本文關鍵詞：顆粒蛋白前體在尋常型銀屑病發(fā)病中的作用及機制研究

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【摘要】：目的：尋常型銀屑病是一種常見的慢性復發(fā)性炎癥性皮膚病,主要臨床表現(xiàn)為皮膚紅斑、斑塊上覆蓋銀白色鱗屑,主要病理特征為表皮角質(zhì)形成細胞過度增殖和真皮局部炎癥細胞浸潤。雖然至今為止,尋常型銀屑病的確切病因和發(fā)病機制尚未完全闡明,但是眾所周知,腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor, TNF)-α和白介素(interleukin, IL)-6在尋常型銀屑病發(fā)病中發(fā)揮著關鍵的致炎作用。顆粒蛋白前體(Progranulin, PGRN)是一種多功能的分泌性生長因子,廣泛表達于多種組織,尤其是快速生長的細胞中,參與胚胎發(fā)育、組織損傷修復、腫瘤發(fā)生、神經(jīng)退行性變等多種病理生理過程。近年來發(fā)現(xiàn)PGRN還是一個多功能的免疫調(diào)節(jié)分子,可通過調(diào)節(jié)免疫反應中不同的關鍵性信號通路,在炎癥性疾病中發(fā)揮抗炎或促炎作用。PGRN作為腫瘤壞死因子受體(tumor necrosis factor receptor, TNFR)的一種新配體,能通過拮抗TNF-α信號通路在類風濕性關節(jié)炎模型中發(fā)揮抗炎作用。而在肥胖和胰島素抵抗性糖尿病小鼠模型中,PGRN則可以通過調(diào)節(jié)IL-6信號途徑發(fā)揮促炎作用。但是,PGRN在尋常型銀屑病中的作用至今尚不清楚。因此,本研究擬通過檢測PGRN在尋常型銀屑病病人和小鼠疾病模型中的表達,并觀察PGRN缺陷后對銀屑病樣小鼠模型的影響,從而探討PGRN在尋常型銀屑病發(fā)病中的作用及機制。方法：收集臨床標本：收集20例正常人的血漿和皮膚組織,以及34例臨床和組織病理學檢查確認的典型進展期尋常型銀屑病患者皮損組織和治療前后的血漿,并記錄患者治療前后的銀屑病皮損面積和嚴重程度指數(shù)(Psoriasis Area and Severity Index, PASI)。檢測患者皮損和血清中PGRN的表達：以免疫組織化學法和實時定量逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈反應(Quantitative real-time reverse transcription polymerase chain reaction, qRT-PCR)分別檢測正常人和尋常型銀屑病患者皮損中PGRN蛋白表達和mRNA的水平。以酶聯(lián)免疫吸附實驗(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)檢測正常人和尋常型銀屑病患者治療前后血漿中PGRN、TNF-α和IL-6的水平。建立尋常型銀屑病樣小鼠模型：選擇10—12周齡的健康雄性C57BL/6小鼠,以0.01%豆蔻酰佛波醇乙酯(12-O-tetradecanoylphorbol 13-acetate, TPA)溶液涂抹小鼠耳部皮膚,誘導小鼠耳部皮膚發(fā)生尋常型銀屑病樣炎癥,建立尋常型銀屑病的小鼠模型。檢測小鼠模型中PGRN的表達：以免疫組織化學法和qRT-PCR法分別檢測未經(jīng)處理的野生鼠和尋常型銀屑病樣小鼠耳部皮損中PGRN蛋白和mRNA表達水平。檢測PGRN的作用及對CD4+T細胞亞群的影響：選擇10—12周齡的雄性C57BL/6遺傳背景的PGRN缺陷小鼠,以0.01%TPA溶液涂抹小鼠耳部皮膚,分別從組織病理和臨床表現(xiàn)上觀察小鼠耳部皮膚發(fā)生尋常型銀屑病樣炎癥的程度,并以流式細胞術檢測TPA處理后PGRN缺陷鼠和野生鼠頸部淋巴結(jié)和耳部皮損中Th1(CD4+IFN-γ+)、Th2 (CD4+IL-4+)、Th17 (CD4+IL-17+)和Treg (CD4+CD25+FoxP3+)細胞的水平。結(jié)果：與正常皮膚組織相比,尋常型銀屑病患者皮損中PGRN的蛋白表達和mRNA的水平均有明顯升高。尋常型銀屑病患者血漿中PGRN蛋白含量顯著高于正常人,且治療后患者血漿中PGRN含量明顯降低。尋常型銀屑病患者血漿中TNF-α和IL-6水平均顯著高于正常人,且血漿中TNP-α水平與PGRN水平呈顯著正相關,但IL-6水平與PGRN水平無顯著相關性。尋常型銀屑病患者血漿中PGRN/TNF-α的比值與PASI評分呈顯著負相關。野生C57BL/6小鼠經(jīng)0.01% TPA溶液涂抹耳朵后,耳部皮膚出現(xiàn)明顯的紅斑、鱗屑和增厚,組織病理表現(xiàn)出棘細胞層增厚、表皮突延長、角化不全、表皮微膿腫、表皮下炎癥細胞浸潤。其臨床表現(xiàn)和組織病理均類似尋常型銀屑病病人,成功建立尋常型銀屑病小鼠模型。與未經(jīng)TPA處理的野生鼠相比較,尋常型銀屑病樣小鼠耳部皮損中PGRN蛋白表達和mRNA的水平均有明顯升高。PGRN缺陷鼠經(jīng)0.01% TPA溶液涂抹耳朵后,其耳部皮膚表現(xiàn)出比野生鼠更明顯的紅斑、鱗屑和增厚,組織病理顯示表皮增厚、表皮微膿腫、真皮毛細血管增生和炎癥細胞浸潤等現(xiàn)象更嚴重。PGRN缺陷鼠的臨床表現(xiàn)和組織病理均表現(xiàn)出比野生鼠更強的銀屑病樣炎癥反應。TPA處理后的PGRN缺陷鼠頸部淋巴結(jié)和耳部皮損中Treg (CD4+CD25+FoxP3+)細胞占CD4+T細胞的比例較野生鼠明顯降低,但兩組小鼠Th1(CD4+IFN-γ+)、Th2(CD4+IL-4+)、Th17(CD4+IL-17+)細胞的比例無明顯差異。結(jié)論：PGRN參與了尋常型銀屑病的發(fā)病過程,且通過增加皮損和局部淋巴結(jié)中Treg細胞的數(shù)量,在尋常型銀屑病中發(fā)揮抗炎性保護作用。尋常型銀屑病病人血漿中PGRN/TNF-α的比值是一個較好的反映疾病嚴重程度的指標。PGRN作為一種內(nèi)源性的抗炎因子,在尋常型銀屑病中雖然升高,但不足以阻斷疾病的進展,外源性補充PGRN能否緩解病情,值得我們進一步研究。
【關鍵詞】：炎癥 顆粒蛋白前體 尋常型銀屑病 調(diào)節(jié)性T細胞
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R758.63
【目錄】：

