本文關(guān)鍵詞：顆粒蛋白前體在尋常型銀屑病發(fā)病中的作用及機(jī)制研究

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【摘要】：目的：尋常型銀屑病是一種常見(jiàn)的慢性復(fù)發(fā)性炎癥性皮膚病,主要臨床表現(xiàn)為皮膚紅斑、斑塊上覆蓋銀白色鱗屑,主要病理特征為表皮角質(zhì)形成細(xì)胞過(guò)度增殖和真皮局部炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。雖然至今為止,尋常型銀屑病的確切病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明,但是眾所周知,腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor, TNF)-α和白介素(interleukin, IL)-6在尋常型銀屑病發(fā)病中發(fā)揮著關(guān)鍵的致炎作用。顆粒蛋白前體(Progranulin, PGRN)是一種多功能的分泌性生長(zhǎng)因子,廣泛表達(dá)于多種組織,尤其是快速生長(zhǎng)的細(xì)胞中,參與胚胎發(fā)育、組織損傷修復(fù)、腫瘤發(fā)生、神經(jīng)退行性變等多種病理生理過(guò)程。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)PGRN還是一個(gè)多功能的免疫調(diào)節(jié)分子,可通過(guò)調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)中不同的關(guān)鍵性信號(hào)通路,在炎癥性疾病中發(fā)揮抗炎或促炎作用。PGRN作為腫瘤壞死因子受體(tumor necrosis factor receptor, TNFR)的一種新配體,能通過(guò)拮抗TNF-α信號(hào)通路在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型中發(fā)揮抗炎作用。而在肥胖和胰島素抵抗性糖尿病小鼠模型中,PGRN則可以通過(guò)調(diào)節(jié)IL-6信號(hào)途徑發(fā)揮促炎作用。但是,PGRN在尋常型銀屑病中的作用至今尚不清楚。因此,本研究擬通過(guò)檢測(cè)PGRN在尋常型銀屑病病人和小鼠疾病模型中的表達(dá),并觀察PGRN缺陷后對(duì)銀屑病樣小鼠模型的影響,從而探討PGRN在尋常型銀屑病發(fā)病中的作用及機(jī)制。方法：收集臨床標(biāo)本：收集20例正常人的血漿和皮膚組織,以及34例臨床和組織病理學(xué)檢查確認(rèn)的典型進(jìn)展期尋常型銀屑病患者皮損組織和治療前后的血漿,并記錄患者治療前后的銀屑病皮損面積和嚴(yán)重程度指數(shù)(Psoriasis Area and Severity Index, PASI)。檢測(cè)患者皮損和血清中PGRN的表達(dá)：以免疫組織化學(xué)法和實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(yīng)(Quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction, qRT-PCR)分別檢測(cè)正常人和尋常型銀屑病患者皮損中PGRN蛋白表達(dá)和mRNA的水平。以酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)檢測(cè)正常人和尋常型銀屑病患者治療前后血漿中PGRN、TNF-α和IL-6的水平。建立尋常型銀屑病樣小鼠模型：選擇10—12周齡的健康雄性C57BL/6小鼠,以0.01%豆蔻酰佛波醇乙酯(12-O-tetradecanoylphorbol 13-acetate, TPA)溶液涂抹小鼠耳部皮膚,誘導(dǎo)小鼠耳部皮膚發(fā)生尋常型銀屑病樣炎癥,建立尋常型銀屑病的小鼠模型。檢測(cè)小鼠模型中PGRN的表達(dá)：以免疫組織化學(xué)法和qRT-PCR法分別檢測(cè)未經(jīng)處理的野生鼠和尋常型銀屑病樣小鼠耳部皮損中PGRN蛋白和mRNA表達(dá)水平。檢測(cè)PGRN的作用及對(duì)CD4+T細(xì)胞亞群的影響：選擇10—12周齡的雄性C57BL/6遺傳背景的PGRN缺陷小鼠,以0.01%TPA溶液涂抹小鼠耳部皮膚,分別從組織病理和臨床表現(xiàn)上觀察小鼠耳部皮膚發(fā)生尋常型銀屑病樣炎癥的程度,并以流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)TPA處理后PGRN缺陷鼠和野生鼠頸部淋巴結(jié)和耳部皮損中Th1(CD4+IFN-γ+)、Th2 (CD4+IL-4+)、Th17 (CD4+IL-17+)和Treg (CD4+CD25+FoxP3+)細(xì)胞的水平。結(jié)果：與正常皮膚組織相比,尋常型銀屑病患者皮損中PGRN的蛋白表達(dá)和mRNA的水平均有明顯升高。尋常型銀屑病患者血漿中PGRN蛋白含量顯著高于正常人,且治療后患者血漿中PGRN含量明顯降低。尋常型銀屑病患者血漿中TNF-α和IL-6水平均顯著高于正常人,且血漿中TNP-α水平與PGRN水平呈顯著正相關(guān),但I(xiàn)L-6水平與PGRN水平無(wú)顯著相關(guān)性。尋常型銀屑病患者血漿中PGRN/TNF-α的比值與PASI評(píng)分呈顯著負(fù)相關(guān)。野生C57BL/6小鼠經(jīng)0.01% TPA溶液涂抹耳朵后,耳部皮膚出現(xiàn)明顯的紅斑、鱗屑和增厚,組織病理表現(xiàn)出棘細(xì)胞層增厚、表皮突延長(zhǎng)、角化不全、表皮微膿腫、表皮下炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。其臨床表現(xiàn)和組織病理均類似尋常型銀屑病病人,成功建立尋常型銀屑病小鼠模型。與未經(jīng)TPA處理的野生鼠相比較,尋常型銀屑病樣小鼠耳部皮損中PGRN蛋白表達(dá)和mRNA的水平均有明顯升高。PGRN缺陷鼠經(jīng)0.01% TPA溶液涂抹耳朵后,其耳部皮膚表現(xiàn)出比野生鼠更明顯的紅斑、鱗屑和增厚,組織病理顯示表皮增厚、表皮微膿腫、真皮毛細(xì)血管增生和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等現(xiàn)象更嚴(yán)重。PGRN缺陷鼠的臨床表現(xiàn)和組織病理均表現(xiàn)出比野生鼠更強(qiáng)的銀屑病樣炎癥反應(yīng)。TPA處理后的PGRN缺陷鼠頸部淋巴結(jié)和耳部皮損中Treg (CD4+CD25+FoxP3+)細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比例較野生鼠明顯降低,但兩組小鼠Th1(CD4+IFN-γ+)、Th2(CD4+IL-4+)、Th17(CD4+IL-17+)細(xì)胞的比例無(wú)明顯差異。結(jié)論：PGRN參與了尋常型銀屑病的發(fā)病過(guò)程,且通過(guò)增加皮損和局部淋巴結(jié)中Treg細(xì)胞的數(shù)量,在尋常型銀屑病中發(fā)揮抗炎性保護(hù)作用。尋常型銀屑病病人血漿中PGRN/TNF-α的比值是一個(gè)較好的反映疾病嚴(yán)重程度的指標(biāo)。PGRN作為一種內(nèi)源性的抗炎因子,在尋常型銀屑病中雖然升高,但不足以阻斷疾病的進(jìn)展,外源性補(bǔ)充PGRN能否緩解病情,值得我們進(jìn)一步研究。
【關(guān)鍵詞】：炎癥 顆粒蛋白前體 尋常型銀屑病 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R758.63
【目錄】：

