàn)證細(xì)胞內(nèi)腫瘤自我更新標(biāo)志物和干細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)情況,判斷CSC建系是否成功.2、將上述CSC細(xì)胞正常連續(xù)培養(yǎng)3天,分別收取每天CSC細(xì)胞的RNA和總蛋白,利用定量PCR和免疫印跡實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CSC干性維持過程中PCBP1的表達(dá)變化。3、構(gòu)建PCBP1過表達(dá)的CSC細(xì)胞系和對(duì)照細(xì)胞系,通過軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)和裸鼠成瘤實(shí)驗(yàn)闡述PCBP1在SCC發(fā)生發(fā)展中的作用。4、利用生物信息學(xué)工具Targetscan發(fā)現(xiàn)PCBP1基因3'-UTR區(qū)域含有較為保守的微小NA-490-3p(miR-490-3p)種子序列,利用定量PCR驗(yàn)證miR-490-3p在CSC干性維持過程中的表達(dá)情況。5、富集多核糖體結(jié)合的mRNA,檢測(cè)翻譯依賴性的PCBP1 mRNA表達(dá),確認(rèn)PCBP1在CSC干性維持中表達(dá)下降的調(diào)控層面。6、構(gòu)建包含PCBP1基因3'-UTR區(qū)域的螢光素酶報(bào)告基因質(zhì)粒及對(duì)應(yīng)的突變質(zhì)粒,驗(yàn)證miR-490-3p表達(dá)改變對(duì)PCBP1的直接調(diào)控。7、進(jìn)一步在20例臨床SCC組織樣本中檢測(cè)miR-490-3pp和PCBP1的表達(dá),分析二者表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果：1、我們從COLO-16細(xì)胞系中成功富集、擴(kuò)增得到CD34陽(yáng)性的CSC細(xì)胞,干細(xì)胞標(biāo)志物如CD44、SSEA4、TR1-60、和TR1-81都呈陽(yáng)性表達(dá)。2.發(fā)現(xiàn)在CSC干性維持過程中,PCBP1基因mRNA水平表達(dá)較為穩(wěn)定,但隨CSC細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng),PCBP1蛋白表達(dá)顯著下降。3、在上述獲得的CD34+CD44+CSC細(xì)胞中過表達(dá)PCBP1,可顯著抑制其在體外的增殖能力和裸鼠體內(nèi)成瘤能力.4、發(fā)現(xiàn)miR-490-3p可靶向PCBP1基因3'-UTR,在CSC干性維持過程中miR-490-3p表達(dá)呈逐漸增加趨勢(shì)。5、多核糖體結(jié)合的iRNA中,PCBP1在CSC干性維持后期表達(dá)下降,證實(shí)其蛋白表達(dá)下降的機(jī)制是轉(zhuǎn)錄后的翻譯水平調(diào)控。6、PCBP1 3'-UTR體外熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)證實(shí)miR-409-3p的表達(dá)高低可直接影響螢光素酶活性,即PCBP1是miR-490-3p的真實(shí)靶點(diǎn)。7、SCC組織樣本中也發(fā)現(xiàn)miR-490-3p表達(dá)異常增加、PCBP1表達(dá)下降,二者表達(dá)呈負(fù)性相關(guān)。結(jié)論：PCBP1在SCC干細(xì)胞維持過程中蛋白表達(dá)下降,可抑制SCC體外增殖和體內(nèi)成瘤能力,其表達(dá)受到上游niR-490-3p的負(fù)向調(diào)控,二者在SCC組織中表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R739.5

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1 陳京杰;頭部皮膚鱗狀細(xì)胞癌1例[J];山東醫(yī)藥;2005年01期

2 Mehrany K.;Weenig R.H.;Lee K.K. ;崔榮;;慢性淋巴細(xì)胞性白血病患者的皮膚鱗狀細(xì)胞癌的轉(zhuǎn)移率和死亡率增加[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(皮膚病學(xué)分冊(cè));2006年03期

3 趙天恩;鄭家潤(rùn);;皮膚鱗狀細(xì)胞癌研究進(jìn)展[J];國(guó)際皮膚性病學(xué)雜志;2006年04期

4 呂全興;于桂英;;74例皮膚鱗狀細(xì)胞癌的臨床與病理分析[J];黑龍江醫(yī)學(xué);2010年06期

5 孫瑩;鄭華;于艷;陳曉偉;;皮膚鱗狀細(xì)胞癌74例臨床病理分析[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2010年19期

6 王俊啟;燙傷瘢痕繼發(fā)皮膚鱗狀細(xì)胞癌1例[J];中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志;1997年03期

7 黃云麗,李峰,余秀峰,呂昭萍,李紅賓;皮膚鱗狀細(xì)胞癌并短帚霉菌感染1例報(bào)告[J];云南醫(yī)藥;2004年03期

8 Lindel銉f B;Jarnvik J.;Ternesten-Bratel A. ;馮義國(guó);;器官移植受者患皮膚鱗狀細(xì)胞癌的病死率和臨床病理特征:瑞典的一項(xiàng)隊(duì)列研究[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(皮膚病學(xué)分冊(cè));2006年09期

9 楊穎濤;劉林]，

本文編號(hào)：1164310