• 英漢縮略語名詞對照5-7
• 摘要7-11
• 英文摘要11-16
• 前言16-19
• 第一部分 PGRN在尋常型銀屑病中的表達及意義19-37
• 1 實驗材料20-25
• 2 實驗方法25-30
• 3 實驗結(jié)果30-34
• 4 討論34-37
• 第二部分 PGRN在尋常型銀屑病樣小鼠中的表達及意義37-48
• 1 實驗材料38-40
• 2 實驗方法40-42
• 3 實驗結(jié)果42-45
• 4 討論45-48
• 第三部分 PGRN在尋常型銀屑病樣小鼠中的作用及機制48-64
• 1 實驗材料48-51
• 2 實驗方法51-57
• 3 實驗結(jié)果57-61
• 4 討論61-64
• 全文總結(jié)64-65
• 參考文獻65-73
• 文獻綜述 顆粒蛋白前體在炎癥性疾病中的作用研究進展73-83
• 參考文獻79-83
• 致謝83-84
• 攻讀博士學位期間發(fā)表的學術論文與參加的重要學術會議84

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1 肖青林,常開齊,司本輝,閆韻洪,李積榮;銀膚欣系列治療尋常型銀屑病的臨床研究[J];天津中醫(yī);2000年02期

2 耿曉蘭,潘樹偉,郭景春;消u曇瘟蒲俺Ｐ鴕疾，

本文編號：1119855