• 英漢縮略語(yǔ)名詞對(duì)照5-7
• 摘要7-11
• 英文摘要11-16
• 前言16-19
• 第一部分 PGRN在尋常型銀屑病中的表達(dá)及意義19-37
• 1 實(shí)驗(yàn)材料20-25
• 2 實(shí)驗(yàn)方法25-30
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果30-34
• 4 討論34-37
• 第二部分 PGRN在尋常型銀屑病樣小鼠中的表達(dá)及意義37-48
• 1 實(shí)驗(yàn)材料38-40
• 2 實(shí)驗(yàn)方法40-42
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果42-45
• 4 討論45-48
• 第三部分 PGRN在尋常型銀屑病樣小鼠中的作用及機(jī)制48-64
• 1 實(shí)驗(yàn)材料48-51
• 2 實(shí)驗(yàn)方法51-57
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果57-61
• 4 討論61-64
• 全文總結(jié)64-65
• 參考文獻(xiàn)65-73
• 文獻(xiàn)綜述 顆粒蛋白前體在炎癥性疾病中的作用研究進(jìn)展73-83
• 參考文獻(xiàn)79-83
• 致謝83-84
• 攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與參加的重要學(xué)術(shù)會(huì)議84

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中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 肖青林,常開(kāi)齊,司本輝,閆韻洪,李積榮;銀膚欣系列治療尋常型銀屑病的臨床研究[J];天津中醫(yī);2000年02期

2 耿曉蘭,潘樹(shù)偉,郭景春;消u曇瘟蒲俺Ｐ鴕疾，

本文編號(hào)：1119855