本文關(guān)鍵詞：上調(diào)核糖核酸酶抑制因子對小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞生長和凋亡的影響

  更多相關(guān)文章： 核糖核酸酶抑制因子 B細(xì)胞 增殖 凋亡 ILK/PIK/AKT信號通路

【摘要】：目的研究核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)基因表達對小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞生長和凋亡的影響。方法構(gòu)建RI真核表達質(zhì)粒p IRES2-EGFP-RI穩(wěn)定轉(zhuǎn)染B16細(xì)胞,未轉(zhuǎn)染和空質(zhì)粒作對照組(p IRES2-EGFP組),經(jīng)G418篩選出陽性克隆。RT-PCR、免疫印跡和免疫熒光檢測RI的表達;MTT檢測細(xì)胞的增殖;流式細(xì)胞術(shù)、TUNEL及Hochest33342檢測細(xì)胞周期及凋亡;Western blot檢測凋亡相關(guān)的蛋白及ILK/PI3K/AKT信號通路關(guān)鍵分子的表達;分別注射各組B16細(xì)胞到C57/BL小鼠建立移植瘤模型,觀察腫瘤的生長及腫瘤微血管的變化,進一步分析ILK/PI3K/AKT信號通路蛋白在腫瘤組織中的表達。結(jié)果轉(zhuǎn)染RI細(xì)胞組的RI mRNA和蛋白表達水平顯著升高;MTT結(jié)果顯示B16-RI細(xì)胞較對照組增殖能力明顯降低,流式細(xì)胞結(jié)果顯示B16-RI細(xì)胞的S期明顯增加,表明RI表達上調(diào)后細(xì)胞生長停滯于S期(P0.05);Hochest 33342、TUNEL及Annexin V和PI雙染色流式法細(xì)胞凋亡檢測結(jié)果證實,B16-RI細(xì)胞與對照組相比出現(xiàn)大量凋亡細(xì)胞(P0.01)及典型凋亡形態(tài)特征:染色質(zhì)凝集,核碎裂和明亮的藍(lán)色熒光等;Western blot結(jié)果顯示,與對照組相比,B16-RI細(xì)胞中ILK、p-Akt、p-GSK3β、Bcl-2及β-catenin的表達明顯降低,而活化的Caspase-3和Bax蛋白的表達顯著增加(P0.01);動物的移植瘤實驗結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)RI組的小鼠的瘤重顯著降低(P0.01),瘤組織中的血管密度明顯減少,同時ILK、p-Akt、p-GSK3β、β-catenin在瘤組織中表達減少。TUNEL腫瘤組織凋亡檢測結(jié)果與體外細(xì)胞一致。結(jié)論過表達RI可能通過調(diào)節(jié)ILK/PI3K/AKT信號通路顯著抑制了小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞的生長并誘導(dǎo)了B16細(xì)胞的凋亡。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院細(xì)胞生物學(xué)與遺傳學(xué)教研室;重慶醫(yī)科大學(xué)第一臨床學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 核糖核酸酶抑制因子 B細(xì)胞 增殖 凋亡 ILK/PIK/AKT信號通路
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81172424,81372203)~~
【分類號】：R739.5
【正文快照】： 上調(diào)核糖核酸酶抑制因子對小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞生長和凋亡的影響潘湘陽1,彭源2,陳俊霞1(400016重慶,重慶醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院:細(xì)胞生物學(xué)與遺傳學(xué)教研室1,第一臨床學(xué)院2)核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)是胞漿內(nèi)酸性蛋白的一種,包含有460個氨基酸殘基,相對分子

【參考文獻】

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【相似文獻】

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本文編號：1114767