本文關(guān)鍵詞：北京地區(qū)診斷新發(fā)麻風患者流行病學分析及PPAR-γ和ADRP在麻風多菌型患者脂代謝中可能作用的機制的研究

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【摘要】：麻風�。↙eprosy）是由麻風分枝桿菌引起的以侵犯皮膚和外周神經(jīng)為特征的慢性肉芽腫性傳染病。麻風分枝桿菌是1873年由挪威科學家Hansen發(fā)現(xiàn)，因此麻風病又名Hansen s Disease。根據(jù)患者感染的麻風菌量和人的細胞免疫強弱，麻風病可以分為結(jié)核樣型（TT），界限偏結(jié)核樣型（BT），界限型（BB），界限偏瘤型（BL），和瘤型（LL）。從TT到LL型患者，麻風菌量逐漸增多，傳染性逐漸增強。北京作為首都以及國際大都市，有大量的外來人口，北京友誼醫(yī)院北京熱帶醫(yī)學研究所是北京市唯一的麻風病診斷鑒別診斷，治療，康復，心理治療，隨診的專業(yè)單位。 目的：本研究對北京地區(qū)1990-2013年間診斷新發(fā)麻風病患者65例的流行病學、新發(fā)患者的誤診情況以及患者來源的地理分布進行了分析。 結(jié)果：65例患者中，男女比例2.25：1（男45，女：20）。20-60歲之間的患者占全部患者的87.7%（57/65）。其中30例為LL型，17例為BL型，3例為BB型，9例BT型，9例TT型。BL和LL型患者占總病例數(shù)的72.3%（47/65）。北京診斷新發(fā)患者來自全國的20個省，患者最多的省份是河南，山東，四川，其他包括天津，河北，吉林，黑龍江，甘肅，陜西，云南，廣西，湖南，貴州，浙江，江蘇，湖北，江西，重慶，安徽，此外，還有一例患者來自印度，北京地區(qū)診斷新發(fā)患者的診斷延遲期平均62.2個月(3月到20年)，其中瘤型患者延遲期最長。 在65位患者中，40位患者初次就診在綜合醫(yī)院，占總患者數(shù)的61,5%，大部分患者初診在綜合性醫(yī)院的皮膚科就診，但最終確診均在北京友誼醫(yī)院北京熱帶醫(yī)學研究所，并進行治療，隨診，監(jiān)測，追蹤等。 65位患者中，33位麻風患者的感染途徑為家內(nèi)接觸，占總例數(shù)的30.8%,提示麻風病有很明顯的家內(nèi)感染模式；鄰居，親戚等有明確的感染模式的占20%，沒有明確的傳染源的占49.2%。 麻風2級殘疾占到30.8%，1級和2級殘疾患者總比例為47.7%高于全國平均水平（30%）。多菌型患者有50例，遠多于少菌型患者15例，從出現(xiàn)癥狀到最終診斷的平均誤診時間是TT型平均181.5個月，BT型50.2個月，BB型53個月，BL型57.9個月，LL型57.9個月，所有的患者除一例外均為輸入性患者。 結(jié)論：雖然中國對外宣布在2007年消滅麻風，現(xiàn)在全國每年仍舊有1000-1200多例的新發(fā)患者，鑒于它引起的病人痛苦以及社會問題，我們有必要加大宣傳，加強監(jiān)測，提高實驗室水平，及時發(fā)現(xiàn)患者，及時治療，切斷傳染源，加強防控，為早曰實現(xiàn)為了一個沒有麻風病的世界而努力。 已知麻風�。↙eprosy）是由麻風分枝桿菌引起的以侵犯皮膚和外周神經(jīng)為特征的慢性肉芽腫性傳染病。麻風菌是1873年由挪威科學家Hansen發(fā)現(xiàn)，因此麻風病又名Hansen’s Disease。根據(jù)患者感染的麻風菌量和人的細胞免疫強弱，麻風病可以分為結(jié)核樣型（TT），界限偏結(jié)核樣型（BT），界限型（BB），界限偏瘤型（BL），和瘤型（LL）。從TT到LL型患者，麻風菌量逐漸增多，細胞免疫逐漸降低。和其他分枝桿菌一樣，麻風菌細胞膜含有大量的糖脂，，這一特點決定了麻風菌生存時間長，潛伏期長（20～30年），服藥時間長，療后并發(fā)癥時間長等特點。以往臨床觀察發(fā)現(xiàn)，多菌型型麻風病患者血漿膽固醇和低密度脂蛋白（LDL）較正常人低，提示該類病人脂類代謝有異于正常人，但其機制不明。本研究擬對麻風病患者感染細胞產(chǎn)生過氧化物酶體增殖物激活受體-（peroxisome proliferator activated receptors-，PPAR-γ）和脂肪分化相關(guān)蛋白（adipose diffrentiation-related protein，ADRP）進行檢測，以期研究該類物質(zhì)在麻風病患者脂代謝過程中的可能作用機制進行研究。 