發(fā)布時間：2017-10-18 14:29

  本文關鍵詞：皮膚組織中小汗腺自發(fā)熒光現(xiàn)象及其共聚焦λ掃描分析

  更多相關文章： 小汗腺 自發(fā)熒光 熒光顯微鏡 激光掃描共聚焦顯微鏡 皮膚組織

【摘要】：背景100年前,Stubel發(fā)現(xiàn)了細胞和組織產(chǎn)生的自發(fā)熒光可以應用于疾病的診斷[1];Policard在1924年報道了關于腫瘤組織的自發(fā)熒光是來源于自發(fā)熒光基團的研究[2];50年前,有研究描述了嗜酸性粒細胞的自發(fā)熒光現(xiàn)象并且提出其應用于診斷和治療的可能性[3,4]。然而,由于自發(fā)熒光具有熒光強度低、光譜復雜的難測性,限制了其研究的進展。最近,由于熒光顯微鏡,激光掃描共聚焦顯微鏡(confocal laser scanning microscope,CLSM)等高敏感度,低信噪比設備的出現(xiàn),我們實現(xiàn)了對自發(fā)熒光可靠的觀察和測量。因此,測量組織和細胞自發(fā)熒光特性和強度的相關技術在科學研究和臨床診斷方面有了應用價值,被再次重視起來。近年來在醫(yī)學領域當中關于自發(fā)熒光的研究還主要集中于視網(wǎng)膜疾病、消化系統(tǒng)疾病、呼吸系統(tǒng)腫瘤等幾種疾病的病理過程中,并應用于這些疾病的診斷和治療中。[5-13]。皮膚自發(fā)熒光產(chǎn)生的原因在于皮膚組織中內(nèi)在的熒光基團,以及在某些病理變化中產(chǎn)生的內(nèi)源性和外源性的自發(fā)熒光物質(zhì)。[14-16]皮膚組織中由于糖化反應沉積的晚期糖化終產(chǎn)物(advanced glycolsylation end products,AGEs)具有自發(fā)熒光現(xiàn)象,并與許多疾病具有密不可分的關系,例如動脈粥樣硬化、心血管系統(tǒng)疾病、糖尿病及相關并發(fā)癥、腎病、血液透析等[16-27]。而皮膚中小汗腺自發(fā)熒光鮮有報道,我實驗室在汗腺細胞的提取過程中偶然發(fā)現(xiàn)小汗腺細胞在熒光顯微鏡下的自發(fā)熒光現(xiàn)象,這引起我們的重視,進行了關于小汗腺自發(fā)熒光光學特性的研究。目的我們了解到皮膚產(chǎn)生的自發(fā)熒光監(jiān)測應用于很多疾病診斷和治療的過程中,而皮膚組織中的小汗腺并沒有自發(fā)熒光的相關文獻資料,在本次實驗過程中,我們首次發(fā)現(xiàn)并且描述了小汗腺的自發(fā)熒光現(xiàn)象,通過對小汗腺自發(fā)熒光特點和自發(fā)熒光強度的研究,可以在小汗腺相關疾病的診斷和治療起著重要的作用。方法將皮膚組織進行蘇木紅染色,并在熒光顯微鏡下觀察其中小汗腺的自發(fā)熒光現(xiàn)象;從志愿者的皮膚中提取出單個小汗腺細胞,進行小汗腺細胞體外培養(yǎng),在熒光顯微鏡下分別以紫外光、綠光、藍光三種不同激發(fā)光觀察小汗腺自發(fā)熒光以及熒光隨小汗腺生長的變化情況;利用激光掃描共聚焦顯微鏡(confocal laser scanning microscope,CLSM)l掃描測量小汗腺自發(fā)熒光的強度,進一步了解小汗腺自發(fā)熒光的光譜學信息并根據(jù)其熒光強度推測引發(fā)小汗腺自發(fā)熒光的熒光基團是哪些。結果蘇木紅染色后的小汗腺組織在綠色熒光蛋白GFP(green fluorescent protein,GFP)濾光系統(tǒng)(470/40 nm)下顯示出綠色自發(fā)熒光,N2.1濾光系統(tǒng)(515 560 nm)下顯示出紅色自發(fā)熒光;單獨的小汗腺細胞在熒光顯微鏡下則表現(xiàn)出更多顏色的自發(fā)熒光,紫外光的激發(fā)下顯示出藍色的自發(fā)熒光,藍色的激發(fā)光下顯示出綠色自發(fā)熒光,綠色的激發(fā)光下顯示出紅色的自發(fā)熒光,同時我們觀察到,隨小汗腺的生長,熒光強度沒有明顯減弱;CLSM?分層掃描種植于confocal皿中的小汗腺測量其自發(fā)熒光的強度,我們發(fā)現(xiàn)了兩個自發(fā)熒光峰值,分別在530nm和590nm附近,這表明了黃素和脂褐素可能是內(nèi)在的熒光基團。結論蘇木紅染色后的小汗腺組織的自發(fā)熒光可以簡單并且快速的幫助判斷小汗腺結構。單個小汗腺細胞的自發(fā)熒光強度隨汗腺生長沒有明顯減弱。根據(jù)小汗腺自發(fā)熒光的測量可以初步判定小汗腺自發(fā)熒光的發(fā)光基團是黃素和脂褐素。
【關鍵詞】：小汗腺 自發(fā)熒光 熒光顯微鏡 激光掃描共聚焦顯微鏡 皮膚組織
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R751
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-11
• 前言11-14
• 材料和器材14-15
• 1.1 實驗材料14
• 1.2 實驗器材14-15
• 實驗方法15-16
• 2.1 汗腺組織蘇木紅染色15
• 2.2 汗腺細胞的提取和培養(yǎng)15
• 2.3 熒光顯微鏡觀察15
• 2.4 激光掃描共聚焦顯微鏡λ掃描15-16
• 結果16-22
• 3.1 熒光顯微鏡下汗腺組織自發(fā)熒光特點16
• 3.2 熒光顯微鏡觀察汗腺細胞自發(fā)熒光隨生長變化情況16
• 3.3 激光掃描共聚焦顯微鏡λ掃描小汗腺熒光大小16-22
• 討論22-25
• 結論25-26
• 參考文獻26-32
• 綜述32-43
• 參考文獻37-43
• 攻讀學位期間發(fā)表文章情況43-44
• 致謝44-45

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4 蔡綏R，

本文編號：1055444