本文關(guān)鍵詞：一氧化氮在ALA光動力誘導人皮膚鱗癌A431細胞凋亡中的作用研究

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【摘要】：目的： 探索5-氨基酮戊酸光動力(5-aminolevulinic acid photodynamic therapy, ALA-PDT)誘導人皮膚鱗癌A431細胞凋亡過程中NO的作用,以深入認識ALA-PDT治療鱗狀細胞癌的分子機制。 方法： 1、培養(yǎng)人皮膚鱗癌A431細胞,CCK-8法檢測細胞增殖情況。 2、在最佳ALA孵育濃度1mM,最佳孵育時間點5h時,采用30mW/cm2功率密度的630nm紅光作為光源,給予不同光劑量(2J/cm2,4J/cm2)對A431細胞進行ALA-PDT處理,采用磷脂結(jié)合蛋白V (Annexin V)/碘化丙錠(PI)雙染法通過流式細胞術(shù)檢測ALA-PDT后不同時間點(4h,12h,20h,24h),人皮膚鱗癌A431細胞凋亡情況。 3、western blot法檢測各時間點A431細胞內(nèi)iNOS的表達情況。 4、Griss法檢測ALA-PDT后不同時間點(4h,12h,20h,24h) A431細胞培養(yǎng)上清中NO的釋放情況。 5、通過上述實驗確定最佳光照劑量及最佳的觀察時間點,在ALA-PDT處理的同時分別給予iNOS抑制劑1400w和外源性NO供體SNP, CCK-8法檢測各組A431細胞增殖情況,倒置相差顯微鏡及HE染色后觀察凋亡的形態(tài)學變化及細胞的嗜酸性變化,同時采用磷脂結(jié)合蛋白V (Annexin V)/碘化丙錠(PI)雙染法通過流式細胞術(shù)檢測ALA-PDT誘導人皮膚鱗癌A431細胞的凋亡情況。 結(jié)果： 1、成功培養(yǎng)了A431細胞,觀察其正常形態(tài)并繪制了其生存曲線。 2、流式細胞術(shù)檢測到ALA-PDT組A431細胞凋亡率隨著時間的增加而增加,且光劑量為4J/cmm2時細胞凋亡率較2J/cmm2多,呈一定的時間及劑量依賴性,較其他對照組有明顯統(tǒng)計學差異(p0.05)。 3、Griss法檢測到ALA-PDT處理后NO水平隨著時間的增加而增加,且光劑量為4J/cm2時產(chǎn)生的NO量較2J/cm2多,呈一定的時間及劑量依賴性,較其他對照組有統(tǒng)計學差異(p0.05),且western blot檢測到光劑量2J/cm2時ALA-PDT組iNOS的表達量隨時間增加而增加。 5、分別給予iNOS抑制劑1400w和外源性NO供體SNP后,ALA-PDT組、ALA-PDT聯(lián)合1400w組、ALA-PDT聯(lián)合SNP組及單純SNP組與單純ALA組、單純照光組、空白對照組相比細胞存活率明顯降低,有統(tǒng)計學意義(p0.05), ALA-PDT聯(lián)合1400w組細胞生存率較ALA-PDT組高,而ALA-PDT聯(lián)合SNP組較ALA-PDT組生存率低,單純SNP組細胞較ALA-PDT聯(lián)合SNP組高,差異均有統(tǒng)計學意義(p0.05)。 6、倒置相差顯微鏡下可見ALA-PDT聯(lián)合1400w組、ALA-PDT組、ALA-PDT聯(lián)合SNP組細胞及單純SNP組細胞與單純ALA組、單純635nm紅光組及空白對照組相比,細胞皺縮、變圓,ALA-PDT聯(lián)合SNP組細胞皺縮、變圓程度較ALA-PDT聯(lián)合1400w組、ALA-PDT組強,ALA-PDT組次之,ALA-PDT聯(lián)合1400w組相對較弱。 7、HE染色后光鏡下可見ALA-PDT聯(lián)合1400w組、ALA-PDT組及ALA-PDT聯(lián)合SNP組細胞組、單純SNP組與單純ALA組、單純635nm紅光組及空白對照組相比,嗜酸性染色增強,ALA-PDT聯(lián)合SNP組細胞體積縮小,胞質(zhì)致密、嗜酸性染色增強程度較ALA-PDT聯(lián)合1400w組、ALA-PDT組、單純SNP組強,視野下呈樹葉散落狀,ALA-PDT組次之,ALA-PDT聯(lián)合1400w組相對較弱。 8、流式細胞術(shù)檢測到ALA-PDT組、ALA-PDT聯(lián)合1400w組及ALA-PDT聯(lián)合SNP組細胞凋亡率與單純ALA組、單純635nm紅光組、單純1400w組及空白對照組相比明顯增高(p0.05)。 結(jié)論： 1、ALA-PDT可以抑制人皮膚鱗癌A431細胞的增殖；小劑量的ALA-PDT主要通過凋亡方式誘導鱗癌A431細胞死亡,且有一定的時間劑量依賴性； 2、A431細胞株本身可以釋放少量的NO,在ALA-PDT治療過程中NO的產(chǎn)生量增多,且呈一定的時間劑量依賴性,而NO的產(chǎn)生受其上游iNOS合酶的限制,NOS表達量上調(diào)可致細胞內(nèi)源性NO的釋放增多,同時可釋放到細胞外； 3、NO在ALA-PDT誘導A431細胞的凋亡過程中起著促進用,外源性給予NO供體可與ALA-PDT起著協(xié)同作用。
【關(guān)鍵詞】：5-氨基酮戊酸光動力療法 人表皮鱗癌 一氧化氮 誘導型一氧化氮合酶 凋亡 誘導型一氧化氮合酶抑制劑 1400w 一氧化氮供體 SNP
【學位授予單位】：揚州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R739.5
【目錄】：

• ~.略詞表4-5
• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 前言12-17
• 第一部分 研究ALA-PDT誘導人皮膚鱗癌A431細胞凋亡中的NO釋放情況及iNOS表達情況17-30
• 引言17
• 材料與方法17-25
• 結(jié)果25-28
• 討論28-30
• 第二部分 初步探索NO在ALA-PDT誘導人皮膚鱗癌A431細胞凋亡中的作用30-41
• 引言30
• 材料與方法30-35
• 結(jié)果35-39
• 討論39-41
• 全文小結(jié)41-42
• 參考文獻42-47
• 碩士期間發(fā)表與待發(fā)表文章47-48
• 綜述48-57
• 參考文獻53-57
• 致謝57-58

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 宋勇;孫聃;張?zhí)K娟;鄭新亮;;鈣信號在光動力療法中的產(chǎn)生及作用[J];細胞生物學雜志;2008年01期

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3 王秀麗,王宏偉,張春榮;δ-氨基酮戊酸光動力療法治療尖銳濕疣的機理探討[J];中國皮膚性病學雜志;2001年04期

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本文編號：1091837