材料與方法：實驗技術(shù)主要包括： （一）利用液相色譜－質(zhì)譜方法及代謝組學以及生化技術(shù)，分析麻風患者血清與正常人血清的脂代謝圖譜差異，篩查麻風病患者和正常人血清（每組各5例）的脂類代謝標志物。 （二）將提取自多菌型患者皮損組織活麻風菌接種入鼠足墊，進行體內(nèi)培養(yǎng)。增殖18個月后，將裸鼠足墊的皮膚組織研磨器將其研磨至勻漿、肌腱和肌肉剝離下來，用剪刀剪碎。再用組織研磨器將其研磨至勻漿，通過計數(shù)確認細菌繁殖到107/ml。分別用活及死菌刺激多菌型麻風患者及正常人外周血單個核細胞（Peripheral blood mononuclear cell，PBMC）和巨噬細胞系THP-1，采用采用免疫熒光、免疫印染（Western blotting）及即時PRC(real time-PCR)技術(shù)揭示麻風菌感染宿主單核細胞作用過程中，單核細胞調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝基因PPAR-γ以及ADRP表達。 （三）應(yīng)用免疫組化及realtime-PCR檢測患者的皮損組織中PPAR-γ以及ADRP的表達水平，同時應(yīng)用電鏡觀察皮損組織內(nèi)脂滴樣物質(zhì)形成。 結(jié)果(一)：液相色譜－質(zhì)譜方法及代謝組學以及生化技術(shù)結(jié)果顯示多菌麻風患者的花生四烯酸、十二碳5烯酸、二十二碳6烯酸、亞麻酸、白三烯和二十二碳6烯酸等不飽和脂肪酸顯著高于正常人。相反。多菌型患者的膽固醇和低密度脂蛋白比正常人低，有統(tǒng)計學意義。 結(jié)果(二)：（1）免疫熒光標記檢測顯示，麻風菌活菌刺激48h后正常人PBMC可表達PPAR-γ和ADRP，而死菌刺激和陰性對照組則不表達；活菌、死菌刺激MB型患者的PBMC均可表達PPAR-γ和ADRP。麻風菌活菌刺激THP-1細胞系48h后，PPAR-γ和ADRP能夠表達，而死菌刺激和陰性對照組則不表達。（2）Western Blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)麻風菌活菌刺激48h后，正常人PBMC可表達PPAR-和ADRP，死菌刺激和對照則不表達�；罹退谰昂蛯φ沾碳ざ嗑突颊叩腜BMC均可表達PPAR-和ADRP。麻風菌活菌刺激THP-1細胞系48h后，PPAR-和ADRP表達最高，而死菌刺激和陰性對照不表達PPAR-和ADRP。（3）Realtime-PCR檢測顯示活菌刺激48h后正常人PBMC表達ADRP、PPAR-γ基因RNA均顯著高于死菌以及陰性對照組；刺激THP-148h后，活菌刺激組PPAR-γ及ADRP表達mRNA水平顯著高于死菌刺激和陰性對照組。結(jié)果(三)：ADRP，PPAR-在麻風患者皮損的表達。（1）Real time PCR結(jié)果顯示，多菌型型患者皮損的ADRP和PPAR-mRN表達顯著高于少菌型患者。（2）利用免疫組化檢測多菌型患者活檢組織顯示麻風菌附近可見ADRP和PPAR-。 （3）電鏡觀察顯示皮損組織內(nèi)麻風菌附近可見有脂滴樣物質(zhì)存在。結(jié)論：本部分實驗表明麻風菌的感染促進了ADRP和PPAR-的表達，而且該表達與脂滴形成有關(guān)。本論文為進一步研究麻風菌與脂類代謝的關(guān)系奠定了基礎(chǔ)。是否麻風菌的感染所誘導的ADRP和PPAR-產(chǎn)生與感染麻風桿菌過程中的脂類代謝異常，不飽和脂肪酸的增多，有利于細菌增殖以及抑制機體某些免疫功能等有待于進一步深入研究，有望從新的視角闡明脂代謝在麻風病患者免疫機制中的作用。
【學位授予單位】：首都醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R755

【參考文獻】

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1 徐成,王莉莉,曹穎林,李松;PPARs:脂代謝調(diào)節(jié)與胰島素增敏治療藥物的作用靶標[J];中國藥理學通報;2004年03期

2 亓立峰,許梓榮;過氧化物酶體增殖劑受體與脂質(zhì)代謝調(diào)控[J];中國獸藥雜志;2003年07期

本文編號：1149682