本文關鍵詞：上調核糖核酸酶抑制因子對小鼠黑色素瘤B16細胞生長和凋亡的影響

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【摘要】：目的研究核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)基因表達對小鼠黑色素瘤B16細胞生長和凋亡的影響。方法構建RI真核表達質粒p IRES2-EGFP-RI穩(wěn)定轉染B16細胞,未轉染和空質粒作對照組(p IRES2-EGFP組),經(jīng)G418篩選出陽性克隆。RT-PCR、免疫印跡和免疫熒光檢測RI的表達;MTT檢測細胞的增殖;流式細胞術、TUNEL及Hochest33342檢測細胞周期及凋亡;Western blot檢測凋亡相關的蛋白及ILK/PI3K/AKT信號通路關鍵分子的表達;分別注射各組B16細胞到C57/BL小鼠建立移植瘤模型,觀察腫瘤的生長及腫瘤微血管的變化,進一步分析ILK/PI3K/AKT信號通路蛋白在腫瘤組織中的表達。結果轉染RI細胞組的RI mRNA和蛋白表達水平顯著升高;MTT結果顯示B16-RI細胞較對照組增殖能力明顯降低,流式細胞結果顯示B16-RI細胞的S期明顯增加,表明RI表達上調后細胞生長停滯于S期(P0.05);Hochest 33342、TUNEL及Annexin V和PI雙染色流式法細胞凋亡檢測結果證實,B16-RI細胞與對照組相比出現(xiàn)大量凋亡細胞(P0.01)及典型凋亡形態(tài)特征:染色質凝集,核碎裂和明亮的藍色熒光等;Western blot結果顯示,與對照組相比,B16-RI細胞中ILK、p-Akt、p-GSK3β、Bcl-2及β-catenin的表達明顯降低,而活化的Caspase-3和Bax蛋白的表達顯著增加(P0.01);動物的移植瘤實驗結果顯示,轉RI組的小鼠的瘤重顯著降低(P0.01),瘤組織中的血管密度明顯減少,同時ILK、p-Akt、p-GSK3β、β-catenin在瘤組織中表達減少。TUNEL腫瘤組織凋亡檢測結果與體外細胞一致。結論過表達RI可能通過調節(jié)ILK/PI3K/AKT信號通路顯著抑制了小鼠黑色素瘤B16細胞的生長并誘導了B16細胞的凋亡。
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院細胞生物學與遺傳學教研室;重慶醫(yī)科大學第一臨床學院;
【關鍵詞】： 核糖核酸酶抑制因子 B細胞 增殖 凋亡 ILK/PIK/AKT信號通路
【基金】：國家自然科學基金(81172424,81372203)~~
【分類號】：R739.5
【正文快照】： 上調核糖核酸酶抑制因子對小鼠黑色素瘤B16細胞生長和凋亡的影響潘湘陽1,彭源2,陳俊霞1(400016重慶,重慶醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院:細胞生物學與遺傳學教研室1,第一臨床學院2)核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)是胞漿內酸性蛋白的一種,包含有460個氨基酸殘基,相對分子

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本文編號：